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国家自然科学基金(30371302): 作品数：22 被引量：142H指数：7; 相关作者：张彩许晓群张建华王郡甫田志刚更多>>; 相关机构：山东省医学科学院山东大学中国科学技术大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程自动化与计算机技术更多>>

sMICA基因的克隆表达及其纯化被引量：1: 2005年; 目的构建重组MICA原核表达载体并探讨MICA对NK细胞毒效应的影响。方法经RT-PCR从Hela细胞获取MICA基因,经适当酶切后构建表达载体pBV220-MICA,转入大肠杆菌DH5α进行表达。重组MICA蛋白经纯化后与NK92细胞孵育观察对NK细胞毒效应的影响。结果带有重组质粒pBV220-MICA的大肠杆菌经热诱导后,以可溶性形式表达重组MICA蛋白,纯化后的重组MICA蛋白纯度为95%。经重组MICA处理的NK92细胞对MICA表达阳性的肿瘤细胞的杀伤作用明显降低。结论构建了pBV220-MICA重组质粒,并在大肠杆菌中获得可溶性表达,为研究MICA与NK细胞受体的相互作用机制奠定了基础。; 王郡甫许晓群张彩冯进波张建华刘金生于锡巧田志刚; 关键词：MICA 基因克隆原核表达

The Regulatory Effect of Natural Killer Cells:Do "NK-reg Cells" Exist?被引量：15: 2006年; The most important progress in immunology in the last decade is the description of regulatory lymphocytes, among which Treg cells and regulatory NKT cells are much attractive to not only immunologists but also almost all biomedical researchers. Meanwhile, it is noted that NK cells are not only ＂Killers＂ but also regulate innate and adaptive immunity, especially in early stage, by secreting cytokines and cell-cell contact. In this review, we are going to briefly summarize the progresses in regulatory lymphocytes including T cells （Treg, Tr1, Th3）, NKT cells and NK cells, and then extensively introduce the positive regulatory function of NK cells in both normal immune response and in disease condition （tumor, infection and autoimmunity）, and finally, to focus on the most latest progression in the negative regulatory effects of NK cells on normal and pathogenic immune response. In conclusion, we speculate that a ＂regulatory NK （NK-reg）＂ cell subset exist and need to explore.; Cai ZhangJian ZhangZhigang Tian

NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及意义被引量：15: 2008年; 背景与目的:NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用。本研究探讨NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及其意义。方法:采用半定量RT-PCR法检测肿瘤细胞系中NKG2D配体的mRNA表达。应用MTT法检测人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,免疫组织化学技术和Western blot法检测肿瘤细胞中MHCⅠ类相关蛋白A(MHC classⅠchain-related A)蛋白表达情况。结果:13种肿瘤细胞系表达不同水平的NKG2D配体mRNA。其中Hep2细胞中MICA强阳性表达,HeLa、HepG2、MDA231、HT29、SGC7901、M21、K562、Jurkat细胞MICA表达阳性,而Caski、PG、HL-60和Raji细胞中MICA mRNA阴性。MICA和MICB的表达水平与NK细胞杀伤活性具有高度相关性(r=0.851,P<0.001;r=0.652,P<0.05)。除ULBP3外,其余ULBP成员的表达水平与NK细胞杀伤均无相关性。结论:在6种人NKG2D配体中,MICA的表达水平与肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性关系最为密切,肿瘤细胞MICA的表达水平可能决定着机体NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱。; 王义平张彩牛家峰张建华许晓群王郡甫; 关键词：肿瘤细胞 NKG2D MICA MICB 细胞毒性实验

HLA-DRB1基因多态性与扩张型心肌病的相关分析: 2008年; 目的探讨扩张型心肌病(IDC)与人类白细胞抗原(HLA)-DRB1基因多态性的关系。方法用聚合酶链反应—序列特异性引物方法检测301例IDC患者(IDC组)与436例正常人(对照组)的HLA-DRB1等位基因分布情况。结果IDC组HLA-DRB1*11、HLA-DRB1*12、HLA-DRB1*14的基因频率明显高于对照组(RR=2.91、4.02、3.78,P<0.05);IDC组同时携带HLA-DRB1*12、DRB1*14基因型的阳性率亦显著高于对照组(RR=6.24,P<0.01)。结论HLA-DRB1*11、DRB1*12、DRB1*14与IDC有明显相关性。; 王珏刘军莉赵敬杰; 关键词：心肌病人类白细胞抗原-DRB1 聚合酶链反应

苏木精染色法测定化疗药物对贴壁肿瘤细胞毒性作用的实验研究被引量：1: 2010年; 目的:建立苏木精染色法检测贴壁细胞增殖活性和化疗药物对贴壁细胞毒性作用的方法。方法:用苏木精染色法测定贴壁肿瘤细胞的增殖活性;同时利用该方法测定长春新碱、5-氟尿嘧啶对M21和SGC7901细胞的毒性作用,以及顺铂对兔VX2细胞的毒性作用;并与MTT比色法进行对比。结果:苏木精染色法测定贴壁肿瘤细胞增殖活性结果与MTT比色法测定结果具有一致性,P>0.01。苏木精染色法测定各化疗药敏结果呈剂量依赖关系,3种肿瘤细胞系5次测定抑瘤率重复性良好(CV<8%),两种方法检测结果一致,P>0.01。结论:苏木精染色法用于贴壁细胞的增殖活性和化疗药物的细胞毒性测定,具有特异、稳定、经济和简便等优点。; 陈红张建华许晓群张秀芹王宝红王郡甫; 关键词：肿瘤细胞增殖苏木精

重组人白细胞介素15工程菌高密度发酵条件探讨被引量：10: 2007年; 目的研究表达重组人白细胞介素15(rhIL-15)工程菌高密度发酵的条件。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白质表达的因素进行优化。结果以甘油为碳源可明显抑制有害物质乙酸的积累,提高工程菌的表达量和收获率。高密度发酵明显提高了目的蛋白质的表达量和工程菌的产量。结论该发酵工艺大大提高了rhIL-15工程菌的产量和表达水平,为rhIL-15的规模化生产打下了基础。; 张彩王郡甫刘金生许晓群张建华张捷冯进波田志刚; 关键词：基因工程菌高密度发酵碳源大肠杆菌

MHCI类样分子(MICA)在部分肿瘤组织和肿瘤细胞系中的表达及临床意义被引量：15: 2005年; 目的:探讨MHCI类样分子(MICA)在肿瘤组织和肿瘤细胞系中的表达及其临床意义。方法:分别采用半定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测肿瘤组织和肿瘤细胞系MICA表达,MTT法测定NK细胞细胞毒活性。结果:人红白血病细胞K562、喉癌细胞系Hep2、宫颈癌细胞系Hela、肝癌细胞系HepG2和结直肠癌细胞系HT29均有MICAmRNA和蛋白表达,而人Burkitt淋巴瘤Raji和高转移肺癌PG不表达MICA。MICA表达阳性的肿瘤细胞对NK杀伤敏感性明显高于MICA阴性者。多数肿瘤组织存在MICAmRNA和蛋白表达,但并非在所有肿瘤均有表达,癌旁组织均无MICA表达。结论:肿瘤细胞表达MICA可激发NK细胞对肿瘤的杀伤,NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用,肿瘤细胞分泌sMICA分子为肿瘤发生免疫逃逸的机制之一。; 张彩许晓群张建华王郡甫冯进波张建田志刚; 关键词：肿瘤 MICA NK细胞 NK细胞受体免疫逃逸

IFN-α对宫颈癌细胞MHC-I类链相关蛋白A表达的上调作用被引量：3: 2006年; 目的:观察IFNα对宫颈癌细胞MHCI类链相关蛋白A(MICA)表达及功能的影响。方法:以IFNα诱导宫颈癌细胞系HeLa和Caski后,用半定量RTPCR和免疫组化染色法观察诱导前后MICAmRNA和其蛋白表达的变化,用MTT比色法检测诱导前后宫颈癌细胞对外周血NK细胞杀伤敏感性的变化。结果:经IFNα诱导后,HeLa和Caski细胞中MICAmRNA和其表面MICA蛋白的表达水平均明显上调,并呈一定的时间和剂量依赖关系。NK细胞对MICA表达较高的HeLa细胞的杀伤活性,明显高于对MICA弱表达的Caski细胞。经1×106U/LIFNα诱导3d后,两种细胞对NK细胞杀伤的敏感性均明显增强(P<0.01)。结论:IFNα可上调MICA在肿瘤细胞表面的表达,并可增强肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性。; 牛家峰张彩张建华许晓群张维东王郡甫高春义; 关键词：宫颈癌 IFN-Α MICA NK细胞 NKG2D

应用苏木素法测定非单体中药提取物对细胞增殖的影响被引量：3: 2010年; 目的建立测定非单体中药提取物对贴壁细胞增殖影响的方法。方法分别用苏木素染色法、MTT比色法及CCK-8比色法测定HUVEC细胞44 h的增殖活性,并用苏木素法、MTT比色法和CCK-8比色法检测金荞麦提取物对M21细胞增殖的影响,葡萄籽原花青素(GSP)对HUVEC细胞增殖的影响,并对不同方法进行比对。结果苏木素法检测HUVEC细胞44 h的增殖结果与CCK-8和MTT比色法结果具有一致性。在测定非单体中药提取物对贴壁细胞增殖影响方面,苏木素法与CCK-8以及MTT比色法相比具有更好的重复性和准确性。结论苏木素染色法测定非单体中药提取物对贴壁细胞增殖的影响具有稳定、简便和经济等优点。; 陈红张建华李保应张秀芹高海青许晓群王郡甫; 关键词：金荞麦提取物

人NKG2D的基因克隆及其在CHO细胞中的表达被引量：4: 2006年; 目的:构建重组人NKG2D真核表达载体并在CHO细胞表达重组人NKG2D。方法:用RT-PCR方法从NK-92细胞中调取NKG2D基因片段,克隆到pGEM-TEasy载体并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制内切酶EcoRI和BamHI消化pGEM-TEasy/NKG2D重组质粒,分离NKG2D片段,并插入真核表达质粒pEGFP-N1的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pEGFP-N1/NKG2D。然后经脂质体介导转染CHO细胞。应用荧光显微镜观测、Westernblot方法和免疫组化染色对转染细胞内pEGFP-N1/NKG2D的表达进行鉴定。结果:RT-PCR扩增获得650bp基因片段,经DNA序列分析证明所获得的DNA序列与文献报道的NKG2D序列一致。转染的CHO细胞在荧光显微镜下发出强绿色荧光,Westernblot分析显示重组蛋白能特异地与抗人NKG2D单克隆抗体结合;免疫组化检测显示,转染的CHO中有棕色颗粒,证明所构建的NKG2D真核表达载体可以在细胞中表达。结论:构建了人NKG2D的哺乳动物细胞表达载体,并成功地在CHO细胞中获得重组人NKG2D的表达。; 许晓群陈雪梅张彩游力赵昌盛王郡甫张建华; 关键词：NKG2D受体基因转染基因表达 CHO细胞

国家自然科学基金(30371302)

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