国家质检总局科技计划项目(2007IK202)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：浦昀杨怀宁徐卉李娟陈晓亮更多>>
- 相关机构：吉林出入境检验检疫局吉林大学第一医院吉林大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种梅毒螺旋体重组抗原胶体金的制备被引量：4
- 2010年
- 目的制备一种可以特异、准确的检测血清中梅毒螺旋体抗体的胶体金免疫层析试纸。方法利用原核表达系统构建一种包含梅毒螺旋体多个免疫表位的重组抗原B1,采用ELISA的方法对重组抗原进行活性检测。胶体金标记重组抗原B1,制备胶体金免疫层析试纸。结果重组抗原B1在BL21表达载体中有较高表达,ELISA结果显示B1与梅毒患者血清能特异、敏感的结合,与乙型肝炎病毒血清及阴性血清无交叉反应。应用B1蛋白制备的胶体金诊断试纸检测100份梅毒标准血清,结果均为阳性,与乙型肝炎患者血清及健康人群血清无交叉反应。结论梅毒螺旋体胶体金快速诊断试纸具有良好特异性和敏感性,可以快速、准确的诊断梅毒螺旋体的感染。
- 陈晓亮浦昀徐卉徐国良李娟杨怀宁
- 关键词：梅毒螺旋体重组抗原胶体金免疫层析
- HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定
- 2008年
- 目的:在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法:人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白,逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性,免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果:目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44000的蛋白带,与设计相对分子质量相符。免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合,与其他患者血清无交叉反应。结论:成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性。
- 杨怀宁徐卉浦昀于湘晖张煜赵大力孙志伟
- 关键词：人免疫缺陷病毒合成基因活性鉴定
