浙江省自然科学基金(ZB0202)
- 作品数：11 被引量：29H指数：3
- 相关作者：瞿佳吕建新岑东周翔天付小莹更多>>
- 相关机构：温州医学院温州医学院附属眼视光医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金宁波市医学科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 原癌基因cmetmRNA实时荧光定量PCR参考标准的构建被引量：3
- 2005年
- 目的 构建实时荧光定量PCR(FQ- PCR)标准以定量检测原癌基因c -metmRNA的表达。方法 以Trizol裂解抽提法提取新鲜肝组织总RNA。以RT- PCR法制备c metcDNA目的片段并进行扩增;以A T载体克隆法将纯化的目的片段与pGEM TEasyVector连接成重组质粒并转化E.coliDH5α。采用碱裂解法提取重组质粒,联合用直接PCR、α互补法和氨苄青霉素筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性。用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并测定A260,从而确定原液的重组质粒拷贝浓度并以此制备FQ PCR梯度浓度标准。结果 c -metcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性。结论 成功构建了c -met实时FQ PCR参考标准。
- 岑东吕建新裴仁治
- 关键词：C-METFQ-PCR原癌基因实时荧光定量PCR限制性酶切碱裂解法
- 肝细胞生长因子mRNA实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在淋巴瘤诊断中的价值
- 目的构建肝细胞生长因子(HGF) mRNA定量标准,建立实时荧光定量(FQ) -PCR检测体系,探讨其检测淋巴瘤的应用价值。方法提取总RNA,行逆转录PCR,获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒,作为定量标准。设计第...
- 岑东裴仁治吕建新涂植光余晓林文阳安
- 文献传递
- 人肝细胞生长因子mRNA实时荧光PCR定量标准的构建被引量：1
- 2004年
- 目的:构建实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准以定量检测人肝细胞生长因子mRNA的表达。方法:采用RT-PCR法利用肝组织提取的总RNA制备肝细胞生长因子cDNA目的片段。与pGEM-T Easy Vector连接成重组质粒并转化E.coli DH5α。联合用直接PCR、α互补和氨苄青霉素筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性。测定纯化的重组质粒A260,确定浓度并以此制备FQ-PCR梯度浓度参考标准。结果:HGF cDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性。结论:成功构建了实时FQ-PCR定量参考标准。
- 岑东吕建新裴仁治刘东海张顺陆永绥
- 关键词：肝细胞生长因子MRNAPCR
- 实时荧光定量PCR检测急性白血病的肝细胞生长因子mRNA的表达及其临床意义
- 目的定量检测急性白血病(AL)骨髓单个核细胞(MNCs)的肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达,并探讨其临床意义。方法制备67例初治AL患者的骨髓MNCs,提取定量MNCs的总RNA,并制备cDNA。应用实时荧光定量P...
- 岑东裴仁治吕建新涂植光余晓林文阳安
- 文献传递
- 正常幼年豚鼠视觉发育的正视化过程被引量：8
- 2008年
- 目的:研究正常豚鼠眼球生长发育变化规律,为豚鼠作为近视研究的动物模型提供理论依据。方法:选取刚出生的英国种三色豚鼠64只,随机分为8组,每组8只,雌雄各半。分别在第0、1、2、3、5、7、9和11周测量其中一组豚鼠的屈光力(R)、角膜曲率半径(RCC)、前房深度(AS)、晶状体厚度(CL)、玻璃体腔长度(VC)和眼轴总长度(AL)。将左右眼测量值合并在一起分析正视化过程中各屈光成分的变化规律。RCC、AS、CL、VC、AL和R分别做直线相关分析。结果:各组中左右眼的R、RCC、AS、CL、VC和AL差异无显著性(P>0.05),雌雄鼠的R、RCC、AS、CL、VC和AL差异无显著性(P>0.05)。豚鼠出生时为远视[(+5.25±0.22)D],以后远视度数逐渐下降,到11周龄达(+1.34±0.61)D并趋于稳定(P=0.215)。RCC出生时为(3.23±0.01)mm,AS出生时为(1.20±0.00)mm,CL出生时为(2.72±0.02)mm和VC出生时为(3.27±0.01)mm,4项参数在出生后的3周内总体呈上升趋势;3周后除了AS基本保持不变,其他3个参数仍在逐渐增加。AL[出生时为(7.19±0.02)mm]发生了明显的延长(P<0.05)。各参数与屈光力的相关性分析,其中VC与屈光力密切相关(r=-0.818,P<0.01),其他5个参数与屈光力呈中等相关(r=-0.558～-0.680,P<0.01)。结论:在视觉发育期内,豚鼠的各项屈光参数均向正视化发展,完成正视化的时间在9～11周。正视化进程主要与玻璃体腔长度的变化有关。
- 王瑞卿赵海岚胡娱新吴荒苏冠方
- 关键词：正视化动物模型
- 黄色人种葡萄膜黑色素细胞的体外培养及其色素合成研究被引量：4
- 2004年
- 目的 探讨体外培养黄色人种脉络膜、虹膜黑色素细胞的可行性 ,并观察黑色素细胞能否在体外培养时合成色素。方法 将除去色素上皮细胞的脉络膜、虹膜基质组织用胰酶与胶原酶消化 ,分离得到的细胞用添加胎牛血清、碱性成纤维细胞生长因子、异丁基甲基黄嘌呤、霍乱毒素的F12培养液培养。用角蛋白抗体、S 10 0抗体进行细胞免疫组化染色。用分光光度计测定细胞内黑色素含量并计算其生成量。结果 成功体外培养了葡萄膜黑色素细胞 ;生长期每个黑色素细胞内的平均色素含量为 (79 83± 36 2 0 ) pg ,每个细胞每天合成黑色素 (11 4 4± 5 77) pg ,体外培养的葡萄膜黑色素细胞S 10 0表达阳性 ,但角蛋白表达阴性。结论 体外培养的黄色人种葡萄膜黑色素细胞能在体外合成色素 ,黄色人种葡萄膜黑色素细胞内的色素含量与制造量介于白色人种和黑色人种之间。
- 周翔天瞿佳付小莹吕帆胡诞宁
- 关键词：黄色人种葡萄膜黑色素细胞体外培养脉络膜
- 实时荧光定量PCR检测急性白血病的肝细胞生长因子mRNA的表达及其意义被引量：1
- 2008年
- 目的定量检测急性白血病（AL）骨髓单个核细胞（MNCs）的肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达，并探讨其临床意义。方法制备67例初治AL患者的骨髓MNCs，提取定量MNCs的总RNA，并制备cDNA。应用实时荧光定量-PCR（FQ-PCR）检测HGF mRNA在AL的表达。结果HGF mRNA在AL组的表达显著高于对照组（6．936±1．613，0．407±0．170，P〈0．001），而急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的表达差异无统计学意义（7．127±1．911，6．635±0．934，P〉0．05）。在AL中，M5呈显著强表达（9．998±1．454），高于M2、M3、M4、L1、L2和L3表达（P〈0．001）；而后者间表达差异无统计学意义（P〉0．05）。HGF mRNA在性别、年龄间的表达差异也无统计学意义（P〉0．05）。缓解组HGF mRNA的表达明显低于未缓解组（6．393±1．165，8．041±1．848，P〈0．005）。结论HGF mRNA在AL组与对照组、AL亚型间的表达存在差异，但在AML与ALL、AL患者的性别、年龄间的表达无差异。且低表达者疗效较好，提示HGF mRNA可能是AL诊治的又一理想指标。
- 岑东吕建新裴仁治涂植光余晓林文阳安
- 关键词：白血病肝细胞生长因子聚合酶链反应
- 高度近视眼黄斑部不同区域神经上皮厚度的定量测定及其意义被引量：2
- 2005年
- 目的研究高度近视眼黄斑部不同区域的神经上皮层厚度的变化,并分析其与屈光度之间的相关性。方法选取高度近视眼患者78例,按屈光度不同分为A(-6.0^-9.0 D)、B(-9.1^-15.0 D)、C(>-15.0 D)三组。采用Huphery-3000光学相干断层扫描(optical coherence tomogra-phy,OCT)测量黄斑部9个不同分区的视网膜神经上皮层厚度,比较它们之间的差别,并分析各区域神经上皮层厚度与屈光度之间的相关性。结果C组A2~A6区视网膜神经上皮厚度分别为(244.31±24.46)mm、(224.73±27.45)mm、(236.08±27.71)mm、(236.15±34.10)mm与(219.88±20.42)mm,与A、B组比较差别有显著性(P<0.001),其余各区组间差别不明显;A2~A6区视网膜神经上皮厚度与近视屈光度明显相关,r分别为0.387、0.462、0.315、0.403、0.326,经统计学检验发现,差异有显著性(P<0.05)。结论高度近视眼黄斑部神经上皮损害随近视屈光度不断增高而呈区域选择性萎缩变薄,OCT将为追踪观察此种损害提供理想方法。
- 颜文韬吴文灿瞿佳王勤美李文生方海珍
- 关键词：近视黄斑屈光
- HGF mRNA实时荧光定量PCR在淋巴瘤的应用
- 2008年
- 目的构建肝细胞生长因子(HGF)mRNA定量标准,建立实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测体系,探讨在淋巴瘤的应用价值。方法提取总RNA,行RT-PCR,获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒,作为定量标准。设计第二引物对和探针,确定扩增条件,优化组分浓度,建立HGF实时FQ-PCR检测体系,并进行方法学评价。应用该检测体系定量检测47例淋巴瘤的HGF mRNA表达,并采用受试者工作特征(ROC)曲线法,评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度。结果成功构建了HGF定量标准,结合热启动PCR和降落PCR技术创建了HGF mRNA实时FQ-PCR检测体系。方法学评价实验表明:标准曲线的斜率为-3.513,相关系数为0.999,扩增效率达92.6%;批内、批间和日间变异系数分别为2.1%、4.0%和6.8%;灵敏度达2拷贝/μl。HGF mRNA在对照组和淋巴瘤组的表达分别为0.317±0.192和6.425±2.172,组间差异具统计学意义(P<0.001),但HD组和NHL组的表达无显著差异(P>0.05),而缓解组显著低于复发组(P<0.05)。ROC曲线法提示,当临床诊断界值为3.316时,HGF mRNA对淋巴瘤诊断敏感度和特异度分别为93.6%和100%。结论成功构建了HGF mRNA定量标准。建立的HGF mRNA FQ-PCR检测体系是理想的、可行的,可定量检测淋巴瘤HGF mRNA并具诊断价值。
- 岑东吕建新裴仁治涂植光余晓林文阳安滑世轩
- 关键词：肝细胞生长因子实时荧光定量PCR淋巴瘤
- 人眼虹膜色素上皮细胞的培养与鉴定被引量：5
- 2003年
- 目的 :观察体外培养的人眼虹膜色素上皮细胞(irispigmentepithelium ,IPE)的生长状况 ,用透射电镜、细胞免疫化学实验鉴定其性质 ,为进一步研究IPE细胞生理、病理作用提供模型。方法 :对来源于不同个体的健康人眼采用酶消化加显微分离法 ,分离IPE细胞 ,对其进行培养、传代、冻存和复苏。用透射电镜、细胞免疫化学法鉴定细胞性质。建立IPE细胞的有限细胞系。结果 :原代培养的IPE呈棕黑色多角形或不规则形 ,2 4h内 73%细胞贴壁。贴壁细胞体积变大呈多边形或方形 ,胞核轮廓变清 ,胞浆内充满黑色素颗粒。分裂增殖生长的细胞色素颗粒逐渐减少 ,4～ 6代后细胞内色素随着不断分裂逐渐减少至消失 ,部分形态变为成纤维细胞状。电镜下可见细胞表面有丰富的微绒毛 ,胞浆内含少量色素颗粒。细胞免疫化学抗角蛋白与抗S 10 0染色显示IPE细胞胞质呈鲜红色着色。结论 :采用酶消化加显微分离法可以建立人IPE的有限细胞系。
- 付小莹周翔天宋宗明吕帆瞿佳胡诞宁
- 关键词：虹膜色素上皮细胞细胞培养免疫组化
