广东省科技计划工业攻关项目(A302020101)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：彭展陈系古张可飞葛坚高楠更多>>
- 相关机构：中山大学广州医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省科技计划工业攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猴表皮干细胞横向分化为角膜上皮细胞的研究被引量：7
- 2006年
- 表皮干细胞可以作为角膜上皮细胞的替代物，在自体眼表修复及组织工程生物角膜的构建中将产生不可估量的作用．将体外分离培养的2～4代猴表皮干细胞和人角膜缘基质组织及角膜上皮细胞进行共培养Crranswell法），于共培养前后使用流式细胞仪、RT—PCR和免疫组织化学技术对其分化情况进行检测和鉴定．并于第2，4，6，8和10天进行免疫组织化学染色观察表皮干细胞转分化的比率．实验采用条件培养基诱导法作为对照．表皮干细胞在共培养前表达表皮干细胞标志，K15和整合素β1阳性，K3／K12阴性；共培养后转为表达K3／K12，从基因水平和蛋白质水平表现出角膜上皮细胞的特征，但是条件培养基诱导法阳性率较低．可见，表皮干细胞具有可塑性，在角膜缘基质组织及角膜上皮细胞的调控下，可以横向分化为类角膜上皮细胞，有可能重建角膜上皮，进行自体生物角膜的构建．
- 高楠王智崇黄冰葛坚陈系古卢蓉张可飞范志刚卢丽彭展崔光辉
- 关键词：表皮干细胞角膜上皮细胞
- 应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点被引量：2
- 2006年
- 目的:探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞,为组织工程学的进一步研究奠定基础。方法:实验于2005-07/12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成。健康3个月龄恒河猴2只,分离与培养猴表皮细胞,获取第2～4代的细胞,消化后,将细胞重新放回原瓶中,培养箱中静置20min,获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞。①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞。②对20min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测,以未经吸附分选的细胞作为对照。③20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片,进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色。④20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1(K10对应角蛋白)的mRNA反转录聚合酶链反应的检测。结果:①分选后的细胞体积较小,核浆比例较大。②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主(α6briCD71dim为82.5±1.641),也含有少量的短暂扩增细胞(α6briCD71bri为4.9±2.125),有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到(α6dim)。③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性,K10阴性;分选后未黏附细胞K10为阳性,而K15和整合素β1均为阴性。④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素,K10没有表达;而分选后剩余的细胞只表达K10。结论:原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法。
- 高楠黄冰葛坚王智崇陈系古张可飞彭展李彦峰
- 关键词：表皮干细胞细胞分离
- 猴表皮干细胞的分离和培养被引量：5
- 2006年
- 目的:探索猴表皮干细胞分离纯化和培养方法。方法:将猴皮肤标本剪成皮条,加入0.25%胰酶浸泡过夜;然后去除角质层,刮上皮面获取表皮细胞进行培养。取第2-4代的细胞,经消化后,用Ⅳ型胶原黏附法获得为快吸附的表皮细胞。对快吸附的表皮细胞行流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR检测。结果:快吸附细胞从mRNA转录水平及蛋白表达水平均呈现表皮干细胞的特性:β1整合素、K15和α6整合素阳性,而CD71和K1/K10阴性。结论:所采用的分离纯化方法和培养条件适合猴表皮干细胞的分离纯化及生长。
- 张可飞黄冰葛坚王智崇陈系古高楠彭展李彦峰
- 关键词：恒河猴表皮干细胞
- 囊胚显微注射建立嵌合体动物进行表皮干细胞可塑性的初步研究
- 目的:我们前期工作发现给予特定的微环境,表皮干细胞在体外可以分化为结、角膜上皮样细胞。鉴于此,通过构建猴—鼠嵌合体模型,进一步研究表皮干细胞在体内胚胎微环境中是否具有多向分化的潜能,从而为成体干细胞可塑性研究提供良好的工...
- 江儒章葛坚黄冰宋革段永恒刘敬波孙雪荣贾秀华
- 文献传递
