国家转基因植物研究与产业化专项(ZJY-B-01)
- 作品数：5 被引量：39H指数：4
- 相关作者：朱祯李旭刚陈松彪曾千春路子显更多>>
- 相关机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家转基因植物研究与产业化专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 水稻EPSP合酶基因的克隆、结构分析和定位被引量：6
- 2002年
- 5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸（EPSP）合酶是芳香族氨基酸合成途径中的一个关键酶,该基因在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值.根据水稻EPSP合酶基因的EST序列设计探针,在水稻TAC基因组文库中筛选到16个阳性克隆.对阳性克隆E11进行亚克隆,由此获得了由3661核苷酸组成的水稻EPSP合酶基因全序列.序列分析和同源性比较揭示,该基因由8个外显子和7个内含子组成.以窄叶青8号/京系17组合构建的DH群体和分子图谱将水稻EPSP合酶基因定位于水稻第6条染色体的上端.
- 徐军望冯德江李旭刚常团结朱祯
- 关键词：EPSP合酶基因分离DNA序列染色体定位
- 有效去除农杆菌和籼稻转化系统优化被引量：19
- 2003年
- 为了提高根农杆菌籼稻转化效率 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck和潮霉素磷酸转移酶基因hpt分别置于紧密相连的 2个T -DNA上 ,构建载体 pCDMARUSCK -HPT ,电激法将表达载体转化农杆菌LBA4 40 4获得工程菌。比较了提门叮和国产噻孢霉素对工程菌LBA4 40 4的抑制效果 ,试验得出提门叮在 5 0 0mg/L以内比噻孢霉素能更有效地去除水稻细胞中的农杆菌 ,而且低浓度条件下 (2 5 0mg/L)就能有效地抑制工程菌LBA4 40 4 ,并且有利于水稻转化细胞成功地再生植株。确立了工程菌LBA4 40 4菌液浓度OD值 0 8,浸染时间 5min为明恢 86合适的转化参数。在此基础上 ,采用优化的农杆菌介导法转化杂交籼稻优良恢复系明恢 86 ,获得转基因植株 12 7个克隆 ,转化效率 4 5 %。
- 曾千春李旭刚马炳田陈松彪徐鸿林孟昆魏晓丽朱祯
- 关键词：籼稻农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
- Impact of Copy Number on Transgene Expression In Tobacco被引量：6
- 2002年
- 对农杆菌介导法获得的转 β_葡糖醛酸酶 (β_glucuronidase ,GUS)基因 (uidA)烟草 (NicotianatabacumL .)进行GUS表达分析 ,发现部分转基因植株无GUS活性。进一步Southern杂交结果发现 ,GUS基因失活植株的基因组中整合了多个uidA拷贝 ,而GUS活性高的转基因植株多为uidA单拷贝整合 ,表明uidA基因失活与基因多拷贝整合有关。Northern杂交结果显示 ,失活植株无特异uidARNA杂交带 ,而GUS活性高的植株可检测到明显的杂交信号 ,说明多拷贝引起的基因失活发生在RNA水平。
- 李旭刚陈松彪路子显常团结曾千春朱祯
- 玉米MAR序列的分离及其在转基因烟草中的功能研究被引量：1
- 2002年
- 从玉米基因组中分离了一段核基质结合区(MAR)序列,它位于乙醇脱氢酶1基因的5’端启动子区域.为研究此段MAR序列在转基因植物中的功能,将MAR构建在报告基因β-葡糖醛酸酶(GUS)基因(uidA)和植物选择标记新霉素磷酸转移酶Ⅱ基因(nptⅡ)的两侧形成植物表达载体,在载体中两段MAR之间的距离为6.2 kb.GUS活性检测表明,MAR序列对报告基因的表达水平没有影响.这一现象与MAR只构建在报告基因两侧形成小环时提高外源基因表达的结果不同,为进一步研究MAR作用机制提供了基础.
- 李旭刚陈松彪徐军望刘翔朱祯
- 关键词：玉米MAR序列转基因烟草基因表达
- 一个新的用于植物转化的双元质粒载体的构建及应用被引量：7
- 2001年
- 构建了一个适合农杆菌介导转化的双元T-DNA载体.载体pCNPT-Ⅱ含有与LacZ相连的多克隆位点,其分子量比常用的pBin19载体小了2.6 kb.多克隆位点靠近T-DNA的右边界,植物选择标记基因新霉素磷酸转移酶基因靠近T-DNA的左边界,当T-DNA从右边界向左边界依次转移时,使外源基因应先于选择标记基因整合进植物基因组,可以避免产生无外源目的基因的转化植株.以β-葡糖醛酸酶基因作报道基因构建了植物表达载体pCNPT-HGUSA,经农杆菌介导转化了烟草.分子检测表明,在外源目的基因与选择标记基因共整合的频率上,pCNPT-Ⅱ构建的植物表达载体强于pBin19来源的pB1121.
- 李旭刚路子显冯德江朱祯
- 关键词：农杆菌植物基因工程
