国家自然科学基金(30371217)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- 1,25二羟维生素D_3联合他莫西芬对转染VDRE-Tk-ERα表达载体的MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响被引量：1
- 2006年
- 目的构建受1,25二羟维生素D3调控的雌激素受体α真核表达载体(VDRE-Tk-ERα),并观察其对雌激素受体阴性乳腺癌细胞的细胞周期相分布和凋亡的影响。方法利用PCR法体外构建得到含有4个拷贝VDRE和Tk启动子的VDRE-Tk-ERα表达载体,并将其和空载体质粒分别转染入MDA-MB-231细胞中,通过流式细胞仪检测乳腺癌细胞周期相的分布,用TUNEL法检测细胞凋亡的发生。结果1,25二羟维生素D3和他莫西芬联合作用较对照组和单独作用组能够显著抑制乳腺癌细胞的周期进程,并能有效诱导肿瘤细胞发生凋亡。结论利用1,25二羟维生素D3靶控雌激素受体α表达载体联合他莫西芬可以阻止雌激素受体α阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞的周期进程并诱导其发生凋亡,从而使原本对他莫西芬耐受的乳腺癌细胞恢复对其的化疗敏感性。
- 郎海滨糜漫天
- 关键词：1,25二羟维生素D3细胞周期ERΑ他莫西芬
- 1,25二羟维生素D_3靶控VDRE-ERα表达载体对MDA-MB-231细胞周期的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨1,25二羟维生素D3靶控的雌激素受体α表达载体(VDRE-Tk-ERα)对雌激素受体阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞周期进程的影响及其机制。方法利用MTT法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬对转染VDRE-Tk-ERα表达载体的MDA-MB-231细胞增殖能力的影响,通过流式细胞仪法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬对转染该表达质粒的MDA-MB-231细胞周期相的分布。用RT-PCR、Western blot和免疫沉淀法检测细胞Rb及其磷酸化水平、Cy-clin D1、CDK4的表达以及Cyclin D1/CDK4激酶复合物的结合力变化。结果1,25二羟维生素D3联合他莫西芬能够有效抑制转染该质粒的MDA-MB-231细胞的增殖活性并将其细胞周期进程阻遏于G0/G1期。与此同时,Cyclin D1的表达则显著降低,其与CDK4的结合力亦显著降低。Rb的表达虽无显著变化,但其磷酸化水平显著下降。结论1,25二羟维生素D3可通过靶控MDA-MB-231细胞内外源性雌激素受体α的表达进而对G1/S期相关分子的表达和活性进行调控从而阻止雌激素受体α阴性的乳腺癌细胞的周期进程并恢复对他莫西芬的化疗敏感性。
- 郎海滨糜漫天
- 关键词：1,25二羟维生素D3细胞周期ERΑ他莫西芬
- 维生素D_3靶控雌激素受体α表达载体的构建及其对乳腺癌作用的研究被引量：3
- 2006年
- 目的构建受1α,25二羟维生素D3调控的雌激素受体α表达载体(VDRE-Tk-ERα),并观察其对雌激素受体阴性乳腺癌细胞的增殖抑制效应。方法利用PCR法得到含有4个拷贝VDRE和Tk启动子的序列并用其替换掉雌激素受体α载体的CMV启动子从而得到VDRE-Tk-ERα表达载体。利用脂质体法将其转染入雌激素受体阴性乳腺癌细胞中并利用MTT法观察其对乳腺癌细胞的抑制效应。结果一定剂量的1α,25二羟维生素D3能够通过VDRE调控下游报告基因的表达,同时在加入他莫西芬后能够显著抑制转染了VDRE-Tk-ERα表达载体的雌激素受体阴性乳腺癌细胞的增殖活性。结论通过该方法能够显著恢复和增强雌激素受体阴性乳腺癌细胞对他莫西芬和1α,25二羟维生素D3的化疗敏感性。
- 郎海滨糜漫天
- 关键词：ERΑ他莫西芬MDA-MB-231细胞
- 活性维生素D_3协同他莫西芬对裸鼠乳腺癌细胞移植瘤的抑制效应
- 2007年
- 目的:探讨活性维生素D3联合他莫西芬对转染pVDRE-Tk-ERα质粒的MDA-MB-231乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的协同抑制效应及其相应机制。方法:将重组pVDRE-Tk-ERα真核表达质粒转染到ER阴性的MDA-MB-231乳腺癌细胞内并将处于对数生长期的MDA-MB-231VDRE-ERα细胞皮下注射到Balb/c裸鼠体内,4w后,分别用0.5μg/kg的活性维生素D3和50mg/kg的他莫西芬单独及联合处理裸鼠移植瘤模型20d,测量各组裸鼠移植瘤的体积大小。利用HE染色观察移植瘤的组织结构,用免疫组化法检测移植瘤细胞Ki-67蛋白的表达变化以检测移植瘤细胞的增殖活性变化。结果:活性维生素D3和他莫西芬联合作用组较对照和单独作用组能够显著减小裸鼠移植瘤的体积并有效改变其组织病理结构,二者联合运用还能在体内显著抑制乳腺癌细胞的增殖活性。结论:活性维生素D3在体内可通过VDRE-Tk启动子诱导ERα的表达从而有效恢复雌激素阴性乳腺癌细胞对他莫西芬的敏感性。
- 郎海滨糜漫天
- 关键词：活性维生素D3他莫西芬乳腺癌ERΑ裸鼠
- 维生素D_3和他莫西芬对乳腺癌细胞凋亡影响
- 2008年
- 目的研究受1,25二羟维生素D3调控的雌激素受体α表达载体联合他莫西芬对雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制。方法将本室构建的含有4个拷贝维生素D反应元件(VDRE)和胸苷激酶启动子(Tk)的VDRE-Tk-ERα表达载体转染到MDA-MB-231细胞中,利用免疫荧光法检测1,25二羟维生素D3对雌激素受体α(ERα)的诱导表达并通过末端原位法检测1,25二羟维生素D3联合他莫西芬诱导转染该表达质粒的MDA-MB-231凋亡诱导效应。用免疫印迹(Western blot)法检测细胞核因子κB(NFκB)P65活性亚单位表达以及核转位情况的变化。结果1,25二羟维生素D3能够有效诱导MDA-M-231VDRE-ERα细胞内ERα的表达,在此基础上与他莫西芬联合作用较对照和单独作用组能够有效诱导该乳腺癌细胞发生凋亡。与此同时,NFκB P65活性亚单位的表达以及核转位均受到不同程度的抑制。结论利用1,25二羟维生素D3可通过靶控外源性雌激素受体α的表达进而调控NFκB P65活性亚单位的表达及活性,从而诱导细胞发生凋亡并最终恢复乳腺癌细胞对他莫西芬的化疗敏感性。
- 郎海滨糜漫天
- 关键词：细胞凋亡ERA他莫西芬NFΚBP65
