国家自然科学基金(30973162)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：王勇王克万韦美丹林继宗朱宁更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医科大学南方医院中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
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- 神经干细胞原代培养方法的优化被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨低浓度胰酶不同消化分离时间对体外培养新生大鼠海马NSCs增殖与凋亡的影响.方法 取出生24 h内SD大鼠海马组织,以1.25 g/L胰酶37℃分别消化5、10、15、20和25min（依次为A～E组）,获得单细胞悬液后进行培养.通过台盼蓝染色计数、细胞形态观察和神经球数目比较不同消化时间对NSCs活力和生长的影响;用5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法检测NSCs的增殖能力;用免疫荧光细胞化学法检测BrdU、nestin的表达：用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 原代和传代培养的NSCs都能快速增殖并形成神经球;免疫荧光染色结果显示神经球细胞均表达NSCs特异性标志物nestin;所获得的细胞能将BrdU结合到细胞核中;各组培养3、5、7 d后,C组（消化15 min）NSCs成球数最多,BrdU标记克隆率最高,细胞凋亡率最低,与其他组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 体外分离培养的新生大鼠海马NSCs具有增殖能力,1.25 g/L胰酶在不同消化时间对NSCs增殖能力和凋亡率的影响有所不同,消化时间过长或过短都会抑制NSCs增殖,诱导NSCs凋亡,且消化时间越长NSCs的凋亡率越高.
- 兰艳纤李金恒王克万王勇
- 关键词：神经干细胞海马胰酶细胞增殖细胞凋亡
- Blocking mPTP on neural stem cells and activating the nicotinic acetylcholine receptor α7 subunit on microglia attenuate Aβ-induced neurotoxicity on neural stem cells
- Background: β-Amyloid(Aβ) can stimulate microglia to release a variety of proinflammatory cytokines and induce...
- Qingzhuang ChenKewan WangDeqi JiangYan WangXiaodan XiaoNing ZhuMingxing LiSiyuan JiaYong Wang
- 关键词：MICROGLIAΒ-AMYLOID
- 外源性NAD^+对小胶质细胞激活诱导神经干细胞凋亡的作用及机制研究被引量：1
- 2019年
- 目的研究外源性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)对β-淀粉样蛋白(Aβ)介导小胶质细胞激活诱导神经干细胞凋亡的作用及对SIRT3/WNT信号通路的影响。方法利用Transwell系统共培养小鼠神经干细胞系C17.2(NSC)与小胶质细胞系BV-2,将C17.2细胞随机分为4组:空白组在下室培养C17.2细胞;对照组在下室培养C17.2细胞,并添加10μmol·L-1NAD+作用;模型组在上室培养BV-2细胞,下室培养C17.2细胞,并添加10μmol·L-1Aβ作用;实验组在上室培养BV-2细胞,下室培养C17.2细胞,10μmol·L-1NAD+预处理2 h后添加10μmol·L-1Aβ作用。以流式细胞术检测NSC凋亡率,以蛋白免疫印迹法检测NSC中SIRT3、DVL2、DVL3、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达情况。结果干预48 h,空白组、对照组、模型组及实验组NSC凋亡率分别为(4.88±0.62)%,(4.21±0.28)%,(8.06±0.24)%,(4.92±0.36)%。外源性NAD+添加能降低小胶质细胞激活诱导的NSC凋亡率升高(P<0.01)。蛋白免疫印迹法检测可见,与模型组比较,实验组细胞SIRT3、DVL2、DVL3、GSK3β、p-GSK-3β蛋白表达量升高(P<0.01),且与NAD+的作用时间具有相关性。结论 NAD+可抑制Aβ介导小胶质细胞激活诱发的NSC凋亡,与显著调节SIRT3及WNT信号通路中DVL2、DVL3、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达相关。
- 李静岚王宇航李智磊王勇
- 关键词：神经干细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸WNT信号通路
- 高频电刺激伏隔核对锂-匹鲁卡品癫痫大鼠急性发作期的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 探索伏隔核（NAc）深部电刺激（DBS）对锂一匹鲁卡品大鼠模型急性期癫痫发作的影响。方法实验大鼠按随机数字表顺序分为五组，DBS壳部组（A），DBS核部组（B），假处理壳部组（C），假处理核部组（D），对照组（E），每组6只大鼠。DBS组置入电极并给予高频率电刺激，假处理组置入电极不给予电刺激。对照组不置入刺激电极。电极置入1周后，大鼠腹腔注射锂一匹鲁卡品诱导癫痫发作。锂一匹鲁卡品给药后，马上给予DBS组大鼠高频率电刺激（130Hz，100μs，150μA）。观察大鼠行为发作强度和脑电图变化。结果高频率电刺激NAc壳部明显延长首次癫痫发作潜伏期（P〈0．05），减轻癫痫发作行为强度（P〈0．05），同时缩短第二阶段发作时程和总发作时程（P〈0．05）。而电刺激NAc核部对癫痫发作无明显改善。结论高频率电刺激NAc壳部明显抑制匹鲁卡品诱导的癫痫发作。
- 周琛斐王克万漆松涛欧阳辉杨开军徐波涛张丹
- 关键词：脑深部电刺激伏隔核颞叶癫痫
- 人HSP75基因重组腺病毒载体构建及在C17.2神经干细胞的表达
- 2015年
- 目的构建HSP75基因重组腺病毒载体,观察HSP75蛋白在C17.2神经干细胞中的表达。方法采用PCR方法从含人HSP75基因质粒中扩增HSP75基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点区域,构建重组穿梭质粒p HBAd-MCM-HSP75-GFP,在LipofiterTM转染试剂的介导下与腺病毒辅助骨架质粒p HBAd-BHGloxΔE1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒,TCID50法测定病毒滴度。使用荧光显微镜、流式细胞仪和Western blotting观察重组腺病毒在C17.2细胞中的感染情况及HSP75蛋白的表达水平。结果通过酶切鉴定、测序、PCR鉴定,HSP75基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒整合包装成重组腺病毒;重组腺病毒滴度为1.0×1010PFU/ml;Western blotting检测,转染后的神经干细胞表达HSP75蛋白。结论 HSP75重组腺病毒载体成功构建,对C17.2神经干细胞具有较高的表达效力。
- 王艳陈庆状蒋德旗李明星贾思远朱宁王勇
- 关键词：重组腺病毒载体C17.2神经干细胞
- Nicotine contributes to the neural stem cells fate against toxicity of microglial-derived factors induced by Aβ via the Wnt/β-catenin pathway
- Recent studies have demonstrated that the molecules secreted from microglias play important roles in the cell ...
- De-Qi JiangMei-Dan WeiKe-Wan WangYan-Xian LanNing ZhuYong Wang
- 关键词：NICOTINE
- Overexpression of mitochondrial Hsp75 protects neural stem cells against microglia-derived soluble factor-induced neurotoxicity by regulating mitochondrial permeability transition pore opening in vitro
- Microglia(Mg)-induced neurotoxicity,a major determinant of Alzheimer’s disease,is closely related to the survi...
- YAN WANGJIZONG LINQING-ZHUANG CHENNING ZHUDE-QI JIANGMING-XING LIYONG WANG
- 文献传递
- Overexpression of mitochondrial Hsp75 protects neural stem cells against microglia-derived soluble factor-induced neurotoxicity by regulating mitochondrial permeability transition pore opening in vitro
- Microglia(Mg)-induced neurotoxicity,a major determinant of Alzheimer’s disease,is closely related to the survi...
- YAN WANGJIZONG LINQING-ZHUANG CHENNING ZHUDE-QI JIANGMING-XING LIYONG WANG
- Overexpression of mitochondrial Hsp75 protects neural stem cells against microglia-derived soluble factor-induced neurotoxicity by regulating mitochondrial permeability transition pore opening in vitro
- Microglia(MG)-induced neurotoxicity, a major determinant of Alzheimer’s disease, is closely related to the sur...
- YAN WANGJIZONG LINQING-ZHUANG CHENNING ZHUDE-QI JIANGMING-XING LIYONG WANG
- 石杉碱甲的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨石杉碱甲(HupA)的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用。方法:取新生SD大鼠海马组织,分离并培养神经干细胞和小胶质细胞,建立Transwell共培养体系。将细胞分成3组:空白对照组、淀粉样β肽(Aβ)组和HupA组。Aβ组小胶质细胞层中加入终浓度为10μmol/L的Aβ1-42,HupA组于加入Aβ1-42前4 h用1μmol/L HupA预处理小胶质细胞。液相芯片技术检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)的表达,流式细胞术和Western blotting检测神经干细胞的凋亡。结果:小胶质细胞与神经干细胞共培养72 h后,与空白对照组相比,Aβ组IL-6、TNF-α和MIP-1α水平以及神经干细胞凋亡率(25.46%)均显著升高(P<0.01);HupA预处理小胶质细胞后,Aβ诱导的小胶质细胞炎症因子分泌显著减少,IL-6、TNF-α和MIP-1α的水平降低(P<0.01),同时神经干细胞凋亡率降低至8.05%(P<0.01)。Westernblotting检测结果显示,HupA组Bcl-2/Bax值显著高于Aβ组(P<0.05)。结论:石杉碱甲可以抑制小胶质细胞分泌细胞因子和趋化因子,减弱Aβ诱导的炎症反应,降低神经干细胞凋亡率,从而发挥抗炎和神经保护作用。
- 朱宁林继宗陈庆状韦美丹王勇
- 关键词：石杉碱甲小胶质细胞神经干细胞神经保护作用
