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东方巴贝虫cDNA文库的构建与免疫学筛选被引量：1: 2009年; 目的构建东方巴贝虫(Babesia orientalis)cDNA文库,从中筛选免疫学阳性的克隆。方法用东方巴贝虫感染牛,提纯红细胞内虫体的总RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增后将其连接于噬菌体载体(λTriplEx2),通过体外包装,建成东方巴贝虫cDNA文库,并进行扩增。用兔抗东方巴贝虫的血清筛选cDNA文库,阳性克隆经大肠埃希菌BM25.8自身环化酶将噬菌体重组子λTriplEx2转化为相应的质粒重组子pTriplEx2,PCR鉴定插入片段大小,并测序,用Blast对测序结果进行同源性分析,并对序列编码的氨基酸序列进行结构和功能的预测。结果未扩增文库的滴度为2.0×106pfu/ml,重组率为98.8%,文库插入片段大小为500～3000bp,扩增后的滴度为5.8×108pfu/ml。从东方巴贝虫cDNA文库中筛选得到3个阳性克隆B04、B05和B41,插入片段大小分别约为1300、1000和2400bp,3个片段均包含开放阅读框,分别与多种原虫的核动蛋白、功能未知的假定蛋白和热激蛋白70具有较高的同源性。B04、B05和B41分别编码310、192和647个氨基酸,相对分子质量(Mr)分别约为34000、21000和70700。结论构建了较高质量的东方巴贝虫cDNA文库,并发现3个东方巴贝虫阳性克隆。; 刘琴周丹娜周艳琴张颖贺兰姚宝安赵俊龙; 关键词：CDNA文库免疫学筛选

东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26全长cDNA克隆及蛋白特性分析被引量：1: 2009年; 目的克隆东方巴贝斯虫核糖体蛋白L26(RPL26)全长cDNA序列,对编码的蛋白特性进行分析,并探讨它们在研究系统发育中的应用。方法采用经EST测序获得的东方巴贝斯虫RPL26的5′特异性引物及文库载体3′通用引物对东方巴贝斯虫cDNA文库进行扩增,测序获得东方巴贝斯虫RPL26全长cDNA序列。用BLASTX程序搜索相似性序列及保守结构域,所获序列在GenBank中登记,并用Neighbor-Joining(N-J)法构建基于L26氨基酸序列的系统发育树。结果东方巴贝斯虫RPL26全长cDNA序列(GenBank登录号为FJ492804)长度为716 bp,开放阅读框为414 bp,编码137个氨基酸;同源性分析结果表明东方巴贝斯虫RPL26序列较保守,与牛巴贝斯虫(Babesia bovis)、小泰勒虫(Theileria par-va)等亲缘关系较近,在系统发育树中的遗传距离也较近。结论首次获得东方巴贝斯虫RPL26基因,其可能作为分子指标应用于研究生物系统发育。; 刘琴周丹娜张颖贺兰周艳琴赵俊龙; 关键词：东方巴贝斯虫特性分析克隆系统发育树

东方巴贝斯入侵相关的牛红细胞糖蛋白受体基因的克隆及功能研究: 东方巴贝斯虫仅感染水牛,而不感染黄牛和奶牛。推测东方巴贝斯虫入侵相关的配体与其他巴贝斯不同或牛红细胞表面受体不同。本实验从黄牛,水牛,奶牛的巴贝斯虫体红细胞受体着手。在先前的研究中,已证实牛红细胞上的唾液酸残基在牛的巴贝...; 张庆丽胡敏周艳琴赵俊龙; 文献传递

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国家自然科学基金(30671575)