国家高技术研究发展计划(2012AA022201B)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 酰胺酶拆分制备左乙拉西坦手性中间体(S)-2-氨基丁酰胺的初步研究
- 2015年
- (S)-2-氨基丁酰胺是癫痫治疗药物左乙拉西坦的关键手性中间体。筛选获得了能够立体选择性拆分2-氨基丁酰胺合成(S)-2-氨基丁酰胺的重组酰胺酶Dt-Ami 6。考察了温度、p H、有机共溶剂及不同底物浓度对催化反应的影响。结果表明,该酶的最适催化温度为40℃,最适底物浓度为1 mol/L,湿菌体最适添加量为8 g/L,在去离子水中反应40 min,(S)-2-氨基丁酰胺的收率为41.7%,光学纯度达94.0%。
- 郑仁朝佘勇郑裕国
- 关键词：酰胺酶
- D-氨基酰化酶的研究进展被引量：1
- 2014年
- D-氨基酰化酶是一类能特异性水解D-氨基酸N-酰基衍生物生成D-氨基酸的重要水解酶。随着D-氨基酸在医药、食品以及饲料等行业的需求量不断增大,深入研究D-氨基酰化酶具有十分重要的意义。本文从D-氨基酰化酶的分类、酶学性质、分子结构及催化机理等方面进行了综述,并对D-氨基酰化酶在工业上的应用前景进行展望。
- 郑文宾郑仁朝郑裕国
- 摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质被引量：1
- 2014年
- 立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose 6 FF疏水柱层析、DEAE Sephadex A-50阴离子交换和羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析,纯化得到电泳纯的酯水解酶。SDS-PAGE和凝胶过滤HPLC分析确定该酶为单亚基蛋白,分子量为68 kDa。不同碳链长度p-硝基苯酚酯特异性酶解结果表明,该酶为酯酶,酶促合成普瑞巴林手性中间体(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的最适pH为9.0,最适温度为45℃,且在pH 7.0-9.0和40℃条件下具有良好的稳定性。Ca2+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的促进作用,Co2+、Fe3+、Ni2+及EDTA对酶活有较强的抑制作用。此外,考察了该酯酶水解p-硝基苯酚酯的动力学参数,及CNDE浓度对转化率的影响。首次报道了能够立体选择性水解CNDE的酯酶,相关酶学性质研究将为该酶催化合成普瑞巴林手性中间体的工业化应用提供重要依据。
- 郑仁朝王天真黎小军郑裕国
- 关键词：酯酶分离纯化酶学性质
