国家自然科学基金(30471512)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：姚云清谭燕李文桂陈雅棠唐滢浍更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院复旦大学更多>>
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- 卡氏肺孢子主要表面糖蛋白UCS基因siRNA表达载体的构建和鉴定被引量：5
- 2008年
- 目的:构建并鉴定艾滋病主要机会性感染病原体-卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)表达调控基因上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的短干扰性RNA(Short interfering RNA,siRNA)表达载体。方法:设计并人工合成针对PC MSG-UCS基因的短发夹状(Short hairpin RNA,shRNA)序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切与测序法进行鉴定。结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致。结论:成功构建和鉴定PC MSG-UCS基因的siRNA表达载体。
- 谭燕姚云清王莉妮唐滢浍李文桂马良陈雅棠
- 关键词：PCSIRNA
- siRNA治疗大鼠卡氏肺孢子菌肺炎的实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的:观察靶向卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)DNA上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)基因的siRNA对实验大鼠卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)的治疗效果。方法:地塞米松皮下注射大鼠8周建立PCP动物模型,分为4组:A组,pPC-UCS组;B组,磺胺组;C组,感染对照组;D组,pTZU6+1对照组。大鼠存活率、体重、肺组织病理学变化、肺印片PC包囊数、扫描电镜下PC表面结构变化、ELISA检测大鼠血清IL-8、TNF-α水平作为疗效指标。结果:①各组大鼠均存活,存活率比较无意义。②A组与B组大鼠体重分别增长(13.16±3.97)g与(14.21±3.90)g,明显高于C组(4.32±2.06)g与D组(5.38±1.19)g,P<0.05。③与C组和D组比较,A组和B组大鼠肺组织炎症明显减轻。④A组与B组每视野包囊均数分别为(3.61±0.40)个与(3.17±0.28)个,明显低于C组(8.34±0.55)个与D组(8.74±0.57)个,P<0.05。⑤扫描电镜下,C组与D组PC表面结构完整,有密集的微绒毛结构;A组与B组PC表面微绒毛脱落,表膜出现深大缺损。⑥大鼠血清IL-8水平:A组与B组分别为(232.50±36.27)pg/ml与(201.15±34.52)pg/ml,明显低于C组(596.85±61.72)pg/ml与D组(555.10±54.31)pg/ml,P<0.05;大鼠血清TNF-α水平:A组与B组分别为(145.20±80.72)pg/ml与(172.65±76.27)pg/ml,明显高于C组(31.58±8.47)pg/ml与D组(39.49±12.03)pg/ml,P<0.05。结论:靶向PC MSG-UCS基因的siRNA对大鼠PCP有治疗作用。
- 骆晓练姚云清谭燕梅林龚锐
- 关键词：SIRNA
- 卡氏肺孢子菌主要表面糖蛋白上游保守序列基因microRNA表达载体的构建和鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:构建和鉴定卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)表达调控基因上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的microRNA表达载体,并在体外转染到PC中观察其对PC的抑制作用。方法:设计并人工合成针对PC MSG-UCS基因的1对microRNA序列并定向克隆到表达载体pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFPmiR上,序列正确的载体用脂质体转染PC细胞,RT-PCR检测其对PC MSG-UCS基因的抑制作用,扫描电镜观察PC的超微结构变化。结果:凝胶电泳和测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致,其在mRNA水平能明显抑制PC的表达并能破坏PC的超微结构。结论:PC MSG-UCS基因的microRNA表达载体pPC-UCSm构建成功,并能在体外抑制PC的表达。
- 梅林姚云清朱艳玲骆晓练李文桂陈雅棠
- 关键词：卡氏肺孢子菌MICRORNA
- 卡氏肺孢子表面糖蛋白siRNA表达载体的构建和鉴定
- 2008年
- 目的:构建和鉴定卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surfce glycoprotein,MSG)基因短干扰性RNA(short interfering RNA,siRNA)表达载体。方法:设计并人工合成针对PC MSG基因的短发夹状(Short hairpin RNA,shRNA)序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切后凝胶电泳与DNA测序法进行鉴定。结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致。结论:成功构建卡氏肺孢子主要表面糖蛋白基因siRNA表达载体。
- 王莉妮姚云清谭燕唐滢浍李文桂马良陈雅堂
- 关键词：SIRNA
- 卡氏肺孢子胸腺嘧啶核苷酸合酶基因siRNA表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建和鉴定大鼠卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)胸腺嘧啶核苷酸合酶(Thymidylate synthase,TS)基因的siRNA(Short interfering RNA)表达载体。方法:人工合成针对PCTS基因的1对shRNA(Short hairpin RNA)序列并定向克隆到空载体pTZU6+1上,构建siRNA表达重组质粒pPC-TS,并采用双酶切产物凝胶电泳和基因测序法鉴定。结果:酶切电泳和基因测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致。结论:成功构建卡氏肺孢子胸腺嘧啶核苷酸合酶基因siRNA表达载体。
- 唐滢浍姚云清谭燕王莉妮李文桂刘成伟陈雅棠
- 关键词：SIRNA表达载体
- 重庆地区HIV阴性免疫力低下患者肺孢子感染率研究分析
- 2014年
- 目的:探讨重庆地区人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)阴性免疫力低下患者肺孢子(pneumocystis carinii,PC)感染率,为临床上HIV阴性患者合并PC感染的早期诊断及治疗提供生物学依据。方法:取71例HIV阴性免疫力低下患者的痰液标本,分别运用六亚甲基四胺银染色法(gomort methenamine silver stain,GMS)和内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)-巢式PCR法检测标本中肺孢子。结果:71例患者痰液标本中,GMS染色法检测出PC 2例,巢式PCR法检测出PC 25例,差异有统计学意义(χ2=21.04,P=0.000);不同性别患者PC感染率无统计学差异(χ2=0.375,P=0.540);不同年龄阶段患者PC感染率无统计学差异(χ2=0.777,P=0.678)。肿瘤放化疗后患者、血液系统疾病患者、肾移植患者、肝移植患者、结缔组织疾病患者感染率分别为33.33%、26.67%、40.00%、42.86%、39.13%,采用Fisher确切概率法对不同病例组感染率进行比较,各病例组间感染率差异无统计学意义(P=0.897),但本组病例PC感染率显著高于同期国外报道,与2009年国内报道感染率相当。结论:重庆地区HIV阴性免疫力低下患者PC感染率较高,临床医师应增强对该类患者是否合并PC感染的警觉性。
- 佘轩姚云清李佳俊马秀英颜成果
- 关键词：HIV阴性
- 乙肝表面抗原结合蛋白的红色荧光示踪分子的表达纯化和功能鉴定被引量：1
- 2011年
- 乙肝表面抗原结合蛋白（HBsAg binding protein，SBP）是本实验室发现的一种可以与乙肝表面抗原HBsAg特异性结合的人源蛋白，已被证实具有增强乙肝疫苗免疫效果的作用。DsRed—Monomer是来源于DsRed的人工突变体，作为蛋白表达的报告基因在真核细胞中使用。为探究SBP的作用机理，通过基因工程方法将该基因与DsRed—Monomer基因连接，克隆到原核表达载体，表达带有红色荧光的融合蛋白，该蛋白通过荧光激发检测显示荧光强度与蛋白量成正比例关系。同时该融合蛋白经过ELlSA方法检测可以与HBsAg特异性结合，使用常规方法和荧光量检测两种方法测定得到的该蛋白与HBsAg的亲和常数相似。首次证实了DsRed—Monomer在原核表达中可作为报告基因进行研究和使用，建立了利用荧光量检测蛋白的方法，与常规ELISA方法比较证明，大大缩短了试验时间和步骤，可以更方便的应用于分子示踪及其功能研究。
- 顾晨曦朱乃硕
- 关键词：红色荧光蛋白乙肝表面抗原
