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淀粉样前体蛋白-C端片段对胚鼠原代皮层神经元cofilin磷酸化的影响: 2015年; 目的探讨淀粉样前体蛋白-C端游离片段(APP-CTFs)对ADF/cofilin的影响及作用机制。方法 APP-CT99-pEGFP转染胎鼠原代皮层细胞,采用细胞免疫组化方法和蛋白印迹方法观察磷酸化cofilin和LIMK1的分布形态和表达水平。处理S3肽,LIMK1的特异性竞争性抑制剂后再观察磷酸化cofilin表达。结果细胞免疫组化实验结果,转染APP-CT99-pEGFP的细胞中,磷酸化cofilin和LIMK1在细胞质和细胞核中均有分布,与空载体转染组比较分布较高。S3肽处理后,磷酸化cofilin的表达水平减少。蛋白印迹实验结果,转染APP-CT99-pEGFP的细胞中,磷酸化cofilin和LIMK1蛋白水平增高,与空载体转染组比较具有显著性差异(P<0.05)。S3肽处理后,磷酸化cofilin蛋白水平降低。结论 APP-CTFs通过LIMK1激酶调控cofilin磷酸化。; 李光哲程琳陈慧元红花许妍姬; 关键词：COFILIN 磷酸化

刺五加提取液对小鼠学习记忆障碍和淀粉样前体蛋白酶解通路影响及作用机制被引量：5: 2019年; 目的研究刺五加提取液对衰老模型小鼠学习记忆障碍和淀粉样前体蛋白(APP)酶解通路的影响及作用机制。方法70只2月龄雄性昆明种小鼠随机分为正常对照、衰老模型、衰老+刺五加低剂量、衰老+刺五加中剂量、衰老+刺五加高剂量、刺五加高剂量、衰老+维生素E组,共7组。连续55d颈后皮下注射D-半乳糖(200mg/kg)建立衰老模型,运用Morris水迷宫及行为学测量方法,观察小鼠学习记忆能力。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测脑组织中α、β、γ-分泌酶、β淀粉样蛋白(Aβ)1~42及可溶性APP(sAPP)α含量;Western印迹法检测脑组织中去整合素-金属蛋白酶(ADAM)10、β-分泌酶(BACE)1、衰老蛋白(PS)1、糖原合成酶激酶(GSK)-3β、磷酸化(Phospho)-GSK-3β(Ser9)表达水平。结果行为学显示,随着刺五加提取液浓度的提高,小鼠的学习记忆能力得到一定的巩固和强化,衰老小鼠的记忆障碍得到了一定改善。生化学显示,与衰老组比较,刺五加提取液可以增强α-分泌酶活性,抑制β、γ-分泌酶的活性,增加组织内的sAPPα含量及有效抑制Aβ1~42产生。Western印迹法检测显示,与正常对照组比较,衰老模型组GSK-3β、BACE1蛋白表达水平上调;ADAM10、Phospho-GSK-3β(Ser9)蛋白表达水平下降;与衰老模型组比较,刺五加组ADAM10、Phospho-GSK-3β(Ser9)蛋白表达水平明显升高,GSK-3β、BACE1、PS1蛋白表达水平明显降低(均P<0.05)。结论刺五加通过增加α-分泌酶活性,抑制β、γ-分泌酶活性,增加sAPPα生成,减少Aβ1~42产生,降低BACE1蛋白表达水平,可能对APP酶解通路起到一定作用,改善小鼠学习记忆障碍,对阿尔茨海默病的发病及进展有一定预防保护作用。; 朱雯菲付朝旭代霖许妍姬; 关键词：MORRIS水迷宫

淀粉样前体蛋白C端片段对细胞骨架状态的影响: 2016年; 【目的】探讨大鼠胚胎神经元内转染淀粉样前体蛋白C端片段对细胞骨架状态的影响。【方法】大鼠胚胎大脑皮层获得原代神经元进行培养,利用APP-C端片段、APLP2-C端片段基因重组质粒转染到神经元当中,用免疫染色的实验方法,观察肌动蛋白(actin)、微管蛋白(tubulin)、微管相关蛋白(MAP2),磷酸化丝切蛋白(Ph-cofilin)的形态,并用Western Blotting方法测定了Ph-cofilin水平,每组实验重复测量十次。【结果】APP/APLP2-CTFs转染组与对照组相比有明显的向细胞外伸展的F-actin的重新聚合,细胞四周伸出的突触有所收缩;tubulin的结构发生紊乱;轴突当中的MAP2蛋白表达显著减弱,而且APP-C99组的MAP2蛋白的表达水平最低。蛋白印迹和免疫组化结果均显示APP/APLP2-CTFs转染组与对照组相比Ph-cofilin水平有所增高(P <0.05)。【结论】转染淀粉样前体蛋白C端片段可以诱导细胞骨架蛋白和状态的改变。; 许敢峰刘芳陈慧许妍姬; 关键词：ACTIN TUBULIN MAP2

阻断淀粉样前体蛋白-C端片段毒性通路对Cofilin磷酸化的影响被引量：1: 2015年; 目的本研究欲探讨阻断淀粉样前体蛋白-C端片段(Amyloid Precursor Protein C Terminal Fragments,APP-CTFs)毒性通路对Cofilin磷酸化的影响方法大鼠胚鼠大脑皮层神经元细胞培养,采取3种方法阻断APPCTFs毒性通路。1APP-695转染后γ-内切酶抑制剂DAPT处理2利用YENPTY段删除的pEGFP-APP C99,C57转染至大鼠神经元细胞3GSK-3β抑制剂LiCl处理,3种方法阻断后,均采用蛋白印迹方法检测Ph-cofilin蛋白水平。结果 DAPT处理组与未处理组比较Ph-cofilin蛋白表达水平降低(P<0.05)。转染YENPTY段删除的pEGFPAPP CTFs组未能明显增强磷酸化Cofilin的蛋白表达水平(P>0.05),虽然转染APP-CT99,57-pEGFP组与空载体对照组相比较,Ph-Cofilin蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。LiCl处理组与非处理组相比,Ph-Cofilin蛋白表达无明显改变(P>0.05)。结论提示APP-CTFs诱导的Cofilin磷酸化过程与APP-CTFs核转移毒性通路有关,但与其诱导的GSK-3β-Tau毒性通路无关。; 陈慧许妍姬; 关键词：COFILIN

硒、锌对Aβ_(25-35)诱发胚鼠神经元细胞损伤和神经毒性的影响被引量：5: 2015年; 目的研究硒、锌对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导胚鼠神经元细胞神经毒性的保护作用。方法将胚鼠神经元细胞用10mol/L Aβ_(25-35)处理,建立体外老年痴呆模型。采用细胞形态学方法、噻唑蓝比色法(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)检测法、微量丙二醛(MDA)检测法、过氧化氢(H_2O_2)含量检测法、一氧化氮(NO)含量检测法、蛋白印迹法检测糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)、磷酸化Tau蛋白(ph-Tau)水平。结果 Aβ_(25-35)损伤组与对照组比较MTT代谢率下降,LDH释放量增多,MDA含量增高,H_2O_2含量增高,NO含量增高,GSK-3β、ph-Tau水平增高,硒、锌和硒锌联合处理组均不同程度地减少Aβ_(25-35)的细胞毒性,硒保护作用差异显著。结论微量元素硒、锌对Aβ_(25-35)处理胚鼠神经元细胞损伤和毒性具有一定的保护作用,硒比锌的保护效果好。; 徐翠许妍姬; 关键词：细胞毒性

鱼油联合锌硒对衰老模型小鼠学习记忆障碍及淀粉样前体蛋白酶解通路的保护作用被引量：4: 2020年; 目的探讨鱼油联合锌硒对衰老模型小鼠学习记忆障碍及淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)酶解通路的保护作用。方法在体外细胞实验中,用0.1μmol/L的二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、锌(Zn)、硒(Se)分别处理高分化的PC12细胞及APP695稳定转染的CHO细胞,共分为正常对照、抑制剂、EPA、DHA、EPA+DHA+Se、EPA+DHA+Se+Zn 6组。使用酶联免疫吸附测定方法(ELISA)测定细胞培养上清液中β、γ-分泌酶活性及Aβ1-40含量。在体内试验中,将60只两月龄雄性昆明小鼠随机分为正常对照、衰老、鱼油、鱼油+硒、鱼油+锌+硒及阳性对照6个组。连续腹腔注射200 mg/kg D-半乳糖建立衰老模型,采用ELISA法检测血清中β、γ-分泌酶活性;使用Morris水迷宫及跳台方法检测鱼油联合锌硒对衰老模型小鼠学习记忆障碍的保护作用。结果体外细胞实验显示,EPA、DHA处理组与正常对照组相比细胞上清液中β、γ-分泌酶活性受到抑制,Aβ1-40的含量降低;EPA、DHA、Zn、Se联合应用对细胞上清液中β、γ-分泌酶活性抑制作用增强。小鼠动物实验显示,与衰老组比较,鱼油、锌、硒处理组能够抑制血清β、γ-分泌酶活性;且鱼油联合锌硒抑制效果增强。行为学测试结果表明,鱼油联合锌硒缓解衰老模型小鼠学习记忆障碍。结论鱼油联合锌、硒对APP酶解通路具有较好的保护作用,并能减轻小鼠学习记忆障碍。; 付朝旭许妍姬; 关键词：二十碳五烯酸硒锌学习记忆

淀粉样前体类蛋白2-C端不同片段对S100A9蛋白表达的影响: 2013年; [目的]探讨淀粉样类前体蛋白2-C端不同片段(APLP2-CTFs)对S100A9蛋白表达的影响.[方法]将pEGFP-APLP2-C57,C50,C31转染BV2细胞,采用蛋白印迹方法和RT-PCR方法检测S100A9蛋白表达和mRNA水平.[结果]转染pEGFP-APLP2-C57,C50,C31的细胞中,S100A9蛋白表达和mRNA水平均增高,与空载体转染组比较差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]转染APLP2-CTFs使S100A9蛋白表达和mRNA水平均增高.; 程琳许妍姬徐裕宪; 关键词：C端片段

硒、锌干预对体外淀粉样前体蛋白酶解通路的影响被引量：1: 2016年; 目的研究硒、锌干预对体外淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)酶解通路的影响。方法用0.1μmol/L的硒、锌处理胚鼠皮层神经元细胞,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测γ-内切酶活性;另用脂质体转染构建APP695高表达CHO细胞系,用G418(500mg/L)对转染后细胞进行筛选,最终获得表达人CHO-APP695细胞模型,Western-blot法检测APP-N端片段蛋白的表达。用0.1μmol/L的硒、锌处理转染细胞,48h后,ELISA法检测细胞培养上清中Aβ1-40含量,Western-blot法检测细胞裂解液APP-N端片段蛋白的表达。结果 Western-blot法检测显示CHO-APP695细胞高表达APP-N端片段蛋白;与对照组比较,硒、锌处理组抑制内源性γ-内切酶的活性,且硒、锌联合使用,抑制作用增强;Aβ1-40的含量也减少;单纯硒、锌和硒锌联合处理组,APP-N端片段蛋白表达水平增加。结论硒、锌抑制内源性γ-内切酶对APP蛋白的剪切,减少Aβ1-40的生成,可能对阿尔茨海默病的发病及进展有一定的预防保护作用。; 刘芳许妍姬; 关键词：硒 Β淀粉样蛋白体外

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国家自然科学基金(81160159)

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