国家自然科学基金(30973148)
- 作品数：21 被引量：75H指数：5
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- 相关机构：华中科技大学九江市妇幼保健院太和医院更多>>
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- 小鼠Prx2正义和反义真核表达载体的构建与表达
- 2011年
- 目的:构建小鼠Prx2正义及反义真核表达载体pEGFP-Nl-sPrx2、pEGFP-N1-aPrx2并在小鼠卵巢颗粒细胞中表达。方法:应用RT-PCR技术,从小鼠卵巢颗粒细胞提取的总RNA中,获得Prx2基因编码序列的正义及反义片段,克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至体外培养的未成熟小鼠颗粒细胞,通过荧光显微镜观察和Westernblot检测其在颗粒细胞中的表达改变。结果:酶切和测序证明重组真核表达载体pEGFP-N1-sPrx2、pEGFP-Nl-aPrx2构建成功,荧光显微镜观察及Western blot确认目标蛋白在颗粒细胞中表达增强或减弱。结论:成功构建小鼠Prx2基因正义及反义真核表达载体pEGFP-N1-sPrx2、pEGFP-N1-aPrx2并在小鼠卵巢颗粒细胞中表达。
- 杨书红吕兴罗爱月赖志文丁婷韩凌斐卢运萍王世宣
- 关键词：真核表达载体颗粒细胞小鼠
- Peroxiredoxin Ⅵ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达被引量：1
- 2013年
- 目的探讨Peroxiredoxin(PRDX)Ⅵ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达。方法分别选用C57BL/6j小鼠不同周龄、不同动情周期以及促性腺激素预处理卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测PRDXⅥmRNA表达。结果 PRDX Ⅵ mRNA在新生(3D)小鼠卵巢中表达为3周龄组的1.47倍、为6周龄组的3.89倍、为8月龄组的4.28倍(P<0.05);在小鼠动情前期卵巢中表达高于动情后期和动情间期(P<0.05);在促性腺激素预处理试验中,在孕马血清注射48 h后卵巢中表达是对照组的1.7倍,而人绒毛膜促性腺激素注射8、10及12 h后分别为对照组的0.44、0.41、0.54倍,而48 h后则为对照组的2.32倍(P<0.05)。结论 PRDX Ⅵ可能通过调节卵巢氧化应激压力而在卵泡发育和卵巢衰老中发挥重要调控作用。
- 沈薇罗爱月程静潘光鑫杨书红丁婷王世宣
- 关键词：PEROXIREDOXIN活性氧族卵巢衰老卵泡发育
- 不同分离方法对人卵巢颗粒细胞体外培养的影响被引量：5
- 2013年
- 目的比较人卵巢颗粒细胞不同分离方法。方法取体外受精-胚胎移植(IVF-ET)采卵时的卵泡液,用裂解法、密度梯度离心法、酶解法分离纯化并原代培养人卵巢颗粒细胞。比较不同的分离方法获得的卵巢颗粒细胞数量、形态及其对早期培养的影响。结果裂解法得到的颗粒细胞数较密度梯度离心法、酶解法多(P<0.005,P<0.001);比较3种分离方法获得的卵巢颗粒细胞的活性和孕激素分泌量差异无统计学意义;接种24 h后,酶解法得到的卵巢颗粒细胞存活量最多(P<0.05),裂解法得到的存活细胞最少(P<0.05);裂解法获得的卵巢颗粒细胞继续培养48、72及96 h均较培养24 h有明显细胞增殖(P<0.05),且与其他组存活的细胞量差异无统计学意义。结论裂解法得到的颗粒细胞数量多,细胞生长较好,操作简单,是较理想的分离人卵巢颗粒细胞的方法。
- 叶婧丁婷杜小芳杨书红沈薇石良艳罗爱月王世宣
- 关键词：原代培养
- Prdx2在促性腺激素预处理的小鼠卵巢中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨促性腺激素预处理的小鼠在卵泡发育及排卵过程中Prdx2在卵巢中的表达,为进一步研究Prdx2在调控卵泡生长、发育及成熟中的作用奠定基础。方法:将22～24d大小的75只C57/BL6雌性小鼠随机分成14组(生理盐水组10只,其余各组5只),分别为注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后2、4、6、8、10、12、24、48h组和注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后5、8、10、12、24h组以及生理盐水组,其中生理盐水组分别于注射生理盐水后2h(C0,5只)及48h(C1,5只)取出卵巢。采用实时定量PCR及免疫印迹法检测Prdx2mRNA及蛋白在促性腺激素处理后不同时间点的动态表达。结果:小鼠腹腔注射PMSG后Prdx2表达均低于生理盐水组,于注射后2h表达量最低,随后表达逐渐增高,24h到达最高点,但表达仍低于生理盐水组。生理盐水组注射生理盐水后2h(C0)与注射PMSG后2、4、6、8、10、12、48h相比差异均具有统计学意义(P<0.05),而与注射PMSG后24h相比则差异无统计学意义(P=0.238)。注射PMSG后不同时间点两两比较结果表明2hPrdx2的表达同6h相比差异有统计学意义(P=0.00),其他时间点两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。小鼠腹腔注射PMSG后48h(P48)注射hCG促排卵,促排卵后不同时间点卵巢标本mRNA表达量同P48相比差异均无统计学意义(P>0.05)。同生理盐水组注射生理盐水后48h(C1)相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Prdx2蛋白在小鼠腹腔注射PMSG后10h表达水平最低,其他各组间差异无统计学意义。注射hCG后各时间点同生理盐水组相比,表达差异均无统计学意义。结论:Prdx2可能在小鼠卵泡发育及排卵过程中发挥重要作用。
- 杨书红王硕袁明罗爱月沈薇丁婷赖志文王世宣
- 关键词：卵巢孕马血清促性腺激素人绒毛膜促性腺激素卵泡发育排卵小鼠
- Neuropilin-1 mRNA在不同动情周期及周龄阶段小鼠卵巢中的表达被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨Neuropilin-1(NRP-1)mRNA在繁殖适龄期小鼠动情周期间以及不同周龄阶段小鼠卵巢中的表达。方法:选用繁殖适龄期不同动情周期小鼠以及不同周龄阶段小鼠,通过实时定量聚合酶链反应检测其卵巢中NRP-1 mRNA的表达。结果:NRP-1在小鼠不同动情周期卵巢中的表达在mRNA水平差异无显著性(P>0.05)。比较其mRNA在不同周龄阶段小鼠卵巢的中表达显示,近绝育期32周组表达水平显著高于其他组:为3周组的2.94倍(P<0.01),6周组的4.92倍(P<0.01),11周组的2.29倍(P<0.01)。而其他各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NRP-1 mRNA在小鼠卵巢中的表达不随动情周期而改变,且随着卵巢生理功能的下降而显著升高,提示NRP-1与卵巢衰老进程有关。
- 沈薇罗爱月荣方方杨书红丁婷赖志文卢运萍王世宣
- 关键词：卵巢NEUROPILIN-1小鼠动情周期
- 卵巢衰老临床诊疗的研究进展
- 2013年
- 卵巢衰老是指随着年龄增长,卵巢内卵泡数量及质量不断下降。卵巢功能衰退导致生育障碍及内分泌发生改变,严重影响女性身心健康,因此需准确评估及预测卵巢功能,制定合理的治疗方案。近年研究发现,血清抗苗勒管激素水平、窦状卵泡数可较好地评价卵巢储备功能,为制定临床个体化治疗方案提供依据,但其评估及预测能力尚存争议。目前激素治疗、中医疗法等可有效缓解更年期症状,但仍有一定的风险,需进一步研究。本文就卵巢衰老的诊断及治疗方面做一综述。
- 叶婧丁婷王世宣
- 关键词：卵巢衰老激素治疗
- Neuropilin-1 mRNA在新生小鼠及促性腺激素预处理不同时间点小鼠卵巢中的表达
- 2012年
- 目的:探讨Neuropilin-1(NRP-1)mRNA在新生小鼠及促性腺激素预处理不同时间点小鼠卵巢中的表达。方法:选用C57BL/6j小鼠新生及促性腺激素预处理不同时间点卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测NRP-1mRNA表达。结果:NRP-1mRNA在新生第3天小鼠卵巢中的表达是第5天的1.7倍(P<0.05),是第14天的1.5倍(P<0.05);相对于对照生理盐水注射组(对照组),在孕马血清处理后4、8、12、24h,NRP-1mRNA表达显著降低(P<0.05),至24h最低,而48h显著增高为对照组的1.5倍(P<0.05);给予人绒毛膜促性腺激素后与0h相比NRP-1mRNA表达于第4小时下降至最低(P<0.05),后于第12小时升至最高(P<0.05)。结论:NRP-1在始基卵泡募集和卵泡发育、成熟及排卵过程中发挥重要作用。
- 沈薇罗爱月荣方方曹晨杨书红丁婷頼志文王世宣
- 关键词：卵巢NEUROPILIN-1小鼠
- Peroxiredoxin Ⅳ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中的表达
- 2013年
- 目的:探讨Peroxiredoxin(PRDX) Ⅳ mRNA在小鼠卵泡发育和卵巢衰老过程中表达。方法:选用C57BL/6j小鼠不同周龄、动情周期以及促性腺激素预处理卵巢,通过实时定量聚合酶链反应检测PRDX Ⅳ mRNA表达。结果:PRDX Ⅳ mRNA在3周龄、6周龄、8月龄卵巢中表达分别为新生3d小鼠的0.76、0.42、0.12(P<0.05);在性成熟小鼠各动情周期卵巢中表达无差异;在未成熟小鼠促性腺激素预处理卵巢中,PMSG注射48h表达为生理盐水注射组(CON组)的1.63倍(P<0.05),于HCG注射后4、8、12、48h分别为CON组的0.81、0.56、0.78、0.66(P<0.05)。结论:PRDX Ⅳ可能通过调节卵泡发育与卵巢氧化应激压力而调控卵巢衰老过程。
- 沈薇罗爱月程静潘光鑫杨书红丁婷王世宣
- 关键词：PEROXIREDOXIN卵巢衰老卵泡发育排卵
- 人外周血单核细胞3种不同转染方法的比较被引量：7
- 2011年
- 目的采用3种不同方法转染原代人外周血单核细胞,以寻找一种简便、高效的单核细胞转染方法。方法采用人淋巴细胞分离液从健康人外周血中分离出单个核细胞,锥虫蓝拒染法检测细胞存活率。单个核细胞在孔板内培养2 h后吸弃悬浮的淋巴细胞,获得贴壁的单核细胞。分别采用Lipofectamine 2000介导载体质粒(PEGF-N1),慢病毒(NC-GFP-LV)及腺病毒(Adv-GFP)3种方法转染单核细胞,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,并收集细胞上流式细胞仪检测GFP阳性细胞的比例。结果通过人淋巴细胞分离液分离的单个核细胞的活细胞率>95%,获得的单核细胞数量多,贴壁牢,形态均一。转染48 h后,Lipofectamine 2000介导载体质粒及慢病毒转染的单核细胞无绿色荧光,流式细胞仪检测GFP阳性细胞均<1%,腺病毒转染的单核细胞可见较强绿色荧光,GFP阳性细胞约占10%。结论腺病毒,而不是Lipofectamine 2000或慢病毒,能有效地将外源基因导入单核细胞内表达。
- 叶双梅阚淳一杨丽兰杨洁马全富吴明富卢运萍王世宣
- 关键词：外周血单核细胞腺病毒慢病毒基因转染
- 小鼠腔前卵泡不同分离方法的比较被引量：5
- 2010年
- 目的探讨小鼠腔前卵泡的最佳分离方法。方法取性未成熟小鼠的卵巢,按照不同分离方法,单纯机械法与酶解法分离腔前卵泡,并用基础培养基进行培养,比较不同分离方法获得的卵泡数量、形态,及对其早期生长发育的影响。结果2mg/mL的胶原酶可获得大量基底膜完整的腔前卵泡及裸卵(P<0.01);体外培养2d后,酶解组卵泡生长直径大(P<0.05)、GVBD率、放出第一极体率和7d生存率无明显差异(P>0.05)。结论胶原酶酶解法较单纯机械法更易获得大量高质量腔前卵泡,且对其早期发育无明显影响。
- 丁婷罗爱月杨书红赖志文卢运萍马丁王世宣
- 关键词：小鼠腔前卵泡体外培养
