国家高技术研究发展计划(2001AA217131)
- 作品数：24 被引量：122H指数：5
- 相关作者：于继云陈虎毛宁冯凯陈兴更多>>
- 相关机构：军事医学科学院解放军第307医院第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 间充质干细胞分泌TGF-β1抑制异体T细胞反应性被引量：57
- 2002年
- 为探讨骨髓间充质干细胞(MSC)诱导异体T细胞反应性下降的机制,应用流式细胞术检测了异体T细胞与骨髓间充质干细胞共培养前后CD4,CD8,CD25和CD28等的变化,同时应用RT-PCR测定MSC是否表达IL-4,IFN-γ和TGF-β1等细胞因子,并用ELISA的方法验证培养上清中蛋白的存在。结果显示,异体T细胞与MSC共培养后,CD8^+细胞增多,CD25^+细胞减少。RT-PCR检测结果证明MSC高表达TGF-β1基因,但不表达IL-4和IFN-γ基因。ELISA证实MSC培养上清存在TGF-β1蛋白,其72小时分泌量约为1ng/ml。结论:骨髓MSC在体外可使异体T细胞对异体抗原的反应性减低,这种作用体现在细胞亚群的改变与MSC分泌TGF-β1有关。这一研究结果为预防HLA不相合骨髓移植中GVHD的发生提出了一条新的思路。
- 陈健琳郭子宽徐晨李欲航侯春梅毛宁陈虎
- 关键词：骨髓间充质干细胞T淋巴细胞TGF-Β1免疫反应流式细胞术
- SLC基因修饰树突状细胞及不同免疫方式抗肿瘤作用探讨被引量：4
- 2006年
- 目的:应用次级淋巴组织趋化因子(SLC)成熟肽基因/重组腺相关病毒(rAAVSLC)转染树突状细胞(DC),探讨一种基因修饰DC的新方法及其抗肿瘤的生物学活性。方法:体外构建rAAVSLC,按MOI为10、50、100与腺病毒(Ad2)协同转染小鼠骨髓来源成熟和未成熟DC,GFP作为成功转染的示踪蛋白。RTPCR在mRNA水平、ELISA在蛋白水平检测SLC表达,Transwell检测转染DC的培养上清对T细胞的趋化作用。瘤苗的在体效应通过C57BL/6J小鼠肿瘤模型验证。皮下接种Hepal6肿瘤细胞后成瘤小鼠分成3组:①生理盐水对照组,瘤内或足垫注射NS;②单纯DC对照组,瘤内或足垫注射未修饰DC;③SLC基因修饰DC组,瘤内或足垫注射SLC基因修饰的DC。每隔7天注射1次,观察各组小鼠肿瘤的生长情况。4周后分离瘤体,用荧光免疫组化检测瘤体内CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润情况。结果:rAAVSLC在MOI为100时能成功转染DC,未成熟DC的转染效率显著高于成熟DC,并产生对T细胞有明显趋化生物学活性的SLC。动物实验表明,瘤内注射SLC修饰后DC,肿瘤大小与对照组有明显差异,免疫组化显示瘤体内有较多的CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润。足垫注射SLC修饰的DC与对照组相比,抗肿瘤作用无显著差异。结论:rAAVSLC在Ad2的辅助下能有效转染未成熟DC并能表达具有趋化生物学活性的SLC。SLC基因修饰的树突状细胞瘤内注射以其对CD4+T细胞、CD8+T细胞的吸引作用而发挥了明显的抗肿瘤作用,同时也进一步证实用树突状细胞进行肿瘤生物免疫治疗时,不同免疫方式对疗效有明显影响。
- 梁春敏钟翠平郑宁刘彬彬孙瑞霞吴欣刘银坤叶胜龙
- 关键词：重组腺相关病毒骨髓来源树突状细胞次级淋巴组织趋化因子
- SEA基因修饰抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞肺转移
- 2006年
- 田蓉于继云刘玉峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A基因修饰继发原发性
- 间充质干细胞诱导体外分化来的初始T细胞表型变化的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的将体外由CD34^＋细胞分化而来的初始T细胞与异基因骨髓间充质干细胞（MSC）共孵育，观察初始T细胞表型的变化。方法传3代以上的MSC与脐血CD34^＋刍细胞分化的初始T细胞共孵育1周，用流式细胞仪检测其表型变化。结果与对照组相比，CD8^＋细胞明显增加（共孵育组（35．9±6．3）％，单纯初始T细胞培养组（18．4±4．5）％]，且CD8^＋；CD3^＋细胞明显增加[共孵育组（27．6±2．8）％，单纯初始T细胞培养组（15．2±3．1）％]。结论骨髓MSC在体外与异基因初始T淋巴细胞共孵育使CD8^＋初始T细胞表达增加，这种变化可能与其诱导免疫耐受相关。
- 金建刚冯凯石炳毅陈虎
- 关键词：间质干细胞初始T细胞免疫调节
- 小鼠骨髓间充质干细胞对胚胎干细胞造血分化的影响被引量：6
- 2003年
- 骨髓间充质干细胞作为骨髓基质细胞的前体细胞 ,在体外具有一定的造血支持作用 ,与造血干细胞共移植可促进其植入。本研究旨在初步探讨应用小鼠骨髓间充质干细胞与胚胎干细胞共培养作为一种新的分化体系的可行性。首先分离、培养并鉴定小鼠骨髓间充质干细胞 ,然后利用扩增培养的骨髓间充质干细胞与胚胎干细胞共培养 ,通过造血集落培养和RT PCR观察造血分化的特点。结果表明 ,分离、扩增培养至第四代之后的骨髓间充质干细胞形态均一 ,高表达Sca 1,CD2 9,CD4 4和CD10 5 ,而CD34和CD4 5等造血与内皮细胞特异性表面标志呈阴性 ;特异性诱导体系内传代后 (>4代 )的骨髓间充质干细胞可向脂肪细胞和成骨细胞分化。与悬浮分化体系相比 ,骨髓间充质干细胞共培养体系中初始分化的胚胎干细胞含有显著增加的拟胚体形成细胞而没有造血集落形成细胞。此外 ,RT PCR检测发现 :共培养细胞表达胚胎干细胞特异性转录因子Oct 4 ,而造血标记Flk 1,GATA 1和 β H1为阴性。结论 :间充质干细胞在一定程度上抑制了胚胎干细胞的初始分化 。
- 王晓燕刘兵苑春慧要晖宇毛宁
- 关键词：胚胎干细胞间充质干细胞集落形成细胞造血分化
- 胚胎干细胞来源的BL-CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞被引量：4
- 2003年
- 小鼠胚胎干细胞 (embryonicstemcell,EScell)体外分化 2 .5 - 3.5天形成的拟胚体 (embryoidbody ,EB)中可产生原始细胞集落形成细胞 (blastcolony formingcell,BL CFC) ,后者具有造血和内皮细胞双向分化潜能 ,是目前体外实验可检测到的最早期的定向造血分化的细胞。本研究建立BL CFC培养体系 ,并通过造血祖细胞集落培养、免疫荧光标记以及巢式RT PCR鉴定单个原始细胞集落来源的贴壁细胞和非贴壁细胞的分化特点。结果表明 :部分贴壁细胞吞噬DiI Ac LDL ,并表达CD31,UEA I ,VE cadherin等内皮细胞特异性的表面分子 ;非贴壁细胞具有原始造血 (primitivehematopoiesis)和 (或 )永久造血 (definitivehematopoiesis)活性 ,其中 2 0 %的原始细胞集落含有高增殖潜能集落形成细胞 (highproliferativepotentialcolony formingcell,HPP CFC) ,后者能形成次级造血集落。结论 :胚胎干细胞来源的BL CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞 ,但原始细胞集落来源的HPP
- 要晖宇刘兵原野毛宁
- 关键词：胚胎干细胞造血分化
- 异基因骨髓移植小鼠GVHD模型的建立被引量：4
- 2007年
- 目的：建立异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型。方法：将供体C57BL／6雄性小鼠骨髓细胞和脾细胞按不同细胞数混合，输入接受照射后的受鼠雌性BALB／c小鼠，观察受鼠的一般情况、生存期、组织病理学和嵌合体检查。结果：给予5×10^6个以上的供者脾细胞的各组小鼠都发生了急性GVHD，但小鼠GVHD出现的时间不同。结论：成功地建立了异基因骨髓移植小鼠GVHD模型，输入5×10^6-5×10^7个供鼠脾细胞均适用于小鼠GVHD防治的研究，可以根据实验需要选择供鼠脾细胞的数量。
- 扈江伟金建刚王莉莎宁红梅俞立权冯凯陈虎
- 关键词：异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病
- C57BL/6小鼠来源的胚胎干细胞建系及体外定向造血分化的研究被引量：5
- 2003年
- 哺乳动物的胚胎造血表现为时间和空间的连续变化。既往研究表明 ,12 9小鼠来源的胚胎干细胞系(embryonicstemcells,ES细胞 )的体外分化能在一定程度上模拟胚胎造血。为研究C5 7BL 6小鼠来源的ES细胞系体外定向造血细胞分化的特点 ,分离C5 7BL 6小鼠 3.5天囊胚的内细胞团建立ES细胞系并采用常规方法鉴定 ,应用体外二步分化法形成拟胚体并进行集落培养 ,细胞化学染色和RT PCR鉴定造血前体细胞。结果表明 :所建ES细胞系MES 1符合建系标准 ,其体外分化后可在不同阶段的拟胚体中发现多种造血前体细胞的有序出现 ,包括原始红系前体细胞 ,永久红系前体细胞 ,混合集落形成细胞和粒单系集落形成细胞。RT PCR分析显示 ,拟胚体表达多种造血特异性的转录因子和造血标记。结论 :自C5 7BL 6小鼠建立的ES细胞系MES
- 刘兵苑春慧江飞子侯春梅孙圣坤毛宁
- 关键词：胚胎干细胞造血前体细胞造血分化
- 小鼠树突状细胞的体外培养与鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的探索、优化体外诱导和扩增小鼠树突状细胞(DC)的方法,并进行形态学观察和生物学鉴定.方法应用环磷酰胺200mg/kg经尾静脉注射Balb/c小鼠,8d后处死小鼠,常规培养脾细胞,第3日加入含有IL-4,GM-CSF细胞因子的条件培养液,第5日补加TNF-α,第8日制备标本进行相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察,并分别在培养第3,5,7日经流式细胞仪检测成熟细胞表面标志.结果刺激培养细胞经相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察,具有典型的DC形态,流式细胞仪检测发现细胞表面表达CD11c,CD86,ⅠAb,H2D6标志物.结论在小鼠脾脏细胞培养中加入IL-4,GM-CSF,TNF-α等刺激,可获得足量、较高纯度的DC,为DC的基础研究与临床应用奠定了基础.
- 田蓉李巍于继云刘玉峰
- 关键词：树突细胞细胞因子
- 小鼠GM-CSF的基因克隆和锚定修饰
- 2003年
- 将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定修饰的细胞因子直接转移到肿瘤细胞膜上,是研究治疗性肿瘤疫苗的一种有潜力的新策略。克隆了小鼠GM-CSF基因,并通过将从衰变加速因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列与mGM-CSF嵌合,获得了GPI修饰的mGM-CSF分子,构建并鉴定了GPI锚定修饰的真核表达载体pCI/GPI-mGM-CSF,为进一步研究表面工程治疗性肿瘤疫苗奠定了基础。
- 于继云陈兴蔡欣田蓉程绍辉许红莲王嘉玺
- 关键词：GM-CSF基因克隆肿瘤疫苗糖基化磷脂酰肌醇细胞膜
