国家自然科学基金(30973072)
- 作品数：16 被引量：46H指数：4
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- LRIG1与MnSOD、bcl-2在人脑星形胶质细胞瘤组织芯片中的表达被引量：3
- 2011年
- 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样区1（LRIG1）是新近发现的一种细胞表面跨膜蛋白,在人类各种组织及多种肿瘤中均有表达,因与果蝇跨膜蛋白KeKKon1（Kekl）结构相似而被发现.我们通过检测LRIG1、锰超氧化物岐化酶（MnSOD）、bcl-2三种因子,探讨LRJG1与人脑星形胶质细胞瘤多药耐药性的关系.
- 纪振刚刘宝辉冀保卫郭振涛吴立权田道锋陈谦学
- 关键词：脑星形胶质细胞瘤LRIG1BCL-2组织芯片MNSOD
- RhoE基因对胶质瘤细胞凋亡的影响及其机制被引量：2
- 2013年
- 目的 探讨Ras鸟苷酸结合蛋白超家族的新成员E（RhoE）过表达对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的影响及其机制.方法 应用脂质体介导的基因转染技术将Myc-N1、Myc-RhoE质粒分别转染人人脑胶质瘤U251细胞株,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blot法测定对照组、N1-U251、RhoE-U251 3组细胞株中RhoE和细胞周期素（Cyclin） D1的mRNA与蛋白水平的变化,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和流式细胞技术分析细胞的增殖与凋亡的变化.结果 RhoE-U251组中RhoE mRNA与蛋白表达水平较未转染组和转染空载体组明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.同时,RhoE-U251组中Cyclin Dl mRNA与蛋白表达水平较未转染组和转染空载体组明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.转染后胶质瘤细胞生长受到抑制,凋亡率也明显升高.结论 RhoE可能是一种抑癌基因,瞬时高表达可以抑制胶质瘤细胞株U251生长,其机制是通过下调细胞调控蛋白Cyclin D1促进细胞凋亡.
- 陈其钻郭振涛刘宝辉喻军华张申起朱晓楠杨吉安邓钢田道锋陈谦学
- 关键词：胶质瘤脱噬作用RHOE细胞周期素D1
- 脑胶质瘤多药耐药细胞株U251／VP16的建立及其生物学特性被引量：5
- 2012年
- 目的采用依托泊苷诱导建立多药耐药细胞株U251／VP16。方法采用浓度递增法使U251细胞对依托泊苷耐药，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测其多药耐药性；瑞氏一姬姆萨染色观察亲本细胞U251和耐药细胞株U251／VP16的细胞形态；流式细胞仪检测细胞周期的变化；计算细胞倍增时间；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测多药耐药基因（MDRI）、B淋巴细胞／白血病-2（bcl-2）、多药耐药相关蛋白5（MRP5）、低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1）等耐药基因的表达变化。结果（1）成功建立多药耐药细胞株U251／VP16，其对VP-16、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素、替莫唑胺的耐药倍数分别为：12．36、2．64、2．00、3．61、1．63。（2）光学显微镜下耐药细胞胞体增大，呈多形性，瑞氏一姬姆萨染色后可见增大的明显不规则的胞核，胞质内颗粒样物质增多。（3）细胞周期结果显示U251／VP16细胞株较亲本细胞G0／G1期和S期明显减少．G2／M期明显增多。（4）U251／VP16的倍增时间为（20．644-1．98）h，长于亲本细胞U251的（10．26±1．03）h。（5）RT—PCR检测结果显爪MDRl、bcl-2、MRP5、LRPl等耐药基因的表达上调。结论采用浓度递增法可成功建立多药耐药的人脑胶质瘤细胞株且耐药性稳定，其耐药性可能与bcl-2、MRP5、LRPI的表达上调有关。
- 郭振涛刘宝辉喻军华冀保卫纪振刚吴立权田道锋陈谦学吴立权田道锋陈谦学
- 关键词：脑胶质瘤依托泊苷多药耐药性
- 胶质瘤细胞株化疗敏感性与骨形成发生蛋白4之间的关系被引量：6
- 2012年
- 目的探讨骨形成发生蛋白4（BMP4）与胶质瘤细胞化疗敏感性的关系。方法构建布有各级人脑星形胶质细胞瘤标本的组织芯片，评估BMP4与锰超氧化物岐化酶（MnSOD）、B淋巴细胞／白血病一2（bcl一2）表达的相互关系。构建替莫唑胺（TMZ）耐药细胞株，检测BMP4表达变化。转染BMP4质粒体进入多药耐药细胞株，检测对化疗药物敏感性变化。结果BMP4蛋白在标本中的平均吸光度（A）值于WHOI级中为0．3320±0．0065，WHOII级中为0．2485±0．0066，WHOHI级中为0．1701±0．0083，WH01V级中为0．0831±0．0077，其表达强度随肿瘤级别的增高存在降低趋势，差异有统计学意义（P〈0．05）；BMP4表达强度与MnSOD表达呈负相关（r=-0．821，P〈0．05），与bcl-2表达呈负相关（r=-0．711，P〈0．05）。TMZ耐药细胞株成功构建，其BMP4表达明显降低（P〈0．05）。将BMP4质粒体转染人耐药细胞株后，TMZ对空白组（耐药细胞株）的抑制率为（2．10±0．04）％，TMZ对转染组的抑制率为（45．70±2．20）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论BMP4与肿瘤的化疗敏感性相关，它与TMZ引起的胶质瘤细胞耐药有关。
- 刘宝辉陈谦学纪振刚郭振涛冀保卫朱晓楠董慧敏吴立权田道锋蔡强
- 关键词：胶质瘤化疗敏感性
- 阿霉素和BMP4在U251细胞中的作用及其信号通路被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨骨形成发生蛋白4（BMP4）在人脑胶质瘤细胞株U251中的作用及其信号通路.方法 阿霉素、BMP4质粒体分别给予U251细胞,BMP4的小干扰给予阿霉素处理过48 h的U251细胞,RT-PCR、荧光定量PCR和Western blot检测转染是否成功及BMP4、SMAD4的表达量.MTT检测细胞增殖活性,应用公式（1-处理组OD/空白组OD）×100%计算处理组细胞增长抑制率.结果 与空白组相比,阿霉素组和BMP4转染组,细胞增殖活性降低,BMP4高表达,SMAD4低表达;干扰组与阿霉素组相比,细胞增殖活性升高,BMP4低表达,SMAD4高表达.结论 阿霉素可以抑制U251细胞,BMP4与细胞抑制相关,BMP4通过BMP4-SMAD4信号通路抑制U251细胞,BMP4可能是胶质瘤治疗的新靶点.
- 刘宝辉田道锋吴立权王军民易伟冀保卫董慧敏陈谦学
- 关键词：神经胶质瘤SMAD4U251
- LRIG1在胶质瘤细胞系U251细胞中的作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白I（LRIG1）在胶质瘤细胞系U251细胞中的作用及引起的相关基因变化。方法以PEGFP-LRIG1质粒转染体外常规培养的U251细胞，同时设PEGFP-N1组和空白组作为对照，RT-PCR检测3组细胞LRIG1、GDNF、拓扑异构酶Ⅱ（TOPOII）基因表达的变化。Westernblotting检测细胞LRIGl蛋白的表达；绘制PEGFP-N1和PEGFP-LRIGl组细胞1-5d的生长曲线并计算替莫唑胺对2组细胞的抑制率。应用siGDNF和siLRIGl敲低U251细胞中GDNF和LRIG1的表达．同时设单纯siGDNF、siLRIGl组和空白组作为对照，比较细胞增殖率的变化。结果3组细胞LRIG1基因和蛋白、TOPOII和GDNF基因表达不同，差异有统计学意义（P〈0．05）；与PEGFP-N1组和空白组比较，PEGFP-LRIG1组细胞LRIG1基因和蛋白的表达较高，TOPOll和GDNF基因表达较低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。细胞生长1～5d时，PEGFP—LRIGl组细胞计数低于PEGFP-N1组，差异有统计学意义俨〈0．05）。加入替莫唑胺培养后，PEGFP—LRIGl组细胞抑制率高于PEGFP-N1组，差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblotting结果显示应用siGDNF和siLRIG1敲低LRIGJ和GDNF成功。siLRIGl组细胞抑制率高于对照组，siLRIGl＋siGDNF组胞抑制率低于siLRIGl组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LRIG1可以通过调节GDNF的表达来调节U251细胞的生长：LRIG1可以抑制GDNF、TOPOU的表达，提高胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性。
- 刘宝辉陈谦学李明昌郭振涛朱晓楠冀保卫董慧敏吴立权田道锋易伟
- 关键词：胶质细胞源性神经生长因子U251细胞
- 骨形成发生蛋白-4在胶质母细胞瘤的多药耐药中的作用及机制
- 2014年
- 骨形成发生蛋白（BMPs）是转化生长因子-β家族中的一员,在BMP家族中,包含30个成员,BMP-4是BMP家族的一个重要成员,它在1988年第1次被单克隆合成[1],研究证实：BMP-4与多种肿瘤相关[2],而在胶质瘤中已经发现BMP-4可以降低肿瘤细胞在裸鼠体内的成瘤率[3],体外实验则证实BMP-4可以抑制胶质瘤细胞的增殖[4],本研究旨在探讨其在胶质瘤多药耐药中的作用机制.
- 刘宝辉陈谦学田道锋吴立权董慧敏王军民张申起
- 关键词：骨形成发生蛋白胶质母细胞瘤BMP-4转化生长因子-Β胶质瘤细胞体外实验
- LRIG1抑制人脑胶质瘤细胞增殖的研究被引量：3
- 2013年
- 目的探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法分别构建携带LRIG1、LRIG1小干扰RNA、Bcl2和胶质细胞源性生长因子(BDMF)的质粒,将它们分别转染到人脑胶质瘤细胞系U251细胞内,应用细胞计数试剂盒8法检测细胞活性的变化,蛋白印迹法检测LRIG1、Bcl2、拓扑异构酶Ⅱ(topoⅡ)、GDNF的表达变化。结果成功构建携带LRIG1、LRIG1小干扰RNA、Bcl2、GDNF的质粒,并成功转入U251细胞株。过表达LRIG1显著抑制U251细胞增殖。蛋白印迹法结果显示LRIG1的表达和Bcl2、topoⅡ和GDNF的表达呈显著负相关。结论LRIG1通过负性调节Bcl2、topoⅡ和GDNF的表达抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞的增殖。
- 郭振涛刘宝辉邓钢田道锋张申起陈谦学
- 关键词：胶质瘤U251细胞细胞增殖
- 多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1与胶质瘤细胞株化疗敏感性之间的关系被引量：2
- 2012年
- 目的探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）与胶质瘤细胞化疗敏感性的相关性。方法替莫唑胺诱导构建多药耐药细胞株U251／TR，细胞计数试剂盒（CCK-8）检测该细胞株的多药耐药性，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LRIG1在U251和U251／TR中的表达变化。转染LRIG1质粒体进入多药耐药细胞株，检测其对化疗药物敏感性变化。结果成功构建多药耐药细胞株U251／TR，替莫唑胺、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱对U251的抑制率分别为：（19．30±0．04）％、（39．90±0．13）％、（28．10±0．09）％、（66．20±0．02）％、（26．30±0．11）％。而对U251／TR的抑制率分别为：（3．20±0．03）％、（15．30±0．09）％、（4．10±0．03）％、（45．60±0．10）％、（10．80±0．04）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。其LRIG1的表达明显降低，将LRIG1质粒体转入耐药细胞株后，TMZ、VP16、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素对空白组（耐药细胞株）的抑制率为（2．60±0．02）％、（3．30±0．02）％、（9．50±0．06）％、（2．20±0．05）％、（2．90±0．03）％，而对转染组的抑制率为（19．10±0．34）％、（38．20±0．53）％、（29．10±0．25）％、（15．20±0．55）％、（17．40±0．41）％，耐药性被逆转，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LRIG1与肿瘤的化疗敏感性相关，LRIG1可能与肿瘤的多药耐药有关。
- 丁建军郭振涛刘宝辉喻军华易伟冀保卫纪振刚吴立权田道锋陈谦学
- 关键词：胶质瘤化疗敏感性
- TopoⅡ与胶质瘤替莫唑胺化疗耐药性的关系
- 2012年
- 背景与目的:TopoⅡ与替莫唑胺(temozolomide,TMZ)治疗胶质瘤后产生化疗耐药的关系依然未清楚,本文探讨拓扑异构酶Ⅱ(topoⅡ)与胶质瘤细胞替莫唑胺化疗耐药性的关系。方法:替莫唑胺诱导构建耐药细胞株U251/TR,CCK-8法检测该细胞株的耐药性,RT-PCR法检测topoⅡ在U251和U251/TR中的表达变化。采用siRNA技术沉默耐药细胞株中topoⅡ的表达后,检测其对化疗药物敏感性变化。结果:成功构建TMZ耐药细胞株U251/TR,该细胞系对替莫唑胺有耐药性,其topoⅡ的表达明显升高,沉默topoⅡ的表达后,耐药性成功逆转。结论:TopoⅡ与替莫唑胺化疗耐药性有关。
- 杨吉安郭振涛喻军华刘宝辉吴立权田道锋陈谦学
- 关键词：替莫唑胺耐药细胞株
