教育部科学技术研究重点项目(208100)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：华南基因组研究中心南方医科大学更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目更多>>
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- Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体并对其进行鉴定。方法以正常人外周血DNA为模板,PCR扩增得到目的基因。通过HpaⅠ/XhoⅠ双酶切及其后的连接将其插入Lentilox3.7(pLL-3.7)质粒中。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLL-3.7-mir-196b、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三质粒系统共感染HEK-293FT细胞,包装生产慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染HEK293FT细胞,以检测病毒滴度,并用实时定量PCR检测慢病毒感染后Hsa-mir-196b的表达变化。结果 PCR及测序结果证明成功构建了pLL-3.7-mir-196b重组质粒。所得慢病毒上清滴度为(7.2±1.1)×107TU/ml。感染慢病毒的239FT细胞中,Hsa-mir-196b的表达量相对于未感染细胞提高了约24倍。结论成功构建Hsa-mir-196b慢病毒表达载体。
- 向星宇马文丽宋艳斌姜茂竹王妮莎郑文岭
- 关键词：慢病毒肿瘤
- hsa-miR-30e的克隆及其慢病毒表达载体的构建
- 2010年
- 目的克隆hsa-miR-30e并构建其慢病毒表达载体。方法 PCR扩增hsa-miR-30e的前体序列,克隆于慢病毒载体pll3.7,转染包装细胞293FT细胞,收获病毒颗粒,荧光定量PCR检测hsa-miR-30e的表达。结果经双酶切及测序鉴定,hsa-miR-30e的慢病毒表达载体构建成功,倒置荧光显微镜下观察转染后293FT细胞发出绿色荧光。结论成功构建hsa-miR-30e的慢病毒表达载体,为进一步研究hsa-miR-30e的生物学功能奠定了基础。
- 姜茂竹马文丽宋艳斌向星宇韩晋云郑文岭
- 关键词：慢病毒表达载体肿瘤
