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国家高技术研究发展计划(2012AA02A401): 作品数：44 被引量：76H指数：4; 相关作者：赵志强吴兵刘方蕾刘爱萍杨会强更多>>; 相关机构：兰州生物制品研究所有限责任公司北京生物制品研究所有限责任公司成都生物制品研究所有限责任公司更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>

细菌内毒素检查法在肺炎球菌结合疫苗研制中的应用及验证被引量：1: 2017年; 目的应用细菌内毒素检查法(动态浊度法)检测13价肺炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量,并对该方法进行验证。方法用《中国药典》三部(2010版)载录的动态浊度法检查疫苗原辅材料、疫苗过程产物及疫苗细菌内毒素含量,并进行肺炎球菌结合疫苗原液和成品的细菌内毒素含量检测,验证方法的可行性及准确性。结果 13价肺炎球菌结合疫苗生产使用试剂、相关原辅材料和磷酸铝佐剂对细菌内毒素检查无影响;该方法线性、专属性、准确性、精密度、耐用性良好,检定范围初步定为0.08~10 EU/ml,定量限度暂定为0.03 EU/ml;可准确测定疫苗原液和成品中细菌内毒素含量,重复性和准确性良好。结论动态浊度法检测13价肺炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量,结果准确、稳定,符合方法验证的要求,可为该疫苗的质量控制提供稳定可靠的检测方法。; 吴兵刘方蕾李燕婷罗树权毛睿范锋锋于旭博胡浩沈荣赵志强谢贵林; 关键词：细菌内毒素检查动态浊度法肺炎球菌结合疫苗

TaqMan MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA方法的适用性验证及应用: 2014年; 目的对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行适用性验证及应用。方法对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行特异性、灵敏度、精密性、准确性验证,并应用该方法检测3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液、纯化液和原液中Vero细胞残余DNA含量,计算Vero细胞残余DNA去除率。结果 Taq Man MGB探针实时定量PCR能够特异性扩增Vero细胞基因组DNA长串连重复序列;DNA浓度在10-1~10-6 ng/μl范围内标准曲线线性良好,相关系数为0.996,扩增效率为93.54%;检测灵敏度为10-6 ng/μl,高于斑点杂交法;检测高（10-2 ng/μl）、中（10-4 ng/μl）、低（10-6 ng/μl）浓度阳性对照DNA模板的试验内变异系数（CV）为0.145%~3.110%,试验间CV为0.624%~2.359%;检测不同浓度阳性对照DNA的回收率在101.5%~109.4%之间,均在定量方法可接受的回收率范围内;在斑点杂交检测灵敏度范围内,同一样品采用Taq Man MGB探针实时定量PCR法与斑点杂交法半定量检测的结果吻合。3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液纯化后可有效去除Vero细胞残余DNA,总去除率约为100%。结论 Taq Man探针实时定量PCR法特异性、精密性、准确性良好,灵敏度高,可作为斑点杂交法的替代方法,用于实验室内部的质量控制。; 刘宇王潇潇宋冬梅温智恒鲁卫卫陈蕾李秀玲; 关键词：TAQ 斑点杂交 VERO细胞残余DNA

乙型脑炎减毒活疫苗病毒群体的异质性分析被引量：2: 2015年; 目的通过观察疫苗病毒群体中病毒个体的遗传和生物学特征，分析SA14-14—2株乙型脑炎减毒活疫苗病毒的均一性，为疫苗病毒的遗传稳定性提供实验证据。方法对3批疫苗病毒连续进行3次蚀斑纯化后，各挑选8个蚀斑纯化株，扩大培养一代。比较24个病毒纯化株的包膜（envelope，E）蛋白基因序列、单斑培养病毒滴度以及蚀斑特征。结果24个纯化株中共有6个病毒株（25％）的E蛋白核苷酸发生变化，其中2株（8．3％）的核苷酸变异导致其编码氨基酸发生改变，这些变异占总核苷酸变异数的28．6％。动物实验表明，这2个纯化株没有引起小鼠神经毒力变化。在所有24个纯化株中，我国2010年版药典规定的影响疫苗病毒遗传稳定性的8个E蛋白关键位点的氨基酸均未发生改变。24个纯化株病毒的蚀斑大小和形态以及单斑培养滴度均无明显差异。结论疫苗病毒具有典型的准种群体多样性特征，但在群体病毒中未检测到E蛋白氨基酸位点为野生型病毒位点的个体病毒，因此，疫苗病毒具有很好的减毒群体特征和遗传稳定性。; 杨会强汪伟刘莉娜何婷曾献武; 关键词：脑炎病毒遗传异质性

铝佐剂类型及吸附率对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响被引量：6: 2015年; 目的研究铝佐剂类型及吸附能力对吸附无细胞百白破联合疫苗免疫原性的影响,筛选最佳佐剂。方法用磷酸铝(AP)、不同浓度磷酸盐处理的氢氧化铝(PTAH)以及氢氧化铝(AH)佐剂吸附百白破抗原,检测不同佐剂对各抗原的吸附率。制备不同佐剂类型和吸附率的制剂,腹腔免疫NIH小鼠,ELISA法测定免疫后各组小鼠血清抗体滴度。结果百日咳丝状血凝素(FHA)在所有佐剂中吸附率≥95%,百日咳类毒素(PT)、百日咳溶血素(PRN)、精制白喉类毒素(DT)和破伤风类毒素(TT)则随着铝佐剂中磷酸根增多吸附率降低。动物实验产生PT抗体水平大小关系:AP/AH>PTAH/无佐剂组;产生FHA抗体水平大小关系:AP/PTAH-3/AH>PTAH-2/PTAH-3>无佐剂组;产生PRN抗体水平大小关系:PTAH/AP/AH>无佐剂组;产生DT抗体水平大小关系:AP>PTAH>AH>无佐剂组;产生TT抗体水平大小关系:PTAH>AH/AP/无佐剂组。结论铝佐剂吸附力不影响抗原(DT除外)免疫原性,磷酸铝更适合作吸附无细胞百白破联合疫苗的佐剂。; 韩露朱涛邵忠琦司伟雪; 关键词：铝佐剂百白破疫苗吸附率免疫原性

肠道病毒71型灭活疫苗的小鼠细胞免疫效果被引量：5: 2014年; 目的评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠的细胞免疫效果。方法分别以不同剂量(1、2.5、5、10μg/ml,均含铝佐剂1 mg/ml)、不同剂型(含铝佐剂1 mg/ml或不含铝佐剂)、不同免疫剂次(单次免疫或加强免疫)EV71灭活疫苗经腹腔免疫小鼠,0.5 ml/只,均设铝佐剂对照组(仅注射铝佐剂1 mg/ml)。采用经典小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)培养方法制备正常小鼠DC,瑞氏染色法检测细胞形态,流式细胞术分析其表型及纯度;免疫磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离小鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞,流式细胞术检测细胞纯度。ELISPOT法检测各组免疫小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ的水平;细胞因子试剂盒检测小鼠淋巴细胞培养上清及小鼠血清中细胞因子的水平。结果 DC形态不规则,表面树枝状突起形态不同,细胞核较大且不规则;DC纯度为(81.39±9.24)%,可高水平表达MHⅡ(I-A/I-E)类分子,中度表达CD86和CD40。CD4+、CD8+T细胞纯度分别为95.27%和94.08%。随着疫苗免疫剂量的增加,CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC显著增加,5μg/ml疫苗组达最大值,且明显高于其他组(P均<0.05);5μg/ml疫苗组淋巴细胞培养上清中IFNγ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-13、IL-5、TNF-α含量明显高于其他组(P<0.05);1、2.5、5μg/ml疫苗组血清中IL-10含量明显高于铝佐剂对照组(P<0.05),1μg/ml疫苗组明显低于2.5及5μg/ml疫苗组(P<0.05)。含铝佐剂疫苗组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平及血清中IL-10含量均明显高于无铝佐剂疫苗组(P均<0.05)。加强免疫组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平、血清中IL-10含量均明显高于单次免疫组(P; 鲁卫卫吴蕴怡郝春生宋冬梅马淑花刘宇陈蕾李秀玲; 关键词：肠道病毒71型灭活疫苗细胞免疫

流感病毒聚合酶结构功能及其作为抗病毒靶点研究进展: 2014年; 流感病毒RNA聚合酶是由PB2,PB1,PA三个亚基组成的蛋白质复合物,分别由流感基因片段1,2,3编码。在流感病毒基因组RNA复制,病毒mRNA转录以及维持病毒生命周期中发挥着重要作用。近年来随着对其深入研究,为抗流感病毒药物的研制奠定了基础。本文主要介绍了RNA聚合酶各个亚基的结构、功能,亚基间相互作用以及RNA酶抑制剂的研究进展。; 李贝贝周琳婷吴金妍; 关键词：流感病毒 RNA聚合酶

登革病毒及登革热疫苗研究进展被引量：1: 2012年; 登革病毒是引起人类疾病最重要的虫媒病毒，其感染可导致登革热、登革出血热、登革休克综合征，甚至危及患者生命。近年来，登革病毒的感染地域不断扩大，越来越多的国家和地区出现登革热流行或暴发，给公共卫生事业造成了很大的经济负担，对全球人类健康构成了极大威胁。为了加快安全有效的登革热疫苗的研发，此文就登革病毒结构、流行病学、致病机制、动物模型及疫苗的研究进展进行综述。; 李玉华; 关键词：登革热病毒登革热疫苗登革热登革出血热登革休克综合征

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗免疫原性研究被引量：2: 2015年; 目的:评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliomyelitis vaccine,s IPV)的免疫原性。方法:将130只大鼠随机分成13组,分别为无佐剂s IPV原倍(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型抗原含量为:10 DU/50 DU/30 DU)、3倍、9倍、27倍稀释抗原剂量组、含佐剂s IPV原倍(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型抗原含量为:10 DU/50 DU/30 DU)、3倍、9倍、27倍稀释抗原剂量组、野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(Conventional inactivated poliomyelitis vaccine,c IPV)原倍(Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型抗原含量为:40 DU/8 DU/32 DU)、3倍、9倍、27倍稀释抗原剂量组和阴性对照组。每组10只,腿部肌内注射,0.5 m L·只-1,免疫两剂,免疫间隔时间为21 d。免疫前、第1剂免疫后21 d眼眶采血、第2剂免疫后21 d心脏穿刺采血,分离血清,采用微量细胞病变抑制法测定血清中抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型中和抗体效价,计算无佐剂s IPV和含佐剂s IPV ED50值、并与c IPV进行比较。结果:免疫1剂后,无佐剂s IPV、含佐剂s IPV和c IPV组Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型在不同稀释度时,除含佐剂s IPVⅠ型均为100%阳转率,其他几组均随着抗原稀释度的增加中和抗体的阳转率梯度下降。Ⅰ型无佐剂、含佐剂s IPV ED50分别是c IPV的0.02,0.004倍;Ⅱ型无佐剂、含佐剂s IPV ED50分别是c IPV的26.83,5.55倍;Ⅲ型无佐剂、含佐剂s IPV分别是c IPV的0.24,0.13倍。Ⅰ型含佐剂s IPV组1剂免疫后各剂量组大鼠血清中和抗体显著高于无佐剂s IPV相应剂量组(P<0.05),免疫两剂后,略高于无佐剂组,但没有统计学差异。Ⅱ型含佐剂s IPV各剂量组1剂免疫后大鼠血清中和抗体略高于无佐剂相应剂量组,但仅16.7 DU组存在统计学差异(P<0.05),免疫两剂后,仅50 DU组明显高于无佐剂组(P<0.05)。Ⅲ型含佐剂s IPV各剂量组1剂免疫后大鼠血清中和抗体略高于无佐剂相应剂量组,但均无统计学差异;免疫两剂后,30 DU组和1.1 DU组明显高于相应剂量组(P<0.05)。结论:s IPV免疫原性较好,其中Ⅰ型免疫�; 宋冬梅张中洋鲁卫卫温智恒郭会杰张越李秀玲; 关键词：中和抗体免疫原性

13价肺炎球菌结合疫苗在老年人群中的免疫原性研究被引量：3: 2017年; 老年人群对肺炎球菌疫苗的免疫应答不同于婴幼儿,在对老年人群肺炎球菌疫苗免疫原性的研究中,临床试验设计和判定标准均有所不同。现将美国13价肺炎球菌结合疫苗(13-valent conjugated vaccine,PCV13)在老年人群免疫原性研究的临床资料进行归纳和分析,为国内肺炎球菌疫苗在老年人群中的临床研究提供参考。; 乔瑞洁沈荣; 关键词：肺炎链球菌肺炎球菌结合疫苗老年人群免疫原性

人肺炎球菌参考血清09CS中11个血清型抗荚膜多糖的抗体IgG含量的定值被引量：3: 2014年; 对人肺炎球菌参考血清09CS中11个肺炎球菌血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)的抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值。方法用WHO推荐的标准检测人血清中抗肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法,以国际标准血清89SF为标准,对此11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值;以暂定的09CS的定值为标准检测12份WHO校正血清、16份兰州生物制品研究所有限责任公司(LIBP)质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。结果以09CS的定值为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的11个血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P<0.05);以09CS的定值为标准检测的89SF的11个血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差均<20%。结论实验完成了人肺炎球菌参考血清09CS中的11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值。; 王欣茹刘方蕾于旭博范锋锋刘爱萍吴兵胡浩王晶赵志强谢贵林; 关键词：定值酶联免疫吸附试验

国家高技术研究发展计划(2012AA02A401)

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