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CD40L对B淋巴细胞表面分子及分泌IL-12的影响被引量：1: 2007年; 在体外使用CD40L作用于B淋巴细胞使之活化,通过测定B淋巴细胞表面分子及分泌细胞因子的变化,探讨B淋巴细胞作为抗原递呈细胞在抗肿瘤免疫中的优势,为B淋巴细胞特异性活化细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)进而发挥其肿瘤细胞杀伤效应奠定基础.取7名健康成人外周静脉血,经淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),分为对照组和实验组,实验组培养液中加入加入CD40L和IL-4,共培养21 d.观察B淋巴细胞生长状况,并在第7 d、第14 d和第21 d,用流式细胞仪(FCAS)测定其表面分子CD80、CD86和CD19,在第21 d,使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中的IL-12水平.结果显示,在CD40L的作用下,B淋巴细胞呈克隆样增殖,并高表达表面分子CD80/CD86和CD19,和对照组相比,B淋巴细胞分泌IL-12水平升高(P<0.05).上述实验结果说明通过CD40L的刺激,B淋巴细胞得到了活化,提示通过该途径活化的B淋巴细胞具备了作为抗原递呈细胞而发挥其抗肿瘤免疫治疗的能力.; 沈苏南徐智钱晓萍禹立霞刘宝瑞; 关键词：CD40L B淋巴细胞 CD80/CD86 白细胞介素-12 抗原递呈细胞

鸡尾酒法体外培养人外周血来源的树突状细胞被引量：3: 2008年; 目的探讨从健康人外周血中体外诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法。方法用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4,培养6d后分组:Ⅰ组为对照组,仅含上述细胞因子;Ⅱ组加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(PolyI∶C);Ⅲ组加入钙离子载体(CI)A23187;Ⅳ组加入PolyI∶C和CIA23187。第8天收获细胞,显微镜下观察形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果Ⅳ组细胞形态学观察可见典型DC特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明Ⅳ组细胞具有较强的刺激T细胞增殖能力。结论PBMC体外经过细胞因子序贯、联合诱导培养能够获得大量功能成熟的DC。; 李丽刘宝瑞钱晓萍; 关键词：树突状细胞钙离子载体A23187

土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用被引量：20: 2007年; 目的研究土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨土鳖虫抗肿瘤效应。方法以土鳖虫乳剂给SD大鼠灌胃,采血并制备血清。四氮唑盐法(MTT法)检测含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果土鳖虫含药血清可明显抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖,20%土鳖虫含药血清作用72h后抑制率高达56.728%,抑制率呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测细胞凋亡发现肝癌HepG-2细胞以坏死居多,细胞周期多阻滞于G0-G1期。结论土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞体外增殖有明显的抑制作用。; 张微邹玺钱晓萍禹立霞刘宝瑞; 关键词：肝癌HEPG-2细胞 MTT法细胞周期

黑素瘤患者树突状细胞体外快速培养成熟和临床应用研究: 2007年; 目的:建立从黑素瘤患者外周血体外快速稳定地诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法。方法:用密度梯度离心法分离患者外周血中分离出的单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单个核细胞后加入粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素(IL)-4,随后分4组:第1和第2组分别在24h时加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸[Poly(I:C)]、肿瘤坏死因子(TNF)-α,继续培养24h,在48h时收集DC;第3和第4组分别在36h时加入Poly(I:C)、TNF-α,继续培养36h,在72h时收获DC。显微镜下观察DC形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性。结果:经GM-CSF、IL-4、Poly(I:C)诱导培养72h获得大量成熟DC,形态学观察可见典型特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测表明,第3组DC高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明,第3组获得的DC具有较强的刺激同种淋巴细胞增殖能力。获取的成熟DC注射于患者浅表淋巴结后未出现明显不良反应。结论:Poly(I:C)体外诱导人外周血单个核细胞来源DC成熟的方法具有快速、稳定、经济、安全的特点,培养后DC回输患者体内未出现明显不良反应。; 李丽刘宝瑞钱晓萍; 关键词：树突状细胞黑素瘤

多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸诱导下人外周血树突细胞的体外培养和快速成熟被引量：2: 2007年; 目的:寻求一种快速稳定的方法从人外周血中诱导培养出成熟的树突细胞(DC)。方法:用密度梯度离心法从正常人外周血中分离出单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞,在0 h加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4),随后分四组继续培养:第一组在24 h加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸[Poly(I∶C)],继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h Poly(I∶C)组;第二组在24 h加入肿瘤坏死因子α(TNF-α),继续培养24 h,于48 h收集DC细胞,即48 h TNF-α组;第三组在36 h加入Poly(I∶C),继续培养36 h,在72 h时收获DC细胞,即72 h Poly(I∶C)组;第四组在36 h加入TNF-α,继续培养36 h,于72 h收集DC细胞,即72 hTNF-α组。同时设立对照组,仅加GM-CSF和IL-4。结果:经流式细胞仪检测72 h Poly(I∶C)组获得的成熟DC细胞的百分比含量最高;混合淋巴细胞培养(MLC)表明72 h Poly(I∶C)组获得的DC细胞具有较强的刺激淋巴细胞增殖的能力。结论:Poly(I∶C)诱导下人外周血DC的体外培养与成熟的方法是具有快速、稳定、经济、简便的特点,为DC的深入研究和临床应用奠定了基础。; 李丽刘宝瑞钱晓萍俞立霞; 关键词：树突细胞

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国家自然科学基金(30471701)