黑龙江省科技攻关计划(GA02B501)
- 作品数：13 被引量：80H指数：5
- 相关作者：崔玉东朱战波朴范泽李冬野侯喜林更多>>
- 相关机构：黑龙江八一农垦大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 金黄色葡萄球菌β溶血素研究进展被引量：5
- 2009年
- 金黄色葡萄球菌β溶血素是一种具有磷脂酶C活性的外毒素,具有白细胞毒性、溶血活性等特征,并且对奶牛乳房炎也具有一定的致病性。因此,β溶血素在免疫预防和细胞生物学领域的研究具有很大的价值。对其理化性质与细胞膜作用机制进行介绍,对其毒力、致病性等最新研究进展进行综述。
- 李冬野崔玉东胡晓亮朱战波侯喜林朴范泽
- 关键词：金黄色葡萄球菌
- 金黄色葡萄球菌α-溶血素基因表达及溶血活性检测被引量：2
- 2009年
- 目的为了进一步研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)α-溶血素(Hla)的分子致病机理及其抗原性,对S.aureusHla进行了表达纯化。方法用聚合酶链式反应(PCR)技术,从S.aureuswood46株中扩增出hla基因,将该基因经BamHI和SalI双酶切后克隆到表达载体PET-32a中,获得重组质粒pET-32a(+)/hla,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,然后进行纯化和用溶血试验检测其活性。结果扩增的hla基因序列与已发表的hla基因序列同源性为100%,构建的重组表达质粒pET-32a(+)/hla在E.coliBL21(DE3)中得到表达,重组α-溶血素蛋白为53kDa,纯化后的溶血活性为5000HU。结论成功表达并获得了有活性的重组Hla蛋白。
- 李闰婷朱战波崔玉东
- 关键词：金黄色葡萄球菌基因表达溶血活性
- 牛病毒性腹泻疫苗的研究进展被引量：10
- 2006年
- 牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起的一种呈多种临床症状的疾病,给世界养牛业造成了巨大的经济损失。本文阐述了牛病毒性腹泻病毒抗原多样性对疫苗免疫的影响,总结了影响牛病毒性腹泻疫苗免疫效果的几点因素并对国外新型疫苗的研究进展作以简述,以期为国内疫苗的研制及应用提供借鉴。
- 王丹娜吴明福王君伟
- 关键词：牛病毒性腹泻疫苗免疫效果新型疫苗
- 奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子及荚膜基因的PCR检测被引量：5
- 2009年
- 为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)的基因型特征,本实验利用聚合酶链式反(PCR)方法,对S.aureus的3个标准株和30个临床分离株的凝集因子A、凝固酶、溶血素等33种致病因子进行了检测。结果表明各分离株在毒力因子方面存在一定差异。这些差异的检测将为进一步研究S.aureus的致病性和有效防治提供参考。
- 迟佳琦李闰婷朱战波曹宏伟崔玉东
- 关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子PCR检测
- 牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立被引量：24
- 2005年
- 以牛肾细胞系(MDBK)培养牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验。该ELISA的判定标准为:血清D490 nm值大于0.369的判为阳性,小于0.295的判为阴性,在0.295与0.369之间的为可疑。特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性高、重复性好。与法国进口ELISA抗体诊断试剂盒比较,其符合率为96.3%;与中和试验比较,符合率为95.8%,且敏感性更高。应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染情况,结果显示,这些地区的IBRV感染率为67.1%。
- 朱远茂王海燕薛飞辛九庆赵立平童光志郭巍李兆利相文华
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒酶联免疫吸附试验
- 金黄色葡萄球菌重组GapC蛋白的GAPDH活性及免疫原性分析被引量：9
- 2008年
- 为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表面GapC蛋白的GAPDH活性、免疫原性及免疫保护作用,应用PCR方法扩增出S.aureus的gapC基因,插入到pQE-30载体相应位点,构建重组质粒pQE/gapC。将其导入宿主菌E.coliM15(pREP4)后,IPTG诱导表达。重组蛋白纯化后进行GAPDH活性检测,并与灭活全菌体分别免疫健康家兔。然后,应用ELISA方法检测血清中IgG抗体水平及IFN-γ、IL-4细胞因子浓度,并用1.0×108CFU/mLS.aureus菌株Wood46对免疫家兔攻毒。SDS-PAGE结果显示,GapC蛋白在E.coliM15(pREP4)中获得表达;经GAPDH活性检测及WesternBlot检测,重组蛋白具有较高的GAPDH活性和抗原特异性;经ELISA检测,GapC蛋白及全菌体组兔血清中IgG抗体水平迅速升高,并在加强免疫后第28天达到最高(1:64000),加强免疫后第14d,血清中细胞因子IFN-γ和IL-4浓度与对照组相比,显著升高(P<0.05),而全菌体免疫组升高不明显(P>0.05);攻毒结果为蛋白免疫组家兔获得一定的免疫保护(4/5)。以上结果表明,表达的重组GapC蛋白具有GAPDH活性、较好的免疫原性及免疫保护力,可作为深入研究S.aureus基因工程疫苗的良好靶向。
- 朱洪伟朱战波崔玉东张晶刘乐锋朴范泽
- 关键词：金黄色葡萄球菌免疫原性免疫保护
- 金黄色葡萄球菌β-溶血素基因的克隆及原核表达载体的构建
- 2008年
- 根据GenBank中的金黄色葡萄球菌β-溶血素(hlb)基因序列,设计合成1对引物,采用PCR方法扩增出与预期设计大小相符的hlb基因特异性条带,将扩增出的DNA片段克隆到pMD18-T载体中,转化感受态细胞,经平板筛选,酶切鉴定,获得阳性重组质粒,对重组质粒进行序列测定,结果表明:金黄色葡萄球菌β-溶血素基因全长982bp,不含终止密码子的目的基因,插入的位点、大小与读码框均正确。将hlb基因插入到原核表达pET-32a中,转化到BL-21感受态细胞中,获得了表达hlb基因的阳性重组质粒。
- 李冬野崔玉东侯喜林朱占波朴范泽
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆原核表达
- 猪2型圆环病毒ORF2基因在塞姆利基森林病毒RNA复制子衍生的新型真核表达载体中的表达被引量：4
- 2004年
- 猪 2型圆环病毒 (porcinecircovirus 2 ,PCV2 )是断乳仔猪多系统衰竭综合征 (postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)的原发性病原。PCV2的ORF2编码病毒唯一的结构蛋白Cap。根据GenBank中公布的PCV2JXL株的序列设计一对引物 ,应用PCR方法从该毒株感染的PK 15细胞中扩增出完整的ORF2基因 ,将此基因克隆于本实验室此前构建的塞姆利基森林病毒 (SemlikiForestvirus,SFV)RNA复制子衍生的新型真核表达载体pSFV1CS中的BamHⅠ位点 ,获得重组质粒pSFV1CS Cap。用pSFV1CS Cap分别转染BHK 2 1细胞和 2 93T细胞 ,经间接免疫荧光试验检测表明 ,PCV2ORF2基因在转染细胞中得到表达。小鼠接种试验表明 。
- 罗玉子仇华吉刘建华韩凌霞李娜张守发童光志
- 关键词：猪2型圆环病毒
- 金黄色葡萄球菌抗吞噬因子研究进展
- 2009年
- 曹宏伟崔玉东刘哲
- 关键词：金黄色葡萄球菌脓毒败血症AUREUS伪膜性肠炎
- 牛传染性鼻气管炎病毒重组gE蛋白间接ELISA诊断方法的建立被引量：11
- 2005年
- 以重组牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白,经纯化后作为诊断抗原建立了检测牛血清特异性gE抗体的间接酶联免疫吸附试验,确定其最佳包被量为每孔1.075μg。样品稀释度为1:40,兔抗牛IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶5000。判定标准为样品OD值大于0.582为阳性,小于0.472为阴性,在0.472与0.582之间为可疑。经抗特异性试验和重复性试验证明该方法特异性高、重复性好。在403份血清样品中,进口试剂盒检出234份阳性样品,该诊断方法检出248阳性样品,与进口试剂盒的符合率为94.3%,但该诊断方法检出率更高。在43份血清样品中,中和试验检出24份阳性样品,该诊断方法检出28份阳性样品,与中和试验的符合率为85.7%。应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染率,发现这些地区的IBRV感染率为68.7%。
- 王海燕朱远茂薛飞童光志赵立平相文华韩文瑜
- 关键词：牛传染性鼻气管炎酶联免疫吸附试验
