目的比较胶原膜交联前后的生物特性,为胶原膜的应用奠定基础。方法取市售新鲜牛尾,分离肌腱,制备胶原蛋白,以紫外分光光度计测定胶原蛋白含量;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)波长扫描,氨基酸含量检测分析胶原蛋白特性。将制备的胶原蛋白,真空冷冻干燥,制备胶原膜,采用戊二醛交联。大体观察及扫描电镜观察交联前后胶原膜形态,并测定胶原酶溶解时间、pH值、吸水性能及抗撕强度。取自愿捐赠的骨髓制备BMSCs,按2×103/100μL浓度接种于交联前后胶原膜上培养7d,测量细胞吸光度(A)值及扫描电镜观察。结果制备的胶原蛋白含量约为2mg/mL,最大吸收波长约为230nm。胶原蛋白氨基酸分析显示,甘氨酸含量约为21.47%,脯氨酸12.04%,羟脯氨酸10.18%,未检出色氨酸。交联前胶原膜为白色海绵状,孔径较大且不均匀,pH值为4.5～5.0;扫描电镜观察为孔网状结构,孔径大;吸水力为其重量的61倍,抗撕强度为210g/cm3,胶原酶溶解时间为30min。交联后胶原膜变薄,无色,半透明,致密,柔韧性好;镜下可见致密排列的胶原纤维成网状;pH值为6.5～7.0,吸水力降低,抗撕强度约为3400g/cm3,胶原酶溶解时间为90min。细胞增殖实验表明,细胞在交联前后的胶原膜上均能良好生长,A值差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜见BMSCs在交联后的胶原膜上生长良好。结论从牛肌腱中成功提取胶原蛋白,并制备胶原蛋白膜。经化学交联剂交联后,胶原膜仍具有良好的生物学特性,且理化性质优于交联前,可作为生物支架材料,用于皮肤创伤修复等研究领域。
