国家自然科学基金(30960322)
- 作品数：11 被引量：44H指数：3
- 相关作者：黄天带华玉伟黄华孙周权男孙爱花更多>>
- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目中国热带农业科学院橡胶研究所基本科研业务费专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 橡胶树转基因植株遗传稳定性分析被引量：6
- 2013年
- 以GUS染色为阳性的抗性胚状体继代再生植株的叶片为材料,通过PCR分析结合GUS染色对橡胶树转基因植株进行初期的阳性鉴定。结果表明,在59份转基因再生植株中,两对特异引物的PCR扩增结果与GUS染色检测结果一致,其中37株仍然表现为阳性,而22株却检测不到目的基因的存在以及GUS基因的表达,表现为外源基因的丢失。因此,初步推测低选择压造成了早期阳性胚状体在长期的连续继代培养再生植株的过程中发生了外源基因的丢失现象,并结合现有的研究提出了初步的解决措施。
- 李季黄天带蔡海滨华玉伟黄华孙
- 关键词：橡胶树转基因检测基因丢失继代
- 根癌农杆菌介导的橡胶树花药愈伤组织遗传转化体系的建立被引量：32
- 2010年
- 为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不影响转化效率。2.2万个花药愈伤组织经EHA105菌株侵染后,转入未添加AS的培养基,22℃共培养6d,通过50mgL-1卡那霉素抗性筛选、叶片GUS染色、uidA和NptII基因PCR特异扩增、PCR产物测序及NptII基因Southern检测,鉴定出11株转基因植株,并通过嫁接和次生体胚发生,获得来自8个转基因株系的681株转基因植株,移栽成活253株。
- 黄天带李哲孙爱花周权男华玉伟黄华孙
- 关键词：橡胶树根癌农杆菌花药愈伤组织
- 基因型对橡胶树胚状体遗传转化瞬时表达影响的研究被引量：2
- 2012年
- 侵染后抗性胚状体诱导频率低是影响橡胶树遗传转化发展的主要原因,而橡胶树次生体胚发生体系具有体胚增殖效率及植株再生率高的优点。以3个综合性状优良的橡胶树无性系次生体细胞胚状体为受体,研究其对根癌农杆菌的耐侵染能力、GUS基因的瞬时表达情况,探讨不同无性系胚状体对农杆菌转化的反应。结果表明:3个无性系农杆菌污染情况无显著差异,长菌的外植体经无菌水和抗生素水洗涤3 d后即可恢复生长;侵染后每30个胚褐化了1.2～5个胚,占侵染总胚数的4.00%～16.67%,品种间褐化面积无显著差异;热研87-6-62的总蓝斑数显著高于其它2个无性系,平均每个胚染上14.29个蓝斑,热研7-33-97和PR107稍差,但每个胚也能分别染上8.14和8.72个蓝斑。因此3个无性系均可以胚状体作为遗传转化的受体。此结果对利用胚状体为受体改良橡胶树优良无性系奠定良好基础。
- 黄天带华玉伟周权男孙爱花戴雪梅
- 关键词：橡胶树胚状体受体
- 通过继代培养提高橡胶树体胚诱导频率的研究被引量：5
- 2012年
- 橡胶树体胚诱导频率低、正常胚状体比例低是影响橡胶树花药培养的重要限制因子。组织切片结果显示：50d的愈伤组织生长期实际上应划分为2个阶段：0．30d为愈伤诱导阶段．30-50d为胚性表达和愈伤增殖阶段，因此本试验以30d的橡胶树花药愈伤组织为材料，通过继代培养基的正交筛选，探索通过继代培养提高橡胶树体胚分化频率的途径。试验结果显示：橡胶树初代花药愈伤组织经过优化后的继代培养基继代培养1次后．分化的胚状体是不继代培养分化胚状体数量的4．29倍．而其中正常胚状体的数量是不继代的2．4倍。继代培养基包含4种激素．以6-BA的影响最大，其次为KT。优化的愈伤继代培养基为改良MS培养基添加6-BA0．1mg／L＋KT0．3mg／L＋3，4-D0．3mg／L＋ABA0．013mg／L。与传统橡胶树花药再生体系相比，本试验增加了愈伤组织继代这一程序，并摸索了适宜的继代培养基配方．使花药再生体系更加符合实际花药培养发育的过程，以提高橡胶树胚状体分化频率．促进橡胶树体胚苗产业的发展。
- 黄天带戴雪梅周权男孙爱花华玉伟黄华孙
- 关键词：橡胶树花药愈伤继代胚状体
- 系谱和聚类分析在橡胶树内珠被组织培养中应用研究被引量：2
- 2012年
- 分析16种不同基因型橡胶树幼果内珠被愈伤组织诱导率、分化率;追踪参试基因型系谱;并基于25对EST-SSRs分子标记数据对其进行聚类分析,研究系谱、聚类结果与体胚发生的关系。结果表明:16种基因型的愈伤诱导率均较高,位于68.46%～100%,7个基因型愈伤组织能诱导出体细胞胚状体,其中3个基因型能够较大量诱导体细胞胚状体,其余9个基因型的愈伤组织完全不具备分化能力;具有RRIM600亲缘的基因型体胚分化能力强,具有IAN873、PB5/51、热研217亲缘的基因型体胚分化能力弱或无体胚分化能力;16种基因型的相似系数位于0.56～0.89间,在遗传距离0.73时分为5类。体胚发生结果与系谱分析结果基本吻合,与聚类分析结果吻合度不大;提示可以利用系谱分析提高橡胶树组织培养的培养基筛选效率。最后讨论分子标记应用于组织培养的研究思路。
- 黄天带龙青姨周权男华玉伟胡彦师黄华孙
- 关键词：巴西橡胶树愈伤诱导体细胞胚发生系谱分析聚类分析
- 几丁质酶及β-1,3-葡聚糖基因转化橡胶树的研究被引量：2
- 2012年
- 旨在通过基因工程的方法提高橡胶树白粉病抗性。以高产、综合性状优良的大规模推广级品种‘热研7-33-97’15090块花药愈伤组织为受体,通过农杆菌介导将菜豆几丁质酶和烟草β-1,3-葡聚糖酶基因转入橡胶树,获得1386个抗性胚状体,其中277个通过次生体胚发生成功增殖。PCR结果表明有49个胚状体为阳性,转化效率为0.33%。通过农杆菌介导将菜豆几丁质酶和烟草β-1,3-葡聚糖酶基因转入橡胶树,PCR阳性率为0.33%,为通过基因工程手段提高橡胶树白粉病抗性奠定了良好的基础。
- 黄天带孙爱花杨加伟华玉伟黄华孙
- 关键词：橡胶树几丁质酶葡聚糖酶白粉病
- 抗氧化剂对橡胶树胚状体农杆菌侵染效果的影响被引量：2
- 2012年
- 以体细胞胚为侵染受体,通过在共培养基添加抗氧化剂来研究抗氧化剂对橡胶树农杆菌侵染效率的影响。结果表明,参试的4种抗氧化剂中,GUS基因瞬时表达效率高低顺序为硝酸银>二硫苏糖醇>L-半胱氨酸>硫代硫酸钠,共培养基中添加20 mg/L硝酸银的GUS瞬时表达率最高,染色总胚数最高达96.7%,显著高于对照76.7%。因此,抗氧化剂的应用有助于提高体细胞胚的农杆菌侵染效率。
- 李玉婷黄天带蔡海滨华玉伟黄华孙
- 关键词：巴西橡胶树体细胞胚抗氧化剂
- 橡胶树内珠被培养研究进展被引量：1
- 2011年
- 橡胶树自根幼态无性系是20世纪70年代末培育的新型种植材料,集中了实生苗和芽接苗的优点,具有生长快、产量高、茎干圆锥度大的特点,极有可能取代芽接苗成为第3代种植材料.内珠被培养是获得自根幼态无性系的重要手段,可经初级体胚发生或持续体胚发生再生植株.初级体胚/微繁植株长势好、产量高,但再生频率低;持续体胚发生再生频率高,但体胚/微繁植株变异、感病、产量低.利用持续体胚发生体系进行了超低温保存和遗传转化研究,均取得了成功.
- 黄天带孙爱花周权男戴雪梅黄华孙
- 关键词：橡胶树
- 转基因橡胶树中载体骨架序列的初步研究
- 2014年
- 以橡胶树转基因材料为研究对象,首次基于载体左右边界序列设计的特异引物进行载体骨架序列的初步PCR检测,结果表明,15个转基因阳性株系中有5个和2个株系分别含有左侧和右侧的边界序列,占33.3%和13.3%,结合这些株系PCR产物的序列分析结果进一步证实除T-DNA区以外的载体骨架序列确实整合到这些株系的植物基因组中。同时对载体骨架序列存在的弊端及可能的解决途径做了相应的分析。
- 李季黄天带蔡海滨华玉伟黄华孙
- 关键词：橡胶树转基因PCR
- AtFT基因植物表达载体的构建研究被引量：1
- 2013年
- FT是从拟南芥克隆得到的诱导植物开花调控基因。利用FT基因表达特点,克隆拟南芥FT基因片段,重组构建了以CaMV35S为启动子、GUS为报告基因的植物表达载体pCAMBIA2301-FT与pCAMBIA2300-FT:GUS,并采用农杆菌介导法转化橡胶树体细胞胚,通过GUS组织化学染色观察橡胶树体细胞胚瞬时表达情况,结果验证了重组构建的2个载体的有效性,为进一步研究FT基因在橡胶树中的功能及应用奠定基础。
- 李玉婷华玉伟黄天带蔡海滨黄华孙
- 关键词：巴西橡胶树植物表达载体体细胞胚
