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一种简便的STR重复次数测定方法被引量：1: 2008年; 短串联重复(STR)的多态性分析是生物个体识别最有效的一种手段,在法医学鉴定中已被广泛用于身份识别.但目前使用的方法成本太高,以致不便在更广泛的范围推广.针对法医上常选用的4 bp重复单位的STR基因座,采用PCR产物小于160 bp的迷你STR(Mini STR)和优化聚丙烯酰胺凝胶电泳条件,提高分辨率,使重复单位之间能有效分辨.设计PCR引物,使STR基因座扩增产物的大小为4 bp的倍数,应用8 bp的DNALadder即能精确测定整数倍STR重复单位数.这一方法操作简便,成本低廉,尤其是用于制作人基因身份证,使得人人制作一张基因身份证成为可能.; 余敏马明星卢培吴松锜任永富谭德勇; 关键词：DNA LADDER

抗hARD1抗血清制备及其初步肿瘤免疫组化分析被引量：5: 2008年; 人ARD1(human arrest defective1,hARD1)基因被确定具有N-乙酰基转移酶活性,但其生理学功能并不清楚。为了探讨hARD1基因与肿瘤的关系,检测hARD1蛋白在不同肿瘤中的表达,克隆了hARD1基因并进行原核表达,利用镍离子螯合(His-bind)柱层析纯化,得到纯度达95%以上的hARD1蛋白。以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备了抗hARD1蛋白的抗血清。利用抗hARD1多抗血清检测常见的临床肿瘤病理组织,发现hARD1蛋白在乳腺肿瘤、前列腺癌,以及肺癌中有较高频率的表达,其中乳腺肿瘤中的表达频率最高,达到70%,远高于其他肿瘤组织。表明hARD1蛋白的高表达可能是乳腺肿瘤组织的一个标志,为进一步揭示hARD1与乳腺肿瘤的关系奠定了基础。; 余敏黄超向明钧赖建华杨慧马明星谭德勇; 关键词：免疫组化分析肿瘤

4种不同血清样本处理方法对双向电泳效果的影响被引量：2: 2008年; 比较了常规处理、透析除盐处理、TCA-丙酮法和蛋白质A/G亲和柱处理血清样本对双向电泳分离效果的影响,结果显示4种方法中蛋白质A/G亲和柱处理方法可以获得较好的分离效果.; 向明钧余敏马明星陈艳涂源泉谭德勇; 关键词：血清双向电泳

抗hARD1抗血清制备及其肿瘤免疫组化初步分析: ARD1(Arrest defective 1)最初在酵母细胞中发现,是 N—乙酰基转移酶 NatA 的一个亚基,另一个亚基是 Nat1。NAT1和 ARD1中任何一个亚基的缺失都导致 NatA 活性丧失,致使酵母表现出...; 余敏黄超马明星赖建华杨慧黄惟巍王泽华焦杨谭德勇; 关键词：免疫组化分析肿瘤

线粒体转录终止因子蛋白家族研究进展被引量：17: 2007年; 线粒体转录终止因子蛋白的作用是与线粒体DNA的特异位点结合,导致线粒体基因转录停止。近年来,随着人们对线粒体基因转录机制和人线粒体疾病的深入研究,线粒体转录终止因子的功能开始受到人们的关注。本文介绍了线粒体转录终止因子及其家族成员的研究进展和有待解决的一些问题。; 余敏伍红谭德勇; 关键词：线粒体DNA

人外周血ILP2蛋白水平与乳腺肿瘤的关系: 乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤,并已成为威胁我国女性生命的最严重的癌症。从近些年乳腺癌诊断的发展趋势看,乳腺癌标志物检测是目前较为准确、快捷的方法,尤其适用于肿瘤的早期诊断。由于外周血具有采集方便,取样创伤小的优点,...; 马明星向明均余敏严敏黄惟巍谭德勇; 关键词：双向电泳

血清样本双向电泳操作条件优化被引量：2: 2007年; 为建立分辨率高、重复性好的血清样品双向电泳技术,从血清样品的水化、等电聚焦、胶条的平衡、胶条的染色等几个方面对双向电泳操作条件进行了分析。结果表明采用以下的操作过程可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳结果:样品水化2h(25℃);胶条泡涨12～16h(25℃);17cm胶条的等点聚焦程序采用250V线性1h/1000V线性1h/4000V线性2h/8000V线性3小时/8000V线性10h/500V快速0.5h,11cm的胶条的等点聚焦程序采用250V慢速4h/1000V快速2h/4000V快速1h/8000V快速2.5小时/8000V快速7h/500V快速30min;两次平衡各15～20min;银染条件为固定两小时或过夜,敏化50～60min,定影30～40min,显影10min左右,终止10min。这一研究对利用双向电泳分析血清蛋白具有很好的参考价值。; 向明钧叶金花余敏马明星卑占宇王熙才谭德勇; 关键词：血清样本双向电泳

U251细胞血清饥饿特异抗原的ScFv噬菌体抗体库构建: 2007年; 目的:构建一个U251细胞血清饥饿特异抗原ScFv噬菌体抗体库。方法:将U251细胞进行48小时的血清饥饿培养,将其细胞裂解液免疫4周龄的BALB/c小鼠,提取被免疫小鼠脾脏细胞总RNA,反转录成cDNA,利用RT-PCR扩增免疫球蛋白IgG的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,用一个柔性片段(Linker)连接VL和VH基因片段,将连接产物重组到pCANTAB-5E载体,转入TG1菌株中,随后加入辅助噬菌体(Help phage)M13K07超感染,构建单链抗体片段(Single chainfragment of variation,ScFv)噬菌体抗体库。结果:经过富集筛选后,库容量达到3×106cfu/L,随机挑取8个克隆进行ELISA检测,获得了1个阳性克隆。结论:成功构建了一个具有一定库容的U251细胞血清饥饿特异抗原的单链抗噬菌体抗体库,为筛选血清应答蛋白抗体、进一步克隆血清应答蛋白的基因奠定基础。; 余敏尚海谭德勇孙桂林; 关键词：U251细胞血清饥饿 SCFV 抗体库

human Arrest-defective-1 (hARD 1) protein is overexpressed in breast cancer in vivo and promotes MCF-7 cell proliferation: The identification and characterization of genes highly expressed in cancer tissues can indicate a potential r...; 马明星黄超余敏赖建华杨慧黄惟巍谭德勇; 关键词：IMMUNOHISTOCHEMISTY

应用比较蛋白组学技术筛选乳腺癌血清标志物被引量：3: 2011年; 为了寻找乳腺癌血清标志蛋白标志物,本研究用试剂盒去除血清样品中的高丰度蛋白,通过固相pH梯度双向凝胶电泳分离乳腺癌病人血清和非乳腺癌血清,银染显色,分析比较电泳图谱寻找差异蛋白.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定差异蛋白的肽指纹图谱,MASCOT软件分析确定为何种蛋白,然后用蛋白印迹验证与乳腺癌发生关系密切的差异蛋白.本研究获得了分辨率高、重复性好的双向电泳银染图谱,得到3个差异明显的蛋白,经肽指纹分析并结合数据库查询,初步鉴定为人血凝级联反应中的关键酶、人体细胞凋亡蛋白抑制剂样蛋白ILP-2、人体HP蛋白.蛋白印迹研究表明ILP-2在乳腺癌血清中的含量明显高于非乳腺癌血清样本,该蛋白有可能是乳腺癌标志物.; 向明钧方先松马明星谭德勇; 关键词：乳腺癌双向凝胶电泳质谱分析蛋白印迹

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云南省科技攻关计划(2006SG09)