国家自然科学基金(30671589)
- 作品数：9 被引量：27H指数：4
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- 相关机构：苏州大学浙江大学中国农业科学院蚕业研究所更多>>
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- 桑树橡胶延伸因子基因克隆与表达分析
- 乳汁是桑树的主要特征之一,桑树富含乳汁,乳汁在桑树的生长和防御上起重要作用,桑树乳汁中的糖甘酶抑制剂还是抗糖尿病的有效成分。在桑树cDNA文库中,通过序列比对发现一段与乳汁合成相关的基因片段,通过RACE的方法获得该基因...
- 潘刚韩舒睿沈智超邸柄荣孙银苹赵卫国楼程富潘一乐
- 关键词：桑树基因克隆基因表达
- 文献传递
- 桑树橡胶延伸因子基因的克隆与表达分析被引量：4
- 2009年
- 桑树乳汁在桑树的生长和防御过程中起重要作用,乳汁中的糖苷酶抑制剂还是治疗糖尿病的有效成分。通过桑树cDNA文库中的序列比对,发现一段与乳汁合成相关的基因片段,采用RACE方法获得该基因的全长序列,基因cDNA全长1 145 bp,编码区759 bp,编码252个氨基酸残基,将该基因命名为桑树橡胶延伸因子基因(GenBank登录号:GQ466080)。为探究该基因的功能,通过RT-PCR的方法分析该基因在桑树不同组织器官的表达,结果表明该基因在桑树幼叶中的表达量最高,其次是茎和芽,在根中的表达量最低。对桑树叶片进行细胞分裂素处理,发现细胞分裂素处理后该基因表达量有减少的趋势,在细胞分裂素处理的叶片中,正在伸展的幼叶中该基因的表达量要高于刚出现的幼叶和成熟叶。与桑树中已知的其它功能基因相比,桑树橡胶延伸因子在桑树正常生长中的表达量远高于桑树Na+/H+逆向转运蛋白基因MaNHX和桑树抗冻蛋白基因WAP27的表达量。从以上结果初步推测桑树橡胶延伸因子基因在桑树的生长发育中起重要作用。
- 潘刚韩舒睿沈智超邸柄荣孙银苹赵卫国楼程富潘一乐
- 关键词：桑树基因克隆基因表达
- 植物低温诱导基因及其产物的生物学功能被引量：5
- 2008年
- 植物在适应低温胁迫的过程中,体内将会发生一系列生理生化反应,多种基因得以诱导表达,这些基因的表达在时空上是有序发生的,并相互联系形成了低温应答的分子机制。为促进我国桑树抗寒分子育种的研究,结合植物的抗冻特性和桑树低温胁迫反应,对植物的3种主要低温诱导蛋白(抗冻蛋白、胚胎后期富集蛋白和转录因子)的研究进展进行了综述,并以此阐述了植物抗寒抗冻特性和植物低温应答的分子机制。
- 陆小平楼程富
- 关键词：植物抗冻蛋白转录因子低温诱导基因
- 蜜蜂丙糖磷酸异构酶基因及其编码蛋白的生物信息学分析及分子进化研究被引量：2
- 2009年
- 运用生物信息学的方法对蜜蜂丙糖磷酸异构酶(AMTPI)基因及其编码蛋白序列进行了初步分析,得到了与基因和蛋白质组学研究相关的一些基本参数。结果表明,AMTPI基因序列由744个碱基组成,编码由247个氨基酸组成的蛋白质。AMTPI总的原子数目为3818,分子式为C1 207H1920N328O359S4,分子量为26898.71,等电点pI=8.04,摩尔消光系数为34950,在哺乳动物体内的半衰期为30 h。疏水性分析结果表明AMTPI为亲水蛋白,不稳定参数为27.32,属较稳定蛋白,不含信号肽序列,跨膜结构不明显,亚细胞定位于细胞质。AMTPI具有多种二级结构形式,是典型的(α/β)8结构,在SWISS-MODEL服务器三维建模后,运用ViewerLite 5.0进行序列编辑,获得了AMTPI的三级结构模型。多重比对结果显示,多个物种丙糖磷酸异构酶(TPI)的整体相似度较高,有多个保守结构,可以作为分子进化研究的材料。用MEGA4.0软件按Minimum evolution方案进行分子系统演化分析,获得了TPI氨基酸序列的分子进化树。
- 徐剑周君刘晓红陆小平
- 关键词：蜜蜂生物信息学分析分子进化
- 不同桑品种的抗寒性比较
- 2009年
- 以36个桑品种的枝条为材料,对低温胁迫后的冬芽、幼叶的萌发、生长进行了调查。结果表明,在我国北方地区栽培的33个品种中,抗寒能力的强弱依次为:蒙古桑≥依兰16号>龙桑1号>扎旗18号=动物国10号;在江浙蚕区应用的3个品种中,杂交桑品种沙2×109的抗寒性最差。
- 陆小平楼程富王建科
- 关键词：桑树不同桑品种抗寒性
- ACC氧化酶基因在桑树水分和盐胁迫条件下的表达研究被引量：6
- 2007年
- 为从分子水平上理解桑树在逆境胁迫中的应答机制，研究利用简并引物和RACE方法克隆了桑树氨基环丙烷羧酸（ACC）氧化酶基因部分序列，并初步分析了该基因在水分胁迫和盐胁迫下的表达模式。结果表明：克隆得到的桑树ACC氧化酶基因编码区与其它植物ACC氧化酶基因的同源性很高，与蔷薇科李属植物相似性高达85％～86％；该基因在水分胁迫下表达量增加，但个体之间表达量有差异，推测可能与个体抗旱性差异有关；在盐胁迫下，ACC氧化酶表达量变化不明显，同一桑树幼苗不同叶位之间有差异，推测是盐害引起组织死亡导致表达量发生变化，而非盐胁迫直接诱导，个体之间耐盐性的差异以及不同发育阶段的叶片对盐害的敏感程度不同，表达量变化也不同。
- 潘刚楼程富
- 关键词：桑树干旱胁迫盐胁迫
- 从琼脂糖凝胶中高效回收DNA技术的探讨被引量：6
- 2009年
- 用两只离心管制成的凝胶过滤装置,从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简易方法。它依次包括以下步骤:凝胶过滤装置的制作、凝胶切割、凝胶低温冷冻、低温高速离心、ddH2O洗胶、DNA纯化和回收效果检测等。用此方法回收的DNA片段产率高、质量纯,可直接用于分子生物学实验的后续操作,如载体连接、PCR模板获得、DNA探针制备、基因测序等。其优点是:DNA片段的回收率高(90%以上),质量好;操作简便,耗时短;回收装置简单,成本低廉,可进行商品化开发。
- 徐剑周君陆小平
- 关键词：DNA回收
- 桑树低温诱导蛋白基因(Wap 25)的原核表达被引量：4
- 2009年
- 以pGEX-4T-2为载体构建了桑树低温诱导蛋白基因(wap25)的重组表达质粒,转化受体菌E.coli BL21。经IPTG诱导后,基因产物在大肠杆菌中得到了有效表达。为了提高表达效果,我们从不同表达载体、诱导时间和诱导温度等方面对目的蛋白的表达条件进行了优化,用SDS-PAGE电泳检测,结果表明30℃条件下经0.5 mmol/L的IPTG诱导8 h为最优诱导条件。
- 刘嘉琦楼程富袁红艳徐剑陆小平
- 关键词：桑树蛋白基因原核表达
- 意大利蜜蜂丙糖磷酸异构酶基因的克隆及其原核表达与纯化
- 2009年
- 从意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica的肌肉组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法克隆蜜蜂第16号染色体上的丙糖磷酸异构酶基因的cDNA序列,将测序结果(GenBank登录号EU76098)与推导的氨基酸序列分别与GenBank中的其他物种进行同源比对分析。结果表明,该基因全长744bp,为完整的阅读框,编码247个氨基酸,成熟蛋白的理论分子量为26.89kD。比对结果显示AmTPI与家蚕、德国小镰、黄粉虫、丽蝇蛹集金小蜂、水稻等物种的基因相似性达69%以上,蛋白相似性达59%以上。将目的基因克隆到pGEX-4T-2融合表达载体上,并在大肠杆菌中得到成功表达,4h的表达量为总蛋白的42.1%。为了进一步探讨产物的酶学特性,实验还对表达产物进行纯化与浓缩。实验还构建增强型荧光真核表达质粒,为进一步研究AmTPI在真核细胞中的表达情况奠定基础。
- 徐剑周君刘晓红陆小平
- 关键词：意大利蜜蜂基因克隆原核表达
- 桑树低温诱导基因Wap25的序列分析及表达产物的亚细胞定位被引量：4
- 2010年
- Wap25是从桑树幼茎克隆的低温诱导蛋白基因,为胚胎后期富集蛋白(LEA)基因的成员之一,与其它物种低温诱导基因的同源性很低。生物信息学分析表明,桑树低温诱导基因Wap25编码蛋白由226个氨基酸组成,分子质量25.3kD,等电点5.52;蛋白N端1-30位氨基酸表现出强烈的疏水性,其后是亲水性高的区域,平均亲水值达-1.020,而蛋白1-29位氨基酸为典型的真核生物蛋白质的信号肽序列,表明WAP25蛋白属于分泌型蛋白。用SubLocv1.0软件预测WAP25的亚细胞定位,将该蛋白定位于细胞质中。Tmpred软件预测WAP25不存在跨膜结构。构建Wap25与绿色荧光蛋白(GFP)的重组质粒,用基因枪法将其转入洋葱表皮细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下发现GFP分散于洋葱表皮的细胞质中,而在细胞核未发现GFP的表达,此结果与WAP25的亚细胞定位预测结果相符。
- 陆小平刘嘉琦李叶峰楼程富
- 关键词：桑树亚细胞定位绿色荧光蛋白
