江苏省重点实验室开放基金(0273896034819)
- 作品数：9 被引量：52H指数：3
- 相关作者：耿士忠焦新安更多>>
- 相关机构：扬州大学更多>>
- 发文基金：江苏省重点实验室开放基金江苏省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 沙门菌果蝇感染致死模型构建及其评价被引量：1
- 2019年
- 目的为了比较不同沙门菌对果蝇致死毒力,建立果蝇沙门菌肠道感染模型,并进行模型评价。方法将鼠伤寒沙门菌SL1344、14028S和肠炎沙门菌C50041及其突变株C50041ΔspiC,以OD_(600)为100的高浓度菌液通过饲喂法和针刺法,分别感染30只CS型果蝇和yw型果蝇,每隔3 h观察活果蝇数,计算存活率,分析沙门菌毒力。结果肠炎沙门菌C50041和C50041ΔspiC饲喂果蝇,120小时后CS型果蝇存活率0%,yw型果蝇的存活率低于20%,而针刺法感染CS型果蝇和yw型果蝇存活率则高于80%;鼠伤寒沙门菌饲喂法感染CS型果蝇和yw型果蝇,其存活率均高于90%。针刺法存活率均高于60%。比较分析显示,鼠伤寒沙门菌肠道感染耐受和肠炎沙门菌肠道感染敏感,存在明显的差异;肠炎沙门菌对果蝇肠道感染模式的毒力明显高于非肠道感染模式,不同果蝇品系之间则无明显的差异。结论本研究中,果蝇沙门菌肠道感染模型被成功建立,并能够评价不同沙门菌的毒力,其中肠炎沙门菌C50041果蝇肠道感染呈高度敏感,为后续肠炎沙门菌功能基因鉴定研究奠定基础,便于深入研究沙门菌致病机理。
- 耿士忠席俊萌杨家兴孙大泉韦有恒潘志明焦新安
- 关键词：沙门菌果蝇毒力存活率
- 鸡白痢沙门菌S06004ΔspiC突变株的构建与鉴定被引量：13
- 2014年
- 为了研究spiC基因对鸡白痢沙门菌致病性的影响,采用同源重组方法构建该基因缺失株。以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增spiC基因上、下游DNA片段作为等位基因;将上游片段、卡那霉素抗性基因(KmR)及下游片段依次连接并克隆到pGMB151自杀性质粒上,构建重组自杀质粒pGMB151-ΔspiC/KmR,通过大肠杆菌χ7213与鸡白痢沙门菌S06004固相杂交,将质粒转入S06004中,运用反向筛选法获得含KmR基因的spiC基因缺失株(ΔspiC/KmR);再使用编码FLP重组酶的温度敏感型质粒pCP20敲除KmR,获得无抗性ΔspiC。PCR鉴定和测序结果显示,spiC基因被成功缺失。血清型、生化特性、生长特性、耐药性等鉴定表明,S06004ΔspiC未发生理化特性改变。本研究成功构建了spiC基因缺失株S06004ΔspiC,为进一步研究鸡白痢沙门菌致病性变化及spiC基因的功能奠定了重要基础。
- 耿士忠刘男男焦新安刘欢郭荣显钱珊珊李昱辰潘志明
- 关键词：鸡白痢沙门菌基因敲除
- SG97A平衡致死系统的构建及其初步应用
- 2015年
- 敲除鸡伤寒沙门菌(SG)减毒疫苗株97Aasd基因,构建宿主载体平衡致死系统并表达新城疫病毒(NDV)F蛋白,构建二价活菌苗。PCR扩增两段位于asd基因外侧的序列作为等位基因,以氯霉素抗性(CmR)基因替代asd基因,构建自杀质粒pGMB151Δasd::CmR,通过E.coliχ7213与SG97A固相杂交,将质粒转入SG97A,反向筛选获得SG97AΔasd::CmR,利用质粒pCP20去除CmR后,DAP的依赖菌株命名为SG97AΔasd。将含asd基因的质粒pYA3334转入SG97AΔasd中构建宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白。结果表明,通过等位基因重组方法,成功构建SG97AΔasd及宿主载体平衡致死系统,重组菌能够表达NDV-F蛋白,并能在鸡体内诱导产生特异性抗体。本研究成功构建SG97AΔasd宿主载体平衡致死系统,并表达NDV-F蛋白及其诱导宿主产生抗体,为应用该系统构建二价活菌苗的研究奠定了基础。
- 耿士忠陈晓娟潘志明焦新安
- 肠炎沙门菌sifA基因缺失株的无痕构建及其在巨噬细胞内的增殖特性研究被引量：1
- 2020年
- 目的本研究旨在探究sifA基因对肠炎沙门菌胞内寄生和增殖的影响,以探索肠炎沙门菌的致病机理。方法根据同源重组原理,无痕构建肠炎沙门菌C50041的sifA基因缺失株,通过蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法对基因缺失株进行鉴定,并从生物学特性、胞内沙门菌增殖、sifA基因在胞内外菌中表达等方面,分析sifA基因对肠炎沙门菌的影响。结果成功构建肠炎沙门菌C50041ΔsifA,蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法证明该菌株是正确的。其生长速度和生化特性没有发生改变。ΔsifA株感染巨噬细胞后,其胞内沙门菌量显著少于其野生株。sifA基因在spiC基因缺失株中表达量增加。结论肠炎沙门菌C50041ΔsifA被成功构建,其在巨噬细胞内的增殖量显著降低,sifA基因表达可能受spiC基因调控,本研究为深入探究肠炎沙门菌在细胞内增殖及sifA基因的功能奠定基础。
- 刘桂凤杨家兴丁炜王耀楠蔡媛张健王洋耿士忠潘志明焦新安
- 关键词：肠炎沙门菌同源重组
- 鸡白痢沙门菌研究进展被引量：17
- 2014年
- 本文就鸡白痢沙门菌的基因组学、与鸡伤寒沙门菌的鉴别方法、感染与致病机制、防治措施等方面的研究进展进行总结,以期为相关研究提供参考。
- 耿士忠郭荣显焦新安潘志明
- 关键词：鸡白痢沙门菌基因组学致病机制
- 沙门菌R-M系统hsdM基因对转座子转座效率的抑制效应
- 2021年
- 转座子是一种能够在转座酶作用下随机插入到宿主基因组中的DNA可移动元件,常被用作挖掘宿主功能基因的工具。细菌宿主限制性修饰系统(R-M)能够稳定基因组,抑制转座子插入基因组中。为了分析沙门菌R-M系统对外源转座子插入的抑制效应,本研究利用自杀质粒的方法构建SL1344的hsdM基因缺失株,制备其相应的Mini-Tn5和TnSC189转座子突变库,通过平板计数,计算并比较转座效率,分析hsdM基因对转座子转座效率的抑制效应。结果显示,Mini-Tn5和TnSC189转座子对S06004的转座效率均显著高于SL1344和C50041,TnSC189对三种血清型沙门菌转座效率均高于Mini-Tn5。而hsdM基因缺失显著提高了对SL1344的转座效率,表明hsdM基因表达对转座子基因组插入存在显著的抑制效应。本研究证实,沙门菌hsdM基因能够抑制外源转座子插入和维持基因组稳定性的功能,为hsdM基因稳定基因组的机制研究奠定了基础。
- 刘桂凤钱天瑶黄鹏王耀楠耿士忠焦新安
- 关键词：沙门菌转座子
- 肠炎沙门菌运动缺陷突变株的筛选及其突变基因鉴定
- 2022年
- 为挖掘介导肠炎沙门菌运动能力的功能基因,深入研究沙门菌运动及致病机制,采用转座子突变技术构建肠炎沙门菌C50041突变库,筛选获得运动性弱或无的突变株;在突变株运动缺陷表型确认后,提取细菌基因组DNA,PCR扩增转座子在细菌基因组中所插入的侧翼序列,并对侧翼序列进行基因测序进行Blast比对相似度,确定突变失活的基因。结果显示:从Tn5转座子突变库中筛选了10000多株突变株,从中筛选出10株运动性缺陷的突变株,并成功PCR扩增每个突变株转座子侧翼序列,通过Blast比对初步确定fliP、fliD、rfaL、rfbK、cpsG、csrD 6个基因的失能导致肠炎沙门菌运动缺陷,其中fliD、fliP和cpsG为鞭毛合成相关基因,rfbK和rfaL为脂多糖合成相关基因,csrD为调控基因。研究结果为进一步探讨沙门菌运动性及致病机制奠定了基础。
- 黄鹏陈敬蔡媛刘桂凤耿士忠
- 关键词：肠炎沙门菌运动性转座子鞭毛功能基因
- 沙门菌毒力岛的研究进展被引量：23
- 2015年
- 沙门菌是导致人和动物疾病的主要食源性病原菌,沙门菌毒力岛(SPI)的存在与其致病作用密切相关。近年来,有关沙门菌毒力岛的结构特征及致病机制的研究颇受重视。本文主要对沙门菌毒力岛的结构组成与功能等研究进展作一综述。
- 薛颖郭荣显钱珊珊安树敏焦新安耿士忠
- 关键词：沙门菌毒力基因
- 2020—2021年江苏地区散户鸭场沙门氏菌流行病学调查
- 2023年
- 为了解江苏地区鸭源沙门氏菌流行情况,促进鸭养殖场沙门氏菌病防控,试验对1285份样品进行沙门氏菌分离、血清型鉴定、耐药性分析及基于脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法分子分型。结果显示:共分离207株沙门氏菌,分离率为16.10%,鼠伤寒沙门氏菌为主要优势血清型(44.44%);抗生素耐药性分析表明,多重耐药现象严重,耐药种类在3种及以上的沙门氏菌分离株占85.51%;随机选取来源于7个市的43株鼠伤寒沙门氏菌PFGE亚分型显示,这些菌株可以分为4个聚类簇,同一市鼠伤寒沙门氏菌分离株同源性较高,也存在部分菌株同源性相差较大的现象,不同市鼠伤寒沙门氏菌分离株存在同源性较高的现象。研究表明,江苏地区散户鸭场沙门氏菌流行率较高,抗生素耐药性及多重耐药性严重,分离株可能有相同来源或者互相传播现象。
- 丁鑫谢添沈子城高冉夏泽淼耿士忠焦新安
- 关键词：沙门氏菌流行病学调查耐药性PFGE
