国家高技术研究发展计划(2012AA02A403)
- 作品数：15 被引量：40H指数：4
- 相关作者：魏文进金宁一鲁会军郝倩郑海发更多>>
- 相关机构：军事医学科学院北京民海生物科技有限公司吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- QuilA为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫评价被引量：5
- 2013年
- 目的选用Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫小鼠,评价免疫效果。方法将pVAX1-H3-EHA-H1HA1new,pVAX1-H3-H1HA new,pVAX1-EHA等3种候选核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,进行细胞免疫和体液免疫水平检测。结果体液免疫检测显示,免疫后35d,pVAX1-H3HA-EHA-H1HA1new免疫组小鼠产生H1亚型流感病毒特异性体液免疫应答,且抗体水平略高于其他免疫组。细胞免疫检测显示,当受到H1亚型流感病毒抗原刺激时,各免疫组T淋巴细胞均表现出特异性增殖反应和CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞增多,各免疫组小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10及脾脏淋巴细胞IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05)。结论以Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感多表位疫苗可诱导免疫小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。
- 靖杰鲁会军刘昊刘存霞刘燕瑜任静强陆飞金宁一
- 关键词：流感病毒DNA疫苗免疫
- 肠道病毒71型病毒样颗粒在汉逊酵母中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的应用汉逊酵母表达系统进行肠道病毒71型（EV71）病毒样颗粒（VLP）的表达。方法将经过汉逊酵母密码子优化的人EV71的P1和3CD基因片段克隆到汉逊酵母表达载体PMV上，获得重组表达质粒PMV．P1-3CD，转化汉逊酵母宿主菌AU0501，PCR方法及稳定传代培养筛选整合P1和3CD基因的重组菌株。重组菌种接种在含有1％甲醇的培养基中进行诱导表达，对表达产物进行SDS．PAGE、Western blot检测。挑选优胜表达菌株进行30L发酵罐发酵培养，发酵产物经过粗略纯化后进行电镜分析。结果筛选获得EV71重组表达菌株；SDS-PAGE检测结果显示在相对分子质量（M，）为26×10^3、33×10^3、35×10^3处有明显的VP3、VP1、VP0蛋白条带，M大小与预期的目的蛋白大小一致；Western blot检测结果显示表达产物与EV71-VP1单克隆抗体在犯为33×10^3处有较为明显的VPl反应条带，表达产物具有良好的免疫反应性；表达菌株发酵表达量可达200mg／L，电镜分析可见24～30nin的VLP，且颗粒结构完好。结论应用汉逊酵母表达系统成功表达了EV71VLP，为今后研制EV71VLP疫苗奠定基础。
- 顾美荣宋琳琳许珊珊付作申林福玉张现臣魏文进贾士儒
- 关键词：肠道病毒71型汉逊酵母病毒样颗粒
- 无针肌内注射免疫四价流感裂解疫苗的免疫保护效果评价
- 2023年
- 采用无针肌内注射流感疫苗免疫SD大鼠和巴马小型猪,用有针肌内注射免疫作为对照,通过观察评价局部接种效果,并采用血凝抑制试验测定疫苗免疫后的血抑抗体效价及鸡胚中和试验评价中和抗体效价。结果显示,无针肌内注射30μg HA抗原量可达到免疫的最佳效果。与有针肌内注射相比,无针肌内注射能产生对各型别病毒的更好的血凝抑制抗体和中和性抗体。结果表明,无针肌内注射四价流感裂解疫苗安全、有效,将为流感疫苗快速大规模接种提供新的策略,为无针注射免疫疫苗临床试验研究提供依据。
- 史伯昌田崇瑜许振国谭凌云李欣昱李华斌贺威刘媛闫芳郑源强赵忠鹏
- 关键词：流感裂解疫苗巴马小型猪
- 犬流感研究新进展被引量：8
- 2015年
- 目前已发现多种亚型流感病毒可感染犬,包括H1、H3、H5和H9亚型。其中H3N8和H3N2亚型流感病毒可在犬群中流行,主要引起呼吸道症状。犬流感出现不仅威胁犬的健康,也给公共卫生带来了威胁。本文从生态学特征、病原性、诊断及预防控制等方面对犬流感的最新研究进展进行了综述。
- 于志君张醒海张坤孙伟洋王铁成杨松涛黄耕高玉伟夏咸柱
- 关键词：H3N2H3N8H9N2
- ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗在小鼠模型中的安全性和免疫原性研究
- 2014年
- 目的 研究ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗（groups A,C,Y and W135 meningococcal conjugate vaccine,MCV）在小鼠中的安全性及免疫原性.方法 用4价MCV腹腔注射BALB/c小鼠,并于接种前及接种后7d称量小鼠体重,观察小鼠的体重变化.分别于0和14 d用4价MCV皮下免疫BALB/c小鼠,并分别于第1剂接种后7和21 d采血,用间接ELISA测定血清特异性抗体水平.采用成组t检验对实验结果进行统计分析.结果 在7d观察期间,所有小鼠的体重均增加,4价MCV接种小鼠与对照小鼠体重增加间的差异无统计学意义（t=1.988,P＞0.05）.100％4价MCV接种小鼠的抗各群多糖抗体阳转,且抗体水平随接种次数的增加而提高.4价MCV接种小鼠与相应的单价疫苗原液接种小鼠的血清抗A群（t=2.107,P＞0.05）、C群（t=1.343,P＞0.05）、Y群（t=1.648,P＞0.05）和W135群（t=0.556,P＞0.05）抗体水平间的差异无统计学意义.结论 4价MCV在小鼠中具有良好的安全性和免疫原性.
- 王婷婷李亚楠任涛郝倩张明华唐秀丽魏文进郑海发
- 关键词：安全性免疫原性
- ACYWl35群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的研制被引量：1
- 2013年
- 目的制备安全有效的四价脑膜炎球菌多糖结合疫苗。方法用溴化氰分别将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖活化，以己二酸二酰肼作为连接剂，碳化二亚胺作为偶联剂，先制备单价A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素（diphtheriatoxoid，DT）结合疫苗，再配比制成ACYWl35群脑膜炎球菌多糖结合疫苗（groups ACYWl35 meningococcal polysaccharide—DT conjugatevaccine，ACYWl35一DT）。以ACYWl35-DT免疫小鼠，用间接ELISA检测小鼠血清抗各多糖抗体，采用f检验对检测结果进行统计学分析。结果制备的ACYWl35-DT的各项指标均达到质控标准，而且ACYWl35-DT具有良好的安全性和免疫原性，ACYWl35-DT免疫小鼠的抗A群多糖-IgG（f=24．487，P〈0．01）、抗C群多糖-IgG（f=17．056，P〈0．01）、抗Y群多糖-IgG（t=26．213，P〈0．01）和抗W135群多糖-IgG（t=17．392，P〈0．01）水平明显高于四价脑膜炎球菌多糖疫苗免疫小鼠。结论采用此项技术可成功制备ACYWl35-DT。
- 张明华任涛曹欣唐秀丽韩菲王婷婷胡鹏张美香郝倩何佳琦郑海发魏文进
- 关键词：奈瑟球菌脑膜炎疫苗多糖类细菌白喉类毒素
- B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立被引量：1
- 2015年
- 目的利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以105EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果成功从体外拯救出B型流感病毒B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性;攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论成功搭建B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究比较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。
- 孙伟洋于志君李雪陈强高晓龙国娇张坤李元果王铁成杨松涛黄耕赵永坤高玉伟夏咸柱
- 关键词：B型流感病毒反向遗传操作BALB/C小鼠
- B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失对病毒致病性的影响分析被引量：2
- 2015年
- 本研究利用基因工程技术探索B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失对病毒致病性的影响,并利用反向遗传学技术从体外拯救NS1蛋白羧基端缺失的B型流感病毒,评估去除NS1蛋白羧基端对B型流感病毒致病性的影响,探究B型流感病毒致病性变异的分子基础。通过全基因合成和反向遗传学技术从体外拯救NS1蛋白羧基端发生171个氨基酸缺失的B型流感病毒B/Yamagata/16/88株,命名为B-L5。将实验室之前拯救的母本株B/Yamagata/16/88(以下简称B-S9)和B-L5以3×105 EID5 0的攻毒剂量分别人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒滴度等方面进行致病性分析。成功构建了B型流感病毒B/Yamagata/16/88NS1蛋白羧基端缺失株反向遗传平台。母本株B-S9和NS1蛋白羧基端缺失株B-L5均能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠均呈现低致病性;B-S9感染小鼠后,从攻毒后第3d至第7d,体重持续下降,相反,B-L5感染小鼠后,只在攻毒后第2d出现体重下降,攻毒后第3d体重开始回升;B-S9和B-L5感染小鼠后均能在小鼠肺部进行复制,但攻毒后第3d,B-L5感染小鼠肺脏滴度要比B-S9低7 900倍,攻毒后第6d,B-L5感染小鼠肺脏已检测不到病毒复制。实验结果表明,NS1蛋白羧基端缺失可以明显降低B型流感病毒对小鼠的致病性。B型流感病毒致病性变异的分子基础还有待继续研究,该反向遗传操作系统的建立为B型流感病毒分子机制的研究奠定了基础,同时也为B型流感减毒活疫苗的研究开辟了新途径。
- 李雪于志君孙伟洋陈强王铁成杨松涛黄耕高玉伟夏咸柱张雪梅
- 关键词：B型流感病毒反向遗传操作NS1蛋白
- 转瓶培养与生物反应器微载体培养重组腺病毒的比较被引量：4
- 2016年
- 目的分别用3L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养人胚胎肾细胞（HEK-293细胞）并接种H3型流感重组腺病毒,比较两种方法培养细胞及重组腺病毒的效果。方法分别用3L转瓶和7L生物反应器培养HEK-293细胞。转瓶每24h取样,生物反应器每12h取样,记录细胞总数。待细胞长满表面85%~90%时接种流感重组腺病毒,完全病变后收取病毒液并测定病毒滴度。结果转瓶培养HEK-293细胞3d,细胞增殖增加1.85~2.45倍,为（3.71~4.90）×107个[（2.95~3.90）×104 cells/cm2],生物反应器培养3d,细胞增长4.72~5.00倍,为（132.15~140.09）×107个[（24.88~28.72）×104cells/cm2]。转瓶培养重组腺病毒滴度为6.85TCID50/ml,生物反应器微载体系统培养腺病毒滴度为7.200TCID50/ml。结论生物反应器微载体系统培养流感重组腺病毒数量和滴度均高于转瓶培养,不但提高了疫苗的产量,还减少了细胞分泌物的残留,增强了疫苗接种的安全性。
- 郭海宁张萍韩继成靖杰曹亮肖朋朋解长占李一权马海彬南福龙崔卓栋李霄田明尧鲁会军金宁一
- 关键词：转瓶生物反应器微载体HEK-293细胞重组腺病毒
- 口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗的制备及检定被引量：1
- 2016年
- 目的制备口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,并进行全面检定。方法制备O1、O139群霍乱弧菌灭活菌体原液及重组霍乱毒素B亚单位(recombinant cholera toxin B subunit,r CTB)原液,按比例混合制成口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗,为保护r CTB免受胃酸的破坏,制备了碳酸氢钠抗酸泡腾颗粒,并按照制定的新制品原液及成品的质控标准,对原液及成品进行全面检定。结果制备的口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗工艺稳定,各项指标均达到质控标准。结论口服重组B亚单位O1/O139霍乱疫苗安全、有效,且制备工艺可行,符合规模化生产的要求。
- 张静飞陈磊董思国曹天成何金娜曹欣胡鹏郝倩魏文进贾丽君陈翠萍郑海发曾明
- 关键词：安全性免疫原性
