国家自然科学基金(30973178)
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
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- 6种常见耐药标志物在氟尿苷耐药绒癌细胞系构建过程中的动态表达被引量：3
- 2011年
- 目的:通过检测对氟尿苷(FUDR)耐药的绒癌细胞系构建过程中肺耐药相关蛋白(LRP)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、survivin、谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)、多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)6种常见耐药标志物的动态表达,探讨其耐药机制并进行耐药标志物的初步筛选。方法:用化学发光法和荧光定量PCR技术,分别检测不同浓度FUDR诱导的JEG-3细胞中β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的分泌量和上述6种常见耐药标志物在耐药细胞构建过程中的动态表达。结果:不同基因在药物诱导过程中的变化趋势不尽相同。只有LRP基因的表达随着诱导药物浓度和肿瘤细胞耐药性的增加而逐渐上调。结论:耐药的产生是分阶段的,不同阶段有不同的因素参与。就目前的研究结果而言,只有LRP的表达变化与FUDR诱导浓度和耐药性有明显正相关,提示其可以作为绒癌对FUDR耐药的候选预测指标。
- 韩冰向阳王铮王云张浩黄尚志
- 关键词：绒癌耐药氟尿苷
- 二氢叶酸还原酶在两种不同方式诱导的甲氨蝶呤耐药绒癌细胞系中的动态表达被引量：8
- 2010年
- 目的:用间断和连续两种诱导方式建立对甲氨蝶呤(MTX)耐药的绒毛膜癌细胞系,并动态检测二氢叶酸还原酶(DHFR)在两种耐药细胞系建立过程中的表达。方法:采用间断和连续诱导法诱导人绒癌细胞系JeG-3,分别建立绒癌MTX耐药细胞系MTXA1(间断诱导浓度为1.1×10-3mol/L)和MTXC2(连续诱导浓度为1.1×10-5mol/L)。细胞计数法(CCK-8)观察耐药细胞的耐药指数;化学发光法和荧光定量PCR技术分别检测不同诱导方法和不同浓度MTX诱导的JeG-3细胞中β人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的分泌量和DHFR mRNA的表达水平。结果:(1)历时1年成功建立了绒癌耐药细胞系MTXA1和MTXC2,其耐药指数分别为21.36和28.84;(2)β-HCG分泌和DHFR mRNA表达水平在间断和连续两种不同诱导方式诱导的绒癌细胞株中呈相同的动态变化趋势:经低浓度MTX诱导后,JeG-3细胞中β-HCG分泌和DHFR mRNA的表达水平上调;但当MTX诱导浓度增加到一定剂量时,两者不再继续上调而呈下降趋势。结论:成功建立了间断和连续两种方式诱导的耐药绒癌细胞系MTXA1和MTXC2。绒癌细胞β-HCG分泌和DHFR mRNA的表达与MTX作用浓度以及耐药性无明显的正相关关系。目前的研究结果表明,DHFR mRNA的表达水平不适宜作为绒癌细胞是否对MTX耐药的指标。
- 韩冰向阳王峥王云张浩黄尚志
- 关键词：绒毛膜癌甲氨蝶呤二氢叶酸还原酶人绒毛膜促性腺激素荧光定量PCR
- 内质网蛋白质折叠分子伴侣在氟尿苷耐药绒毛膜癌JeG-3／FUDRA细胞中的作用被引量：4
- 2013年
- 目的比较氟尿苷（FUDR）耐药的绒毛膜癌（绒癌）细胞系JeG．3／FUDRA细胞和其亲本细胞系JeG一3细胞（FUDR敏感）之间表达差异的蛋白质，探讨其在绒癌耐药发生中的作用。方法采用双向差异凝胶电泳（2-DE）技术筛选JeG一3／FUDRA细胞和JeG．3细胞之间表达差异的蛋白质，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）技术鉴定差异表达的蛋白质。利用靶基因功能的显著性（GO）分析和途径（Pathway）分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选，筛选出目的蛋白质。蛋白印迹法验证JeG一3／FUDRA细胞中目的蛋白质的表达；小分子干扰RNA（siRNA）干扰JeG一3／FUDRA细胞中目的蛋白质的表达后，观察其耐药性的变化。结果2-DE技术检测显示，在JeG-3／FUDRA细胞和JeG-3细胞中共筛选出46个差异表达的蛋白质，并经MALDI—TOF．MS技术鉴定证实其均为差异表达的蛋白质点；通过GO分析和Pathway分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选后发现，内质网蛋白质折叠分子伴侣钙网蛋白（CALR）、蛋白二硫异构酶A3（PDIA3）和相对分子质量为78000的葡萄糖调节蛋白（GRP78）在耐药细胞中表达均明显增高。蛋白印迹法检测显示，JeG-3／FUDRA细胞中CALR、PDIA3、GRF78蛋白的表达强度明显高于JeG-3细胞。干扰JeG一3／FUDRA细胞中CALR和PDIA3基因的表达后，JeG-3／FUDRA细胞的耐药性分别下降了76．3％（干扰前后分别为36．7±2．0和8．7±3．1，P〈0．05）和51．4％（干扰前后分别为36．7±2．0和17．8±1．2，P〈0．05）。结论内质网蛋白质折叠分子伴侣CALR、PDIA3、GRP78很可能参与了绒癌细胞FUDR耐药的发生。
- 韩冰向阳冯凤芝万希润钱海利张雪燕孟希亭林晨
- 关键词：绒毛膜癌蛋白质折叠氟尿苷
- 人绒毛膜促性腺激素和胸苷合成酶在氟尿嘧啶核苷连续诱导耐药绒癌细胞系构建过程中的动态表达
- 2011年
- 目的:通过检测氟尿嘧啶脱氧核苷(fluorodeoxyuridine,FUDR)连续诱导的耐药绒癌细胞构建过程中β-人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin,β-HCG)和胸苷合成酶(thymidylate synthase,TS)的动态表达,检验β-HCG分泌水平和TS基因的表达量是否适用于筛查绒癌细胞对该药耐药的指标。方法:采用连续诱导法,利用FUDR诱导人绒癌细胞系JeG-3,建立耐药细胞株JeG-3/FUDRC2;用化学发光法检测培养液上清中激素分泌水平,用荧光定量PCR检测TS mRNA在诱导过程中的动态表达。结果:(1)历时12月成功建立了绒癌耐药细胞系JeG-3/FUDRC2,其耐药指数为12.46±2.22;(2)随着药物浓度和肿瘤细胞耐药性的逐渐增加,绒癌细胞的β-HCG分泌最初表现为上调,诱导药物达到一定浓度时其分泌达到高峰,而后骤然下降,并有随药物浓度和耐药性的继续增加而逐渐下降的趋势;(3)低浓度药物诱导后,TS基因表达明显上调,但随着药物浓度和耐药性增加,其表达不升反降,甚至低于亲本细胞TS基因的表达量。结论:成功建立了连续诱导耐药的绒癌细胞株JeG-3/FUDRC2。绒癌细胞β-HCG分泌和TSmRNA表达与FUDR作用浓度以及耐药性无明显相关性。就目前的研究结果而言,β-HCG分泌和TS mRNA的表达水平不适宜用作绒癌细胞是否对FUDR耐药的指标。
- 韩冰向阳王铮王云张浩黄尚志
- 关键词：绒癌耐药绒毛膜促性腺激素
