国家自然科学基金(H100630972789)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- MHCⅠ类分子对小鼠移植瘤成瘤影响的研究
- 2014年
- 目的:研究主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子不同的肿瘤细胞在与其MHC分子匹配/非匹配小鼠中的移植瘤成瘤情况,探索MHC分子在肿瘤发生中的作用。方法:1×104、3×104、5×104个小鼠结肠癌细胞CT26(H2d)分别接种BALB/c(H2d)和C57BL/6(H2b)小鼠,每个剂量对应设置皮下组和静脉组,对C57BL/6小鼠增加5×106、8×106和1×107数量组别;同样将1×105、5×105、1×106个小鼠黑色素瘤细胞B16F10(H2b)分别经皮下或静脉接种到两种小鼠体内,以相同接种量和接种方式下的不同小鼠间形成对比,14 d后观察各组成瘤情况。结果:在BALB/c小鼠成瘤实验中,CT26细胞数为1×104时静脉和皮下组均不成瘤,3×104时静脉组部分成瘤,皮下组不成瘤;5×104时两个组全部成瘤;注射1×105B16F10细胞时两组均不成瘤,5×105时静脉组全部成瘤,皮下组部分成瘤,1×106时两组全部成瘤。在C57BL/6小鼠实验中,皮下注射CT26细胞数<5×106时不成瘤,6×106和8×106部分成瘤,1×107时皮下组全部成瘤,静脉组中CT26细胞达5×106也无肿瘤形成,大于此数量细胞注射时小鼠会因为肺栓塞死亡;对B16F10细胞,1×105时静脉和皮下组即可全部成瘤。结论:当肿瘤细胞与小鼠MHCⅠ表型相匹配,移植瘤成瘤所需细胞数远小于MHCⅠ表型不相匹配所需细胞数,说明MHC分子对肿瘤发生存在影响,此种差异为研究MHC与肿瘤的关系提供了线索,同时也提供了CT26、B16F10细胞株成瘤实验的精确数据。
- 郭涛罗诗樵戴珏殷永芳许继凡
- 关键词：主要组织相容性复合体MHC肿瘤免疫
- 氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞
- 2015年
- 目的建立氢化可的松联合rmIL-2、rmIL-15体外扩增小鼠NK细胞的方法 ,观察该培养方法对扩增后NK细胞的纯度、扩增效率及功能的影响。方法应用免疫磁珠分选法(MACS)分离得到高纯度的小鼠脾脏CD3-CD49b+NK细胞,依据添加刺激因子的不同将纯化后的NK细胞分成A组(rmIL-2)、B组(rmIL-2+rmIL-15)和C组(氢化可的松+rmIL-2+rmIL-15)进行体外培养,每3日添加新鲜培养基及细胞刺激因子。采用台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术检测CD3-CD49b+NK细胞纯度;CFSE稀释法检测NK细胞的增殖效率;MTT比色法检测NK细胞杀伤活性;流式细胞术检测NK细胞膜表面CD107a的表达。结果磁珠分选后NK细胞纯度由分选前的(8.59±1.41)%提高为分选后的(91.60±1.33)%。体外扩增培养15 d后A组扩增的NK细胞纯度降低[(75.02±3.48)%,P<0.01],B组(85.87±4.79)%和C组(88.04±3.35)%与扩增前相比较无明显差异(P>0.05)。扩增15 d后C组NK细胞扩增倍数为(45.06±1.64)倍,显著高于A组(5.28±0.34,P<0.01)和B组(25.39±3.29,P<0.05)。细胞增殖实验结果表明培养第7天和第14天各组NK细胞增殖指数(PI)分别为A组(2.26±0.81)和(3.27±1.21),B组(4.62±1.45)和(15.82±3.92),C组(6.91±1.34)和(23.66±5.42)。培养第7天和第14天NK细胞增殖指数C组>B组>A组(P<0.05)。当效靶比为10∶1时,C组扩增后NK细胞肿瘤杀伤率为(81.27±2.32)%,显著高于A组[(37.20±7.32)%,P<0.01]和B组[(69.51±6.32)%,P<0.05]扩增后NK细胞。C组(49.32±4.36)%扩增后NK细胞CD107a表达水平显著高于A组[(9.37±1.82)%,P<0.001]和B组[(28.46±4.21)%,P<0.01)]NK细胞。结论氢化可的松联合rmIL-2+rmIL-15培养方案能够有效地体外扩增并活化小鼠NK细胞,为NK细胞的肿瘤过继免疫治疗应用于临床奠定了实验基础。
- 高祥黄婧刘钊骆晨罗诗樵
- 关键词：NK细胞
- 输注体外扩增的同源CD4^+CD25^+调节性T细胞增进小鼠肿瘤易感性被引量：3
- 2014年
- 目的研究过继输注体外扩增同源调节性T细胞(Treg)对小鼠抗肿瘤免疫的影响,探索过继输注Treg治疗方法可能存在的风险。方法免疫磁珠分离法分离小鼠脾脏内CD4+CD25+Treg,流式细胞术测定其纯度后予以CD3/CD28单克隆抗体磁珠和大剂量IL-2(1 000 U/mL)刺激,进行2周2轮次扩增后收集Treg,混合淋巴细胞培养测定其体外抑制功能;后将1×107Treg静脉注射BALB/c小鼠,24 h后再注射B16F10肿瘤细胞,同时设置单独接种肿瘤细胞组,14 d后计数肺部移植瘤数目,测定外周血Treg比例。结果新鲜CD4+CD25+Treg纯度大于95%,平均96.3%±2.88%,体外扩增后纯度大于85%,平均87.73%±2.35%;与新鲜Treg相比,扩增后抑制功能未受损(P>0.05);给BALB/c小鼠注射1×106B16F10细胞后14 d肺部肿瘤结节数为(14±5)个,先注射1×107体外扩增Treg后再注射1×106B16F10细胞,肿瘤结节数增多为(73±9)个(P=0.007),与单独注射2×106B16F10细胞相当(86±8)个(P=0.230);给C57BL/6小鼠输注5×105B16F10细胞后结节数为(70±15)个,预先输入8×106体外扩增Treg后再注射5×105B16F10细胞,肺部肿瘤结节数明显增多,大于300个,与前者相比,差异有统计学意义(P<0.01),同时荷瘤小鼠外周血Foxp3+Treg比例上升更为显著(P<0.05)。结论过继输注体外扩增Treg诱导移植物免疫耐受的同时,可能抑制机体的抗肿瘤免疫,因此存在一定风险。
- 郭涛罗诗樵许继凡戴珏刘钊高祥
- 关键词：肿瘤免疫FOXP3移植免疫
- 体外扩增的Treg细胞抑制NK细胞介导的抗肿瘤免疫被引量：8
- 2015年
- 目的研究CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)对NK细胞肿瘤杀伤力的影响及Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制的机制;初步探讨过继输注NK细胞逆转Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制的作用。方法免疫磁珠分离法(MACS)分离得小鼠脾脏Treg细胞及NK细胞,用流式细胞术检测其纯度。以CD3/CD28单克隆抗体磁珠和重组小鼠白介素2(rm IL-2)联合刺激体外扩增Treg细胞,重组小鼠白介素15(rm IL-15)、rm IL-2以及氢化可的松联合刺激体外扩增NK细胞。将扩增后Treg细胞及NK细胞按不同比例混合淋巴细胞培养,MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性。将B16-F10小鼠黑色瘤细胞输注至Balb/c小鼠体内建立肺移植瘤模型[1],将荷瘤小鼠分为4组:A组单独接种B16-F10小鼠黑色瘤细胞;B组接种Treg细胞+B16-F10黑色素瘤细胞;C组接种B16-F10黑色素瘤细胞+NK细胞;D组接种Treg细胞+B16-F10黑色素瘤细胞+NK细胞。MTT比色法测定各实验组小鼠脾脏NK细胞的杀伤活性,并比较不同处理组小鼠肺部肿瘤结节数目。结果体外扩增后的Treg细胞对新鲜分选及扩增后的NK细胞活性均具有明显抑制作用(P<0.05),且抑制作用呈剂量依赖关系;A组荷瘤小鼠NK细胞活性低于正常小鼠,且B组荷瘤小鼠NK细胞活性较A组进一步降低(P<0.05);D组荷瘤小鼠NK细胞活性高于A组和B组荷瘤小鼠,但仍低于正常小鼠组(P<0.05)。B组荷瘤小鼠肺部移植瘤数目(105.33±10.97)较A组明显增多(17±4.58)(P<0.01);C组荷瘤小鼠肺部移植瘤数目(2.00±1.00)较A组(17±4.58)明显减少(P=0.037);D组荷瘤小鼠肺移植瘤数目(79.00±8.54)较B组明显降低(105.33±10.97)(P=0.030),但仍高于A组荷瘤小鼠(17±4.58)(P<0.001)。结论体内种植肿瘤会抑制机体NK细胞活性;输注体外扩增Treg细胞能够通过抑制NK细胞发挥抗肿瘤免疫抑制;过继输注体外扩增NK细胞能够部分逆转Treg细胞介导的抗肿瘤免疫抑制。
- 高祥郭涛黄婧刘钊骆晨罗诗樵
- 关键词：肿瘤免疫
