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重组aFGF乳酸菌的构建、表达及其对小鼠溃疡性结肠炎的药效研究被引量：1: 2011年; 采用分子克隆技术构建携带人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factors,aFGF)基因序列的乳酸菌重组表达载体pGMN4,转化并筛选出高效表达aFGF的重组菌株,制成活菌制剂。口服5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7d诱导小鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC),在造模同时分别给予高、中、低剂量活菌制剂灌胃17d。通过比较小鼠的毛色、体重、便血、结肠长度、病变组织的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性,以及观察结肠组织病理形态学变化,验证重组aFGF乳酸菌对DSS诱导的小鼠UC的预防和治疗效果。实验结果表明,重组aFGF乳酸菌的表达量可达50μg/mL,高剂量重组活菌制剂能够显著改善小鼠的一般情况和溃疡导致的结肠缩短,促进组织修复,保持结肠结构的完整性,并下调MPO的活性。重组aFGF乳酸菌对小鼠UC具有良好的预防和治疗效果,将为UC治疗制剂的开发提供更加广阔的思路。; 仝雷张齐好邱壮伟苏志坚陈红霞黄亚东; 关键词：乳酸菌人酸性成纤维细胞生长因子溃疡性结肠炎

HSP27和CFL-1在角质细胞急性刺激反应中相关性的研究被引量：2: 2011年; 研究急性刺激条件下,角质细胞中热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)和Cofilin-1(CFL-1)的表达是否具有相关性,初步探讨皮肤急性刺激反应的作用机理.通过免疫印迹法检测十二烷基硫酸钠(SDS)诱发的急性刺激反应下,角质细胞中HSP27和CFL-1蛋白的表达,并通过RNAi技术验证两者之间的相关性.结果发现,急性刺激诱导HSP27表达显著下调,CFL-1显著上调;干扰HSP27后,CFL-1的表达也随着下调,SDS刺激后,则表达上调.在急性刺激性条件下,HSP27和CFL-1的表达具有一定的浓度和时间依赖性;急性刺激能影响角质细胞骨架的改变,这些改变可能是通过HSP27和CFL-1的相互作用来调节的.; 胡浩张齐好邹萍仝雷黄亚东; 关键词：角质细胞 HSP27

穴蚁蛉幼虫全长均一化cDNA文库的构建被引量：4: 2011年; 通过构建穴蚁蛉幼虫(俗称蚁狮)全长均一化cDNA文库,以期了解蚁狮的抗菌肽、毒素蛋白以及其它药用蛋白种类,为日后筛选、克隆表达和分离纯化这些药用蛋白奠定基础。用针刺诱导蚁狮产生抗菌物质后,分离纯化总RNA,结合SMART全长文库与DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建全长均一化cDNA文库,并通过平板计数和菌落PCR方法鉴定文库。随机挑选192个单克隆进行5′端测序,并与NCBI数据库进行比对分析。结果显示,构建出的文库平均插入片段长度为1 200 bp,原始文库的滴度达到7.5×105CFU/mL,而扩增文库则为1.95×1011CFU/mL。在所挑选的单克隆中,共获得190条有效序列,平均读长1 340 bp,文库重组率达到98.96%。与NCBI数据库比对后发现,这些序列可能是一些编码蚁狮免疫、消化及毒性蛋白的基因。; 杨展李广宏邱壮伟王欢歌苏志坚黄亚东; 关键词：全长CDNA文库 EST分析

悬滴培养诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞被引量：5: 2010年; 目的:与平板培养比较,探讨悬滴三维培养对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)肝样分化的诱导效应。方法:对rMSCs进行悬滴培养,以肝细胞生长因子(HGF)作为诱导因子,同时设定平板培养诱导和非诱导对照组,在培养第7、14和21d后,通过RT-PCR法和免疫荧光技术检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(APF)和角蛋白(CK-18)在mRNA和蛋白水平上的表达情况,并通过ELISA检测培养液上清中ALB的分泌。结果:HGF悬滴培养的rMSCs形成球状三维结构,内部呈现空囊样结构,大量细胞聚集在球体外侧面;在第7d就出现ALB和CK-18的强阳性表达,而AFP则表达较弱。HGF培养的单层rMSCs直到第14d才出现ALB、AFP和CK-18 mRNA的弱阳性表达,蛋白表达则在第21d才呈现阳性。ELISA检测到HGF悬滴培养后rMSCs能够胞外分泌ALB,与正常和平板培养诱导组比较差异显著(P<0.01)。结论:悬滴培养为rMSCs创造一种球形三维培养微环境,在HGF的诱导作用下,rMSCs横向分化为肝样细胞。; 张齐好郑炜炜高丽莲刘霞邓新燕张磊陈系古黄亚东; 关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞生长因子肝样细胞

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-08-0611)