国家自然科学基金(30973077)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
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- 原代大鼠脑毛细血管内皮细胞培养与鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的介绍一种从大鼠脑组织中分离培养原代大鼠脑血管内皮细胞(BCEC)的方法。方法采用酶消化、滤网机械分离结合右旋糖苷密度离心的方法分离脑毛细血管段,接种在涂有明胶的培养皿培养BCEC。结果通过环境扫描电镜观察细胞形态,量子点超敏细胞免疫荧光鉴定,我们培养出来了纯度较高的原代BCEC。结论将分离的鼠脑毛细血管段置于涂有明胶的培养皿上培养原代BCEC的新方法比传统的培养法可以得到纯度更高的BCEC,为后期基于BCEC为载体的动物实验奠定了细胞基础。
- 熊志勇姜晓兵王旋孙云卢高方赵洪洋
- 关键词：原代培养
- EGFRvⅢ单链抗体治疗小鼠脑胶质瘤的研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨表皮生长因子受体III型突变体单链抗体(EGFRvIIIscFv)对小鼠脑胶质瘤的治疗效果。方法人工合成EGFRvIIIscFv基因序列并构建到原核表达载体中,诱导表达重组蛋白,经电泳和western blotting鉴定;再通过纯化和复性,得到有功能的EGFRvIIIscFv;用酶联免疫吸附分析(ELISA)测定抗体的亲和常数后,通过立体定向仪将其注射到胶质瘤小鼠的脑内,观察荷瘤鼠的生存期,免疫荧光法检测肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果双酶切鉴定和测序结果证实人工合成的EGFRv Ⅲ scFv序列与基因数据库中完全一致;经过诱导表达,电泳显示重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达;western-blotting鉴定蛋白分子量为63kDa,与预期大小基本一致;该单链抗体亲和常数为0.203×10-8mol/L;将蛋白注射到荷瘤鼠的脑内,与对照组相比,实验组肿瘤VEGF表达量明显减少、荷瘤鼠中位生存期明显延长(P<0.01)。结论 EGFRvscFv重组蛋白可与EGFRvⅢ特异性结合;脑内注射EGFRvⅢscFv可明显降低胶质瘤血管形成,延长荷胶质瘤小鼠生存期。
- 王旋姜晓兵熊志勇孙云周毅赵洪洋
- 关键词：胶质瘤单链抗体小鼠
- 融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv的构建及表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建细胞因子融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv,建立并检测稳定表达融合蛋白的细胞株NIH3T3。方法通过RT-PCR法扩增小鼠IP10基因,全基因人工合成EGFRvⅢScFv,两段目的基因依次克隆于表达载体pcDNA3.1(-)PCMV启动子下游,二者以编码(Gly4Ser)3的柔性接头序列(linker)相连。将构建好的pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv转染NIH3T3细胞,并用G418筛选出阳性克隆,采用实时定量PCR和Western blot法检测克隆细胞目的基因和蛋白的表达量,并观察转染后的NIH3T3细胞体外生长状况。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv,经过浓度为200mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达IP10-EGFRvⅢScFv的细胞系NIH3T3,且其生长状态并未受转染基因的影响。通过荧光检测、实时定量PCR、Western blot法检测到转染72h后目的基因和蛋白表达量最高,和稳定克隆株相比,表达量并无明显差异(P>0.05)。结论构建的新型细胞因子融合蛋白可以在NIH3T3细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础。
- 王旋赵洪洋罗赤星周毅张方成姜晓兵
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体融合蛋白
- 抗肿瘤单链抗体融合蛋白的研究进展被引量：1
- 2012年
- 尽管有手术、放疗和化疗等综合治疗手段,在过去20多年,恶性脑胶质瘤特别是多形胶质母细胞瘤的预后并无明显改善。然而,在成人颅内恶性肿瘤中,多形胶质母细胞瘤每年的发病率占到50%以上[1]。虽然常规手术配合放化疗可以延长患者的生命,但是浸润性生长的特性决定了上述方法都无法有效清除肿瘤细胞,导致肿瘤在短时间内复发,患者的中位生存期一般不超过15个月[2]。
- 王旋姜晓兵
- 关键词：抗肿瘤
