厦门市科技计划项目(3502Z20055002)
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 相关作者：张军罗文新夏宁邵王明桥陈瑛炜更多>>
- 相关机构：厦门大学汕头大学更多>>
- 发文基金：福建省科技重大专项厦门市科技计划项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选被引量：4
- 2006年
- 本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选。整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用。将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体。
- 陈瑛炜罗文新王明桥王晋李利峰袁权张军夏宁邵
- 关键词：噬菌体抗体库
- 高致病性禽流感病毒H5N1中和抗体的单链抗体构建与活性鉴定被引量：4
- 2007年
- 在本实验室研制出的多株针对H5N1血凝素的鼠单抗中,10F7对34株H5N1病毒株都有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强、识别谱广的特点。通过基因工程构建10F7单链抗体(scFv)表达重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化scFv,经血凝抑制实验及中和实验检测其活性。结果在针对3株病毒的血凝抑制实验中,10F7scFv蛋白对其中2株H5N1病毒均显示出结合活性,而对H9毒株没有反应。在针对7株H5N1病毒的中和实验中,10F7scFv对5株病毒具有较好的中和能力。H5N1广谱中和抗体10F7的单链抗体构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。
- 方钟罗文新王明桥陈瑛炜张军陈鸿霖管轶夏宁邵
- 关键词：单链抗体血凝抑制
- 多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用被引量：5
- 2006年
- 目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1,构建人源天然噬菌体抗体库,测序分析抗体基因的家族信息和多样性,并用多种抗原对其进行筛选。结果:获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库。分别用5种抗原对其进行筛选,均可获得特异性噬菌体抗体的富集。结论:成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库,可用于制备具有应用前景的人源抗体。
- 王晋罗文新李利峰陈瑛炜王明桥张军夏宁邵
- 关键词：单链抗体多样性
