国家自然科学基金(30671501)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：林秀坤廖冰韩凤桐吴宁杜卫华更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所黑龙江省农业科学院东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛Sry启动子调控序列的鉴定被引量：4
- 2010年
- 【目的】Sry是大多数哺乳动物雄性性别发育的决定基因,但人们仍未找到其表达的调控规律,本试验对牛Sry5′端调控序列作了初步的研究,为深入研究牛Sry的表达调控奠定了基础。【方法】克隆牛Sry5′端侧翼1056bp长的DNA序列,利用生物信息学方法对这一区域内潜在的转录起始位点进行了预测,并构建了10个不同长度的缺失牛Sry5′部分侧翼序列的报告基因载体;进一步分离了胎牛生殖嵴,进行生殖嵴细胞的原代培养,并对胎牛生殖嵴细胞进行了性别和特征鉴定;最后利用荧光素酶双报告基因分析系统,在生殖嵴细胞内检测了牛Sry核心启动子区域的位置。【结果】体外培养的生殖嵴细胞可以表达雄性生殖嵴细胞的特征基因Sry、Sox9、Sf-1和Dax1,牛Sry5′端-93、-419和-722处存在3个潜在的转录起始位点(TSS),-599—-565区域35bp内存在控制Sry基础转录活性的顺式调控元件,其中存在多个潜在的转录因子结合位点。【结论】牛Sry5′端UTR区-599—-565bp区域35bp存在部分调控序列。
- 韩凤桐林秀坤刘娣吴宁廖冰
- 关键词：SRY核心启动子
- FGF9调节性腺分化研究进展被引量：3
- 2009年
- 性别决定过程是双潜能胚胎发育成睾丸或卵巢的过程。通过小鼠基因敲除试验以及在遗传水平分析性反转病人证明该过程是由多个基因调控的。论文综述了睾丸发育通路中信号分子成纤维细胞生长因子9(FGF9)在性腺分化中的作用。FGF9基因参与调节早期睾丸发育的3个重要事件,为调节性腺体腔上皮细胞增殖,促进Sertoli前体细胞形成,调节中肾细胞迁移,影响睾丸索的形成,FGF9诱导FGFR2在核内定位,并维持Sox9的表达。
- 廖冰林秀坤
- 关键词：性别决定SERTOLI细胞睾丸发育
- siRNA介导Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因表达的影响被引量：1
- 2008年
- 为研究Sry基因的调控网络,采用siRNA表达载体介导的RNAi技术,特异性地抑制睾丸决定因子Sry在小鼠胚胎中的表达,并观察Sry基因沉默后对在两性性腺分化中起重要作用的Wt1,Sf1,Dax1,Gata4,Sox9及Amh基因表达的影响。利用本课题组先前构建的siRNA重组表达载体(pSilencer4.1/Sry217及pSilencer4.1/Sry565),通过尾静脉注射法导入妊娠9.5天(9.5dpc)的母鼠体内,在11.5dpc时取胚胎,对性别鉴定为雄性的胚胎以RT-PCR法和Western-blot检测Sry基因的表达抑制效果,并同时用定量PCR法检测Wt1等上述性别决定相关基因表达变化情况。结果表明,注射干扰质粒后48hSry基因的mRNA和蛋白表达水平均降低,其中siRNA表达质粒pSilencer4.1/Sry565的抑制效果显著,可达到80%的抑制率。Sry基因沉默后,Wt1基因表达量显著升高;Sf1,Dax1,Gata4,Sox9基因表达水平没有明显变化;Amh基因无表达。试验结果表明,Sry基因表达抑制会导致Wt1基因表达升高;另外,Sry基因激活Sox9基因的表达可能需要其他的辅助因子协同作用。
- 吴宁林秀坤廖冰杜卫华韩凤桐赵金红
- 关键词：SRY尾静脉注射性别决定基因
- 牛性别决定新基因Fgf9的克隆及生物信息学分析被引量：3
- 2009年
- Fgf9基因是脊椎动物性别决定中重要的信号因子,它在睾丸发育过程中参与Sertoli细胞的增殖和睾丸索的形成。基于表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)克隆原理,采用序列拼接和RT-PCR方法获得了荷斯坦奶牛Fgf9基因的cDNA序列,并对其组织表达特征进行分析。利用生物信息学方法对Fgf9基因序列和蛋白结构进行分析。结果显示:Fgf9基因定位于牛12号染色体上,cDNA全长为697bp,开放阅读框为627bp,编码208个氨基酸,分子量23.38245kDa,等电点7.0600。RT-PCR证实该开放阅读框正确,在牛的各组织中均有表达,且与牛其他cDNA无同源性,获得GenBank登陆号为:EU693028。功能结构分析显示Fgf9蛋白具有典型的FGF家族保守结构域,包括受体相互作用位点和肝素结合位点。信号肽预测显示牛Fgf9蛋白可能不存在信号肽序列。
- 廖冰吴宁韩凤桐林秀坤
- 关键词：性别决定基因克隆生物信息学
- 牛Sry亚细胞定位及其对Sox9基因表达的影响被引量：1
- 2008年
- 为鉴别牛Sry基因的下游目的基因,并确定Sry蛋白在细胞内的定位区域,本试验构建pcDNA3.1-Sry表达载体和pEGFP-N1-Sry亚细胞定位表达载体,在原代培养的生殖嵴细胞和卵巢颗粒细胞中进行Sry过表达,并对性别控制相关基因在Sry过表达前后的表达水平变化进行检测,包括Sf1(Steroidogenic fator-1)、Gata4(GATA binding protein 4)、Wt1(Wilms tumor gene)、Sox9(Sry-related HMG box-9)、Amh(Anti Mullerian Hormone)和Dax1(Dosage sensitive sex reversal locus-1);并在两种细胞中进行了Sry亚细胞定位研究。Sry在两种细胞中过表达后,在生殖嵴细胞中Sox9的表达水平被显著上调,但在卵巢颗粒细胞中未观察到Sox9基因被上调,而其他几个基因的表达水平未受Sry影响;亚细胞定位结果表明牛Sry主要分布在细胞核内。本试验说明牛Sry可能间接调控Sox9表达,或存在其他不需要Sry参与的调控通路调控Sox9表达;牛Sry蛋白起转录因子作用。
- 韩凤桐吴宁廖冰林秀坤刘娣
- 关键词：SRY过表达亚细胞定位SOX9
