上海市浦江人才计划项目(11PJ1407900)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：施菊妹吴晓松陶怡杨洸高敏杰更多>>
- 相关机构：同济大学中国人民武装警察部队上海市总队海门市人民医院更多>>
- 发文基金：上海市浦江人才计划项目国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
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- 体外扩增肾癌患者自体NK细胞及其对人肾细胞癌786-O细胞的杀伤被引量：1
- 2012年
- 目的:探究IL-15、4-1BBL基因修饰的人白血病K562细胞(modi-K562细胞)联合IL-2体外高效扩增肾细胞癌患者自体自然杀伤(natural killer,NK)细胞的方法,研究扩增前后NK细胞对肾癌细胞株786-O的杀伤作用。方法:10例肾癌患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)与modi-K562细胞在含不同浓度IL-2培养液中共育14 d,采用流式细胞术、Calcein-AM释放实验检测NK细胞的扩增情况、免疫表型及对肾癌786-O细胞的杀伤作用。结果:modi-K562细胞联合IL-2可有效扩增NK细胞,300 U/ml IL-2培养14 d时,NK细胞扩增(202.4±12.8)倍。在效靶比为20∶1时,扩增后NK细胞对786-O细胞的杀伤率为(72.0±4.3)%,显著高于扩增前NK细胞的杀伤率(34.2±3.6)%(P<0.01)。结论:IL-15、4-1BBL基因修饰的K562细胞联合IL-2在体外能有效扩增肾细胞癌患者NK细胞,扩增后NK细胞对肾癌786-O细胞的杀伤作用显著增强。
- 邵阳杨丰强郑军华施菊妹
- 关键词：肾细胞癌自体扩增
- 多发性骨髓瘤患者自然杀伤细胞体外扩增及其抗自体骨髓瘤作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨体外高效扩增多发性骨髓瘤(MM)患者自身自然杀伤细胞(NK细胞)的方法,研究扩增前和扩增后NK细胞对骨髓瘤细胞株U266和自体骨髓瘤细胞的杀伤作用。方法 10例MM患者的外周血单个核细胞与K562转基因细胞株在含不同浓度白细胞介素(IL)-2的培养液中共育14d,应用流式细胞仪,采用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法和铬51释放法等方法,研究NK细胞的扩增情况、增殖能力、免疫表型和抗骨髓瘤作用。结果 300U/mLIL-2共培养体系扩增NK细胞的扩增倍数为196.4±12.8,扩增后NK细胞存活率>95%,IL-2能增强共培养体系中NK细胞的增殖能力。在效靶比为10∶1时,扩增后NK细胞对自体骨髓瘤细胞的平均杀伤率为(38.1±6.2)%,显著高于扩增前的(3.9±1.7)%(P<0.01)。结论 K562转基因细胞株能特异性刺激骨髓瘤患者NK细胞扩增,扩增后NK细胞抗自体骨髓瘤的作用显著增强,扩增并活化的NK细胞将有望作为临床治疗MM的免疫治疗方法。
- 施菊妹邵阳吴晓松陶怡艾工文胡晓静侯军孟秀琴郑军华
- 关键词：自体自然杀伤细胞多发性骨髓瘤
- 丙戊酸钠增强骨髓瘤细胞对自然杀伤细胞敏感性及其机制的研究被引量：2
- 2013年
- 目的观察丙戊酸钠（VPA）对人类骨髓瘤细胞表面自然杀伤（NK）细胞活化性受体凝集素样同型二聚体（NKG2D）配体表达的影响，并研究VPA对NK细胞杀伤骨髓瘤细胞作用的影响及其机制，为骨髓瘤的免疫治疗提供实验依据。方法选用0．5、1、2、5mmol／LVPA处理人类骨髓瘤细胞ARK、OPM2，与无VPA处理的对照组进行比较，观察不同浓度VPA对细胞ARK、OPM2活力的影响。通过实时荧光定量PCR和流式细胞仪分别检测1mmol／LVPA处理的骨髓瘤ARK、OPM2细胞NKG2D配体在mRNA水平和蛋白质水平的变化。应用钙黄绿素释放法（CARE—LASS）检测VPA对NK细胞抗骨髓瘤活性的调节作用及机制。结果5mmol／LVPA处理ARK、OPM2细胞48h后，对骨髓瘤细胞活力有影响（P〈0．05）；与未处理细胞比较，1mmol／LVPA处理的两种骨髓瘤细胞MICA、MICB和ULBP2mRNA水平及蛋白质表达水平均增高（P〈0．05）。NK细胞对骨髓瘤细胞杀伤率增高，效靶比8：1时，VPA处理后ARK细胞杀伤率为60．2％，对照组为31．4％（P=0．018），VPA处理后OPM2细胞杀伤率为56．8％，对照组为22-3％（P=0．040）；且增强的杀伤率可以被NKG2D抗体特异性拮抗。NK细胞通过穿孔素和颗粒酶杀伤效应裂解肿瘤细胞。结论VPA明显上调骨髓瘤细胞的MICA／B、ULBP2表达，可增强NK细胞对骨髓瘤细胞的杀伤活性，NK细胞经穿孔素和颗粒酶杀伤途径杀伤骨髓瘤细胞，为骨髓瘤的临床免疫治疗提供了实验依据。
- 沙雪平蒋卫吴晓松高敏杰王宏梅施菊妹
- 关键词：丙戊酸NKG2D配体
- 体外扩增人NK细胞及其对白血病细胞杀伤作用的研究
- 2013年
- 目的通过体外扩增人NK细胞的方法,探讨扩增后NK细胞对K562和HL60白血病细胞株的体外杀伤作用及机制。方法抽取5例健康志愿者外周血,分离单个核细胞(PBMC),与基因修饰K562细胞共同培养,采用流式细胞仪检测NK细胞的表型,铬51释放法测定NK细胞对白血病细胞的杀伤率。结果基因修饰K562细胞在体外刺激NK细胞扩增202倍;扩增后NK细胞对白血病细胞K562、HL60的杀伤率分别为77.1%、61.2%(效/靶比为8:1),扩增前NK细胞对K562、HL60杀伤率分别为39.0%、35.4%;扩增后NK细胞表面活化受体NKG2D、NKp30和NKp44表达增强;这些活化受体特异抗体能部分抑制扩增后NK细胞的抗白血病作用。结论基因修饰K562细胞刺激NK细胞有效扩增,扩增后NK细胞杀伤白血病细胞作用明显增强,扩增后NK细胞表面部分活化受体上调可能为扩增后NK细胞抑制白血病作用增强的分子机制,NK细胞治疗在白血病中有潜在的应用前景。
- 蒋卫韩颖吴晓松吴慧群施菊妹
- 关键词：自然杀伤细胞扩增白血病
- 自然杀伤细胞对人乳腺癌细胞株的杀伤作用及其机制被引量：2
- 2013年
- 目的观察体外扩增自然杀伤(NK)细胞的表型,探讨其对不同乳腺癌细胞株的杀伤作用及其机制。方法抽取健康志愿者外周血15mL,分离单个核细胞,与基因修饰的K562细胞共培养,应用流式细胞仪采用Calcein释放法检测NK细胞的表型,计算NK细胞对乳腺癌细胞株MDA-MB231和MCF-7的杀伤率。结果扩增后NK细胞、自然杀伤T细胞(NKT细胞)、T淋巴细胞的平均含量分别为(74.2±12.9)%、(19.1±10.8)%、(4.3±0.8)%,与扩增前的(12.6±6.2)%、(7.7±2.7)%、(55.5±8.8)%比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。扩增后NK细胞的杀伤细胞活化受体NKG2D、NKp30、NKp44和DNAX辅助分子1(DNAM-1)的表达阳性率分别为(83.4±4.3)%、(80.6±5.1)%、(20.9±2.7)%和(87.2±3.9)%,均显著高于扩增前的(17.0±2.1)%、(18.0±1.8)%、(1.4±0.4)%和(50.1±4.9)%(P值均<0.05)。扩增后NK细胞对MDA-MB231、MCF-7乳腺癌细胞株的杀伤率分别为(61.7±8.0)%、(66.1±3.5)%,均显著高于扩增前的(28.2±3.2)%、(29.6±2.8)%(P值均<0.05)。扩增后主要活化分子的对照抗体、抗NKG2D抗体、抗NKp30抗体、抗NKp44抗体、抗NKp46抗体、抗DNAM-1抗体和联合全部抗体抑制NK细胞对MCF-7乳腺癌细胞株的杀伤率分别为(69.3±4.2)%、(43.6±3.5)%、(49.3±2.8)%、(47.1±4.9)%、(65.3±5.6)%、(41.1±3.8)%和(19.8±2.1)%。结论扩增后NK细胞表达部分活化分子增强,其对乳腺癌细胞的杀伤作用明显增强,扩增后NK细胞具有增强的抗肿瘤活性可能与这些活化分子高表达有关。
- 祖卫兵高敏杰高路杨洸姜卫星朱峰吴晓松施菊妹
- 关键词：自然杀伤细胞扩增体外乳腺癌
- 蛋白酶体抑制剂治疗多发性骨髓瘤现状被引量：4
- 2013年
- 多发性骨髓瘤（MM）是骨髓浆细胞克隆性增殖的血液系统恶性肿瘤，其发病率约占血液系统肿瘤的10％。蛋白酶体是细胞内的一种复合酶，它可以降解泛素标记的蛋白，调节细胞内蛋白水平，在保持细胞内环境的稳定中起重要作用。近年来，新型靶向药物蛋白酶体抑制剂的应用，使MM的治疗取得了很大的进展，进一步改善了骨髓瘤的治疗疗效。硼替佐米是首个获美国食品和药物管理局（FDA）批准用于MM临床治疗的蛋白酶体抑制剂，它能可逆地抑制26S蛋白酶体糜蛋白样活性。但是，大多数硼替佐米初治后缓解的患者因产生耐药而最终导致疾病复发，因此，人们开始寻找与硼替佐米作用机制不同的蛋白酶体抑制剂。目前研究发现了一些能特异地结合蛋白酶体活性位点并且不可逆的抑制其功能的抑制剂，这些药物正在进行相关的临床试验。对已用于治疗MM的蛋白酶体抑制剂硼替佐米进行讨论，并对正在进行前期临床试验的新型蛋白酶体抑制剂进行概述，旨在解决硼替佐米的耐药性问题。
- 杨洸陶怡施菊妹
- 关键词：多发性骨髓瘤蛋白酶体抑制剂耐药
