广东省科技计划工业攻关项目(2003B31602)
- 作品数：10 被引量：104H指数：7
- 相关作者：朱家勇徐建华金小宝许琴英王艳更多>>
- 相关机构：广东药学院广东医学院广州中医药大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 防御素的研究及应用被引量：6
- 2005年
- 防御素是一组小分子阳离子抗菌活性肽,富含精氨酸和二硫键,广泛分布于动物、植物和昆虫体内。由于具有广谱抗微生物的特性,防御素在医药、食品和植物转基因工程上将发挥重要作用。文章对不同来源防御素的分子特征、抗菌机制以及应用前景进行综述。
- 许琴英朱家勇
- 关键词：防御素医药分子特征
- 生物信息学在蛋白质结构与功能预测中的应用被引量：53
- 2005年
- 生物信息学是现代生命科学与信息科学、计算机科学、数学、统计学、物理学、化学等学科相互渗透而高度交叉形成的一门新兴前沿学科。随着人类基因组计划的完成,应用生物信息学技术预测蛋白质结构与功能将成为后基因组时代的一项重要任务。本文介绍了主要的蛋白质结构和序列数据库资源,在此基础上提出了一种高效的整合方法,并简述蛋白质结构与功能预测的基本方法、进展及其改进,展望了蛋白质预测技术的前景。
- 徐建华朱家勇
- 关键词：生物信息学蛋白质数据库
- 家蝇抗菌肽Cecropin-His_6融合基因的克隆、序列分析及其表达载体构建被引量：13
- 2005年
- 克隆家蝇幼虫抗菌肽Cecropin -His 6融合基因 ,构建其真核表达载体 ,为更深入的抗菌肽活性研究及制备新型肽类抗生素创造条件。该文从家蝇幼虫组织中提取总RNA ,RT -PCR扩增编码Cecropin开放阅读框cDNA序列 ,将其克隆至pUCm -T载体进行序列测定 ;然后用含 6×His标签序列的下游引物克隆Cecropin -His 6融合基因 ,并将其构建于真核表达载体pcDNA3.1(+)中 ;同时应用生物信息学对融合基因的理化性质和二级结构进行预测分析。结果表明 ,RT -PCR扩增得到约 2 30bp的目的cDNA片段 ,与Genebank中报道的家蝇CecropincDNA序列存在一个无义变异差异 (Lys:AAG→AAA) ;6×His标签成功融合到Cecropin的C端。Cecropin -His 6融合基因的克隆和真核表达载体的成功构建 ,为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。
- 徐建华朱家勇金小宝许琴英
- 关键词：家蝇抗菌肽真核表达载体
- 昆虫抗菌肽研究现状与展望被引量：13
- 2004年
- 昆虫抗菌肽具有分子量小、热稳定性强、无免疫原性、生物活性广泛等特点,在医药、农业、食品工业等领域逐渐显示出广阔的应用前景,特别是在当前大量耐药性菌株的出现,而新抗生素发现又极其困难的情况下,昆虫抗菌肽的潜在药用价值倍受人们关注。本文将对昆虫抗菌肽的结构特征,抗菌机理,基因工程及其应用前景等知识作一简要介绍。
- 徐建华朱家勇
- 关键词：昆虫抗菌肽免疫原性耐药性菌株医药药用价值基因工程
- 抗菌肽Cecropin-His-6基因的真核表达及其生物活性研究被引量：7
- 2006年
- 目的研究家蝇幼虫Cecropin-His-6抗菌肽基因生物学功能。方法从家蝇幼虫体内扩增Cecropin-His-6抗菌肽基因,构建pcDNA3.1/Cecropin-His-6重组表达质粒并用脂质体转染CHO细胞中,G418筛选,HisTrapHP亲和层析柱纯化目的蛋白,琼脂糖平板抑菌试验检测目的蛋白的抗菌活性。结果pcDNA3.1/Cecropin-His-6重组质粒成功转染入CHO细胞中,并获得具有抗菌活性的Cecropin-His-6目的蛋白。结论家蝇幼虫抗菌肽哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定了基础。
- 徐建华朱家勇金小宝许琴英
- 关键词：抗菌肽真核表达天蚕素生物活性
- 家蝇幼虫抗菌肽Attacin基因的克隆表达及抑菌生物学活性(英文)被引量：9
- 2007年
- 目的克隆家蝇幼虫Attacin抗菌肽基因,构建原核融合表达载体,建立Attacin体内抗菌活性检测系统,优化表达和纯化Attacin目的蛋白,并初步研究其抗菌生物学功能。方法以pUCm-T/Attacin重组质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增Attacin编码区序列,分别克隆至原核表达载体pET30a(+)和pGEX-4T-1,构建原核重组质粒,转化大肠埃希菌,表达重组Attacin蛋白,并在大肠埃希菌中体内检测Attacin的抗菌活性。利用亲和层析柱纯化重组融合蛋白Attacin,SDS-PAGE进行纯度分析,琼脂糖平板抑菌试验鉴定其生物活性。结果pET30a(a+)/Attacin和pGEX-4T-1/Attacin重组质粒分别转化大肠埃希菌后,以IPTG诱导表达,与未诱导对照相比,含有重组质粒的宿主菌生长受到抑制,从pET30a(+)/Attacin重组质粒的表达宿主菌中未能获得His-Attacin融合蛋白,而从pGEX-4T-1/Attacin重组质粒转化菌种获得GST-Attacin融合蛋白。SDS-PAGE分析表明Attacin重组蛋白分子量与预期结果一致,琼脂糖平板抑菌试验显示重组Attacin具有抗菌活性。结论Attacin基因在原核系统中成功表达,并且纯化后具有抑菌活性,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定了基础。
- 徐建华朱家勇金小宝许琴英
- 关键词：家蝇生物信息学分析原核表达
- 多聚组氨酸标签的Attacin抗菌肽基因克隆及其在CHO细胞中稳定表达被引量：4
- 2007年
- 目的克隆家蝇幼虫抗菌肽Attacin-His_6融合基因,构建真核表达载体并转染CHO细胞表达,为深入研究其生物学活性创造条件。方法以pUCm-T/Attacin载体为模板,用含6×His标签序列的下游引物克隆Attacin-His_6融合基因,并将其构建于pcDNA3.1(+)中,pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒转染CHO细胞,ZeocinG418筛选阳性细胞株,RT-PCR检测重组质粒在CHO细胞的转录情况。结果成功扩增出Attacin-His_6融合基因,构建了pcDNA3.1/Attacin-His_6重组质粒并转染入CHO细胞中,RT-PCR从阳性克隆的CHO细胞中扩增出预期大小的目的片段,从转录水平证实CHO-Attacin-His_6重组细胞株表达了Attacin-His_6基因。结论抗菌肽Attacin基因哺乳动物型工程细胞表达系统的建立,为进一步制备其肽类抗生素奠定了基础。
- 徐建华朱家勇金小宝许琴英张秀明庄俊华马艳王艳
- 关键词：抗菌肽中国仓鼠卵巢细胞ATTACIN
- 家蝇幼虫抗菌肽Defensins基因的克隆与序列分析被引量：11
- 2004年
- 目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法提取家蝇幼虫总RNA,根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物,RT-PCR扩增目的基因片段,T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果RT-PCR扩增出一条约310bp的目的片段,序列分析表明,其与家蝇成虫防御素基因同源性高达97%,核酸序列变异主要发生在信号肽区域。结论成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区cDNA序列,为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础。
- 许琴英金小宝徐建华朱家勇
- 关键词：家蝇幼虫克隆
- 家蝇幼虫差异表达基因的克隆筛选与分析被引量：7
- 2005年
- 目的是利用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术对诱导后家蝇幼虫差异表达基因进行克隆分析。取诱导和未诱导家蝇(Musca domestica vicina)三龄幼虫总RNA进行mRNA差异显示反应,产物经6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳展开,银染分析后,回收差异显示条带。随机选取4条诱导家蝇三龄幼虫中上调表达的基因条带,进行Northern杂交验证,有2条被验证为真实带,命名为YD1和YD2。对这2条基因片段进行T-A克隆和测序,长度分别为495 bp和265 bp,登录NCBI运用Blastn程序进行同源性比较,发现两者与任何已知基因同源性都低于70%,提示为两个未报道的新基因,在家蝇免疫反应中可能起着一定的作用。
- 金小宝朱家勇
- 关键词：家蝇银染基因免疫反应
- Attacin抗菌肽基因体内抗菌活性研究被引量：3
- 2007年
- 目的建立Attacin基因体内抗菌活性检测系统,并初步研究其抗菌活性。方法PCR扩增Attacin编码区目的序列,并构建原核表达重组质粒,转化大肠埃希菌,在体内检测Attacin的抗菌活性,同时SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果与未诱导对照相比,包含重组质粒的宿主菌生长受到抑制,含pET30a(+)/Attacin宿主菌诱导表达后,提纯不到His-Attacin融合蛋白,而含pGEX-4T-1/Attacin宿主菌可获得GST-Attacin融合蛋白。结论建立灵敏、简便的Attacin体内抗菌活性检测方法,为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定基础。
- 徐建华朱家勇金小宝许琴英张秀明庄俊华陈曲波
- 关键词：家蝇抗菌肽原核表达ATTACIN
