浙江省教育厅高等学校科学研究项目(20050058)
- 作品数：5 被引量：66H指数：3
- 相关作者：李钧敏金则新柯世省张崇邦余彬彬更多>>
- 相关机构：台州学院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅高等学校科学研究项目浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程生物学更多>>
- 水稻土总微生物RAPD扩增条件的优化被引量：1
- 2007年
- 以改进的CTAB-溶菌酶-蛋白酶K裂解法抽提水稻土总微生物DNA,直接进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析。采用单因素试验分别测试了Mg2+浓度、4×dNTP浓度、模板DNA用量、引物用量、TaqDNA聚合酶用量及牛血清白蛋白(BSA)浓度对水稻土总微生物RAPD扩增的影响,确定了最适的RAPD反应体系为:10μlPCR反应体积,含1×Taq酶缓冲液(10 mmol Tris-HC l pH值9.0,50 mmol KC l,0.1%Triton X-100),0.8mmol/L 4×dNTP,5.0 mmol/L MgC l2,0.75 UTaqDNA聚合酶,3 mg/m l BSA,5 ng模板DNA,5 pmol引物。
- 余彬彬李钧敏金则新
- 关键词：水稻土微生物RAPD
- 重金属污染芒萁居群遗传分化的RAPD分析被引量：12
- 2007年
- 利用随机扩增多态DNA标记技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对自然生长的芒萁洁净居群和铅锌矿尾矿居群的遗传多样性和遗传分化进行分析。结果表明在170个检测位点中发现有102个位点呈多态性,在尾矿居群中有2个RAPD标记位点发生了丢失,推测可能为重金属的敏感基因片段;尾矿居群的多态位点百分率(52.94%)、Shannon信息指数(0.3059)和Nei基因多样性(0.2084)均略低于洁净居群(分别为53.53%、0.3196和0.2198),总的遗传多样性水平较高(分别为70.59%、0.3723和0.2472)。尾矿居群与洁净居群之间发生了一定的遗传分化(Φst=0.1900,Gst=0.1339),但居群间的变异程度远远小于居群内的变异程度,居群间的基因流较大。重金属胁迫对芒萁居群的遗传分化有较大程度的影响,可能是导致芒萁适应重金属污染的分化和微进化的一个重要驱动力。
- 李钧敏金则新朱慧慈柯世省
- 关键词：芒萁重金属遗传分化
- 一种高效可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA抽提方法被引量：43
- 2006年
- 以CTAB-溶菌酶-蛋白酶K-冻融裂解法直接抽提土壤总微生物的基因组DNA,利用PEG8000沉淀和纯化DNA.结果表明,该方法是一种简便、有效可直接应用于PCR分析的土壤总微生物基因组DNA的抽提方法.采用含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的缓冲液预洗,添加CaCl2和BSA,可以去除腐殖酸;用PEG8000沉淀DNA,可以提高DNA质量;采用冻融法破碎细胞,CTAB、溶菌酶和蛋白质酶K共同作用以裂解细胞,可以保证获得大片段的DNA,提高DNA产率.用该方法抽提的七子花林下土壤总微生物DNA产率为9·22μg·g-1,A260/A280为1·65,可适用于PCR扩增及扩增rDNA限制酶切分析(ARDRA)技术,适宜的模板DNA浓度为0·67ng·μl-1.快速、有效、可直接用于PCR分析的土壤总微生物DNA提取方法的建立,为大规模的土壤微生物分子生态学研究提供了可能.
- 李钧敏金则新
- 关键词：DNA抽提PCR扩增
- 银离子抗性细菌质粒的分离与鉴定被引量：2
- 2006年
- 通过对不同化工厂废水处理池的活性污泥进行富集、不同浓度银离子驯化后,分离得到30株银离子抗性细菌,最大硝酸银耐受量可达80mg.ml-1.对这些细菌进行质粒抽提与鉴定,质粒检出率为76.67%.40mmol.L-1的苯甲酸钠对HAg4细菌质粒的消除率可达98.75%;而350μg.ml-1的吖啶橙对HAg4细菌质粒的消除率只有77.78%.细菌质粒与银离子抗性密切相关.
- 李钧敏金则新
- 关键词：细菌质粒银离子抗性
- 不同土层土壤细菌的遗传多样性及其与环境因子的相关性被引量：9
- 2006年
- 利用RAPD技术分析了浙江省天台山次生灌丛群落不同土层（G1层土深0～5cm、G2层土深5～10cm。G3层土深10～15cm）土壤细菌的遗传多样性及遗传分化．结果显示11种随机引物在27个土壤样品中共检测到168个可重复的位点，G1和G2土层的多态位点百分率均为88．10％，G3土层的多态位点百分率为87．50％，总的多态位点百分率达100％．Shannon信息指数和Nei基因多样性指数估算的不同土层的遗传多样性的高低顺序均为G1〉G2〉G3．不同土层细菌的遗传多样性与可培养细菌数量呈极显著的正相关，与土壤pH值呈显著性正相关，与其它土壤因子的相关性不大．Shannon信息指数与Nei基因多样性指数估算的结果都说明不同土层细菌群落大部分的变异存在于土层内，土层间的遗传分化很低．Nei指数估算的土层问的基因分化系数（Gst）为0．0701，不同土层间具有很高的基因流（Nm=6．63）．AMOVA分子变异分析显示在总的遗传变异中，3．90％的变异发生在土层间。96.10％的变异发生于土层内，土层问的遗传分化不显著（Φst=0．039，P〈0．001）．从土层间的遗传相似度来看，G1与G2两土层的遗传相似度最高．根据土壤细菌不同土层群落间的遗传距离，采用uPGMA法进行聚类，G1土层与G2土层先聚在一起，再与G3土层聚在一起．
- 李钧敏金则新张崇邦
- 关键词：土壤细菌RAPD环境因子
