国家自然科学基金(30028021)
- 作品数：10 被引量：53H指数：4
- 相关作者：富宁刘北一朱平罗海波刘叔文更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗HIV-1 gp41合成多肽C34单抗的制备及生物学活性被引量：6
- 2002年
- 目的制备针对C34和C46单抗, 并以此为工具研究gp41表位,进一步 了解HIV-1包膜蛋白的作用机理和病毒的感染机制,为寻找新的治疗靶点提供抗体工具。 方法常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗C34与C46的单克隆抗体,并鉴定其 特异性位点，还用ELISA法、MTT法及荧光分子探针技术对单抗的生物学活性进行研究。结果获得了3株抗C34单克隆抗体、2株抗C46单抗。此5个单抗均与C34结合 , 并抑制N36肽与C34肽复合物的形成；其中效价最高的1G1对H9/HIVⅢB细胞的生长有刺 激作用 ,对H9/HIVⅢB细胞和MT-2细胞的融合无明显影响。结论得到5株 可与C34反应,并可抑制C34与N36多肽结合的单抗, 其中1G1所识别的表位可能为增强性或刺激性表位。
- 郭海萍刘北一罗海波韩强涛富宁
- 关键词：HIV-1GP41生物学活性
- 突变肽库的构建及其应用——噬菌体展示短肽的改造
- 2005年
- 刘北一富宁
- 关键词：短肽噬菌体展示技术肽库突变靶分子
- 新型抗艾滋病药物——HIV进入抑制剂的研究进展被引量：26
- 2005年
- HIV与靶细胞融合的过程是药物干预的重要环节。融合过程主要由H IV包被蛋白表面亚基gp120和跨膜亚基gp41介导。H IV gp120与靶细胞上的CD4分子和辅助受体(趋化因子受体CCR5或CXCR4等)结合,导致gp41的构型发生改变,启动病毒包膜与靶细胞膜的融合。在融合过程中,病毒和靶细胞上的这些蛋白和受体均可作为药物的作用靶点,寻找抑制H IV进入靶细胞的药物用来治疗H IV感染和艾滋病。作用于gp41的肽类药物T-20已被美国FDA批准上市,表明继逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂后,H IV进入抑制剂作为第3类抗H IV药物开始在临床上应用。作为一种新机制的抗H IV药物,H IV进入抑制剂单独或与逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂联合应用,将有助于提高药物的疗效,降低毒副作用,并可望挽救对现有抗H IV药物耐药的艾滋病病人的生命。该文综述了近年来H IV进入抑制剂的研究进展。
- 刘叔文吴曙光姜世勃
- 关键词：HIVGP120辅助受体HIVGP41HIV进入抑制剂
- 合成环肽抑制HIV-1病毒介导的细胞融合的初步研究被引量：2
- 2006年
- 目的鉴定合成环肽FJ-08是否抑制HIV-1病毒介导的细胞融合。方法固相合成环肽FJ-08(SACYWWHRLHCGGGS),将合成肽与BSA载体交联,ELISA检测交联物与源于HIV-1gp41N螺旋的合成肽N36结合,细胞融合抑制实验检测FJ-08抑制H9/HIVIIIB细胞与MT-2细胞的融合。结果ELISA鉴定表明FJ-08-BSA与N36肽结合。与无关肽比较,细胞融合抑制实验显示在2h内,80#g/ml的FJ-08肽具有抑制融合作用,呈现浓度依赖效应。结论FJ-08合成肽可抑制HIV-1介导的细胞融合。
- 刘北一朱平姜世勃富宁
- 关键词：HIV-1GP41模拟肽
- 作用于gp41的HIV融合抑制剂高通量筛选方法的研究被引量：12
- 2002年
- 目的 对作用于gp4 1的HIV融合抑制剂筛选方法进行研究和改进 ,使其成为更加简便的高通量药物筛选模型。方法 采用夹心ELISA方法 ,检测HIVgp4 1六股α 螺旋束的形成。结果 以特异性识别HIVgp4 1六股α 螺旋束的单克隆和多克隆抗体为基础建立的改良夹心ELISA方法 ,特异性好 ,准确性高 ,更为简便和经济 ,能稳定有效地检测样品对 gp4 1六股α 螺旋束形成的抑制作用。 结论 本研究建立的改良方法可作为高通量药物筛选方法 ,用于从中草药库、噬菌体肽库和微生物发酵液等复杂组分样品中筛选作用于 gp4 1的HIV融合抑制剂 。
- 刘叔文姜世勃刘北一吴志华吕琳张嘉杰富宁吴曙光
- 关键词：HIVGP41高通量筛选模型HIV融合抑制剂抗HIV药物
- HIV-1gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果 :3轮筛选后随机挑取 2 6个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 16个克隆可与N36结合 ,将其中 10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列 ,每一克隆至少含有 2个疏水氨基酸 ,其中 9个克隆均有WW ,7个克隆有WWH保守序列。挑选阳性噬菌体克隆No 8进一步鉴定 ,游离N36肽阻断No 8克隆与固相化N36结合 ,C34肽竞争抑制N36肽与No 8克隆结合 (IC50 为 12 5 μg ml)。 结论 :表达WW保守序列的肽模拟HIV 1gp4 1C螺旋与N螺旋结合 ,该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持。
- 刘北一朱平韩强涛姜世勃富宁
- 关键词：HIV-1GP41模拟位噬菌体肽库
- 模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究被引量：6
- 2002年
- 目的 利用针对HIV 1跨膜蛋白gp4 1CHR序列合成肽C34的单克隆抗体 1G1筛选噬菌体 12肽库 ,旨在找寻模拟C34肽表位的序列 ,同时探索该短肽成为HIV 1gp4 1NHR与CHR结合抑制物的可能性。方法 以 1G1为钓饵蛋白对噬菌体 12肽库进行亲和筛选 ,以双夹心ELISA鉴定阳性克隆。结果 经 3轮筛选后 ,随机挑选 17个噬菌体克隆 ,其中 6个克隆与1G1显示出较强的结合活性。上述 6个阳性克隆经DNA测序 ,氨基酸序列相同 :HYEFWAWNWEAN ,其明显的疏水性质类似于C34N末端 ,特异性鉴定显示这些克隆均能够与HIV 1gp4 1N多肽结合。结论 该噬菌体克隆展示肽可模拟HIV 1gp4 1CHR多肽表位 。
- 罗海波郭海萍刘北一朱平富宁
- 关键词：噬菌体肽库模拟肽HIV-1感染
- 噬菌体突变库技术在蛋白质改造中的应用
- 2004年
- 噬菌体展示突变蛋白库是以噬菌粒为载体,对蛋白质序列中的位点(特异或随机)在DNA水平上进行突变而构建的次级文库。突变蛋白库构建策略包括:寡核苷酸介导的直接位点突变、盒式突变、DNA shuffling以及错倾PCR。蛋白突变库主要应用于提高蛋白亲和力、延长半衰期、确定蛋白关键残基。
- 刘北一富宁
- 关键词：噬菌体展示技术
- HIV-1 gp41 NHR结合性环肽的研究
- 2006年
- 目的筛选可与HIV-1 gp41 NHR结合的环肽,为研制抗HIV-1早期感染的小分子药物奠定基础。方法采用P+LS方法,用源于gp41 NHR的合成肽N36肽筛选噬菌体环七肽库,ELISA鉴定噬菌体克隆,根据阳性克隆的DNA序列,合成环肽并鉴定其与N36肽结合。结果经3轮筛选、鉴定,得到11个和N36肽结合的噬菌体克隆。DNA测序并推导氨基酸序列,表明这11个克隆展示同一序列CDRHQHKRC。根据此序列合成的环肽NA(Biotin-SACDRHQHKRCGG)经与载体蛋白BSA偶联后,ELISA鉴定表明交联物可特异地与N36肽结合,这种结合可被游离N36肽、以及源于gp41 CHR的肽C34抑制。结论SACDRHQHKRCGG环肽为HIV-1 gp41 NHR结合肽。
- 刘北一朱平姜世勃富宁
- 关键词：HIV-1噬菌体展示肽库结合肽
- HIV-1gp41核心结构模拟位的筛选与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 10个克隆可与NC 1结合 ,DNA序列分析并推导氨基酸序列 ,共 5种序列 :HDVHHRWVYLLS、ITVNEWLYTSEQ、HGRSHGMFKPKR、MGPIARPHWHLN、DMYRSPRPKPDT。其中gp4 1N肽和C肽所形成的复合物可特异性阻断表达HDVHHRWVYLLS ,VNEWLYTSEQ和MGPIARPHWHLN的克隆与NC 1的结合。结论 :所得序列HDVHHR WVYLLS ,VNEWLYTSEQ及MGPIARPHWHLN模拟HIV 1gp4 1六螺旋束核心表位。
- 刘北一罗海波朱平姜世勃富宁
- 关键词：模拟位
