公共文化服务平台

福氏志贺菌2a主动外排基因acrA的克隆和分子特征被引量：1: 2010年; acrA基因在细菌耐药过程中起重要作用,通过生物信息学方法,结合PCR技术,对福氏志贺菌2a基因进行了克隆。基因序列分析表明,克隆得到的acrA基因ORF由1194个核苷酸组成,编码一个由397个氨基酸组成的多肽,含有一段24个氨基酸的信号肽,预测蛋白质分子量和等电点分别约为42.15ku和8.42。本研究获得的主动外排基因acrA的信息为进一步研究AcrA蛋白的结构与功能奠定了基础。; 魏小娟张继瑜王松泰黄娇娇李剑勇周绪正牛建荣李金善; 关键词：福氏志贺菌分子特征

福氏2a志贺菌DNA转录激活蛋白MarA的二级结构及其B细胞抗原表位预测: 2009年; 研究以福氏2a志贺菌(Shigella flexneri2a,s.f2a)的基因组序列为材料,采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Kamplus-Schulz法预测了其DNA结合转录激活蛋白MarA的二级结构,用Kyte-Doolittle法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini法预测了蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf法预测了蛋白的抗原指数,然后综合评价了福氏2a志贺菌转录激活蛋白MarA的B细胞抗原表位。结果表明:福氏2a志贺菌MarA蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的转角和无规则卷曲等柔性区域以及α-螺旋和β-折叠区段,该蛋白有多处抗原指数较高的区段,其中含有潜在的B细胞优势抗原表位,因此其在免疫学中的地位也应当引起重视。; 魏小娟张继瑜王松泰李剑勇周旭正牛建荣李金善; 关键词：福氏2A志贺菌 B细胞表位

福氏志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体构建及其鉴定被引量：1: 2008年; 目的构建志贺菌外输调节蛋白基因marA的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR从志贺菌基因组DNA中扩增得到志贺菌外输调节蛋白基因marA,并将其定向克隆到原核表达载体pET-30a,构建原核表达重组质粒pET-30a-marA,重组子经限制性内切酶分析、PCR及测序鉴定后,转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果经鉴定证实原核表达载体pET-30a-marA构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了MarA与His的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被特异性抗体所识别。结论MarA在大肠杆菌中获得了高效的表达,为进一步研究其免疫学特性和功能奠定了基础。; 魏小娟张继瑜王松泰牛建荣李剑勇周旭正吴培星李金善; 关键词：志贺菌原核表达

志贺菌耐药性研究进展被引量：1: 2008年; 概述了致病性志贺菌的分类,对家畜及人类造成的危害,临床多重耐药性严重状况。从分子生物学角度介绍了志贺菌主要耐药性acrAB-tolC主动外排系统的作用特点及耐药性相关药物外输蛋白marA、acrA、acrB,基因hdeA、tolB、tol A、tol Q等研究进展,并阐述了克服志贺菌耐药性的对策。; 牛建荣张继瑜魏小娟王松泰李剑勇周绪正吴培星胡振英李金善; 关键词：志贺菌耐药性基因

福氏志贺菌多重耐药调节蛋白MarA的原核表达: 2008年; 为获得福氏志贺菌多种耐药调节蛋白MarA,将扩增出的marA基因亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的蛋白再经Ni-NTA亲和层析纯化,结果显示,MarA蛋白的表达量占菌体总蛋白的30.2%,经Western-bloting检测,表达的蛋白能被福氏志贺菌阳性血清特异识别,说明表达蛋白具有良好的免疫反应性。; 魏小娟张继瑜王松泰牛建荣李剑勇周旭正吴培星李金善; 关键词：福氏志贺菌原核表达蛋白纯化

福氏2a志贺菌MarA蛋白纯化复性及活性检测: 2009年; 目的纯化、复性志贺菌MarA蛋白并分析其生物学活性。方法将构建好的BL21大肠埃希菌工程菌经异丙基-β-D-硫代-乳糖苷(IPTG)诱导,His-tag形式表达MarA融合蛋白(约21ku),采用超声波破碎细菌,提取包涵体用高浓度尿素裂解,经镍柱亲和层析纯化,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)的存在下对融合蛋白进行复性。用凝胶薄层扫描法测纯度。结果从融合蛋白包涵体中获得纯度达90%以上的目的蛋白,免疫蛋白印迹试验结果显示,复性后的MarA融合蛋白能与抗福氏志贺菌抗体发生特异性结合。结论成功建立有效纯化融合蛋白包涵体His-MarA的方法。; 魏小娟张继瑜王松泰李剑勇周绪正牛建荣李金善; 关键词：纯化复性活性检测

志贺菌耐药性的分子机制: 2008年; 随着抗菌药物的广泛应用,耐药及多重耐药细菌已经严重威胁着人类和动物的健康。志贺菌的耐药机制主要是产生灭活酶、细胞壁的改变、主动外排以及作用靶位结构的改变。本文对其耐药机制的研究进展作简要综述。; 魏小娟张继瑜李剑勇周绪正牛建荣李金善王松泰; 关键词：志贺菌耐药性分子机制

福氏志贺菌主动外排基因acrA的克隆及原核表达被引量：2: 2008年; 目的对福氏志贺菌外排基因acrA进行克隆和原核表达,为进一步研究其在志贺菌外排机制中的作用奠定基础。方法参考福氏志贺菌2aacrA基因序列设计一对特异引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点序列。以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增acrA基因并与pMD18-T载体连接,然后转化DH5α。提取重组质粒pMD18-acrA,经BamHI/SalI双酶切并与载体pET30a连接后转化宿主菌BL21(DE3)pLys,通过IPTG诱导表达目的蛋白。结果克隆的acrA基因长度为1122bp,核苷酸序列与GenBank上公布的序列完全相同。原核表达经SDS-PAGE及WesternBlotting检测和鉴定,结果表明重组载体pET-30a-acrA可成功地在大肠杆菌中表达AcrA蛋白。结论成功构建了福氏志贺菌acrA基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,该研究为了解AcrA蛋白的特性、功能以及对福氏志贺菌多药耐药机理的深入研究奠定了基础。; 王松泰张继瑜魏小娟付元芳曹小安邱昌庆; 关键词：福氏志贺菌克隆原核表达

福氏志贺菌2a多药耐药基因marA的克隆及其原核表达: 2008年; 根据福氏志贺菌2a多药耐药基因marA的序列,设计并合成了1对特异性引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点的序列,以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板扩增了marA基因序列。将PCR产物与pMD18-T载体连接,转化到大肠杆菌DH5α。鉴定成功获得目的片段后,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切并与载体pET-30a连接,构建原核表达质粒pET-30a-marA,并将其转化宿主菌BL21(DE3)pLys,用IPTG诱导其表达。SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-30a-marA可成功地在大肠杆菌中表达MarA蛋白。Western-blotting检测证明,该蛋白能与志贺菌阳性血清发生特异性反应。; 王松泰张继瑜魏小娟曹小安邱昌庆; 关键词：克隆原核表达

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

国家自然科学基金(30671582)