长江学者和创新团队发展计划(PCSIRT08)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室绵阳师范学院更多>>
- 发文基金：四川省重点科学建设项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”高等学校科技创新工程重大项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭瘟病毒UL51基因在感染宿主细胞中的定位和转录特征
- 2010年
- 对鸭瘟病毒(DPV)UL51基因在感染宿主细胞内的定位和转录时相进行分析,为进一步研究该基因的特性和功能提供有用的试验数据和材料。构建pET32a-UL51原核表达载体,将其转化至E.coliBL21(DE3)中进行IPTG诱导表达后,用Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱层析法纯化该表达产物。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备兔抗UL51多克隆抗血清,通过间接免疫荧光和RT-PCR法检测该基因在DPV感染的鸭胚成纤维细胞(DEF)内的定位和转录情况。间接免疫荧光结果显示,最早可在感染后8h的胞浆中检测到特异性荧光点,24～36h有大量绿色荧光团块聚集于近核区域,之后随着细胞病变的增强,胞浆中的绿色荧光开始减弱,且在感染晚期的胞核中也出现了少量弥散的绿色荧光。RT-PCR结果显示,DPVU L51基因从感染后4h开始转录,其后转录量不断增大,从6～48h一直保持在较高水平,之后又降低。DPVU L51蛋白主要定位于感染的宿主细胞的胞浆中特别是近核区域,与其在α-疱疹病毒中的同源物的定位结果一致;并且与其他几种α-疱疹病毒的转录情况对比后,可认为该基因是一个晚期(γ类)基因。
- 沈婵娟程安春汪铭书文明招丽婵贾仁勇徐超孙涛葛菡周登春余波陈孝跃
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达间接免疫荧光RT-PCR
- 鸭肠炎病毒UL18基因的转录、表达特征及原核表达蛋白的初步应用
- 2018年
- 为了探讨鸭肠炎病毒（duck enteritis virus，DEV）UL18基因的特性和功能，本研究运用生物信息学软件对DEVUI，18基因及其编码蛋白进行了分析。构建原核表达质粒pET32a-UL18，并将其转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后获得了大小约为55000的pET32a／DEV-UL18重组蛋白。将该重组蛋白纯化后免疫家免，获得了兔抗pET32a／DEV-UL18重组蛋白高免血清。采用荧光定量RT-PCR和Westernblot对DEV感染鸭胚成纤维细胞（DEF）后uL18基因的转录和表达情况进行检测，采用间接免疫荧光对DEV感染鸭的肠道和食道进行检测。生物信息学分析结果表明，DEVUL18基因大小969bp，编码1条由322个氨基酸残基组成的多肽，含15个潜在的磷酸化位点和2个N-糖基化位点，合15个潜在的B细胞表位；系统进化树分析表明，DEVUL18属于＆一疱疹病毒的1个成员，与MeHV-1亲缘关系最近；密码子偏爱性分析结果表明，若对DEVUL18基因进行外源表达，真核表达系统可能更容易，若选择原核表达系统，则需对宿主表达菌进行选择和条件优化。荧光定量RT-PCR和westernblot结果表明，DEV感染DEF后2h，UL18基因开始转录，感染后12h开始表达，感染24h后转录和表达产物急剧上升，到36和48h后转录和表达产物分别达最大值，之后逐渐下降。间接免疫荧光结果表明，被DEV感染鸭肠道、食道等组织能检测到明显的阳性信号，表明制备的DEVUL18原核表达蛋白及其兔抗多克隆抗体可用于DEV的诊断试剂材料。
- 陈希文程安春汪铭书常华陈舜孙昆峰朱德康贾仁勇
- 关键词：鸭肠炎病毒分子特征原核表达间接免疫荧光
