国家自然科学基金(30973030)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
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- 急性脊髓损伤后线粒体的功能变化被引量：6
- 2011年
- 线粒体是对各种损伤最为敏感的细胞器之一;细胞活动所需绝大多数的能量都是由线粒体氧化磷酸化提供。外伤后线粒体功能的改变直接影响到神经细胞的功能和存活。因此,了解继发性脊髓损伤中线粒体的功能变化的分子机制,对于脊髓损伤的治疗和预后具有重要意义。文中从线粒体能量代谢、活性氧生成、钙超载等角度对线粒体损伤机制进行综述。
- 程刚张宁蔡卫华
- 关键词：急性脊髓损伤线粒体活性氧钙超载
- 大鼠脊髓损伤后线粒体代谢功能和还原型谷胱甘肽水平的变化
- 2011年
- 目的探讨大鼠脊髓损伤后伤段脊髓线粒体代谢功能和还原型谷胱甘肽（GSH）水平的变化。方法取48只SD大鼠，随机分为假手术组（对照组）和脊髓损伤组（SCI组），每组又分为处理后6、12、24h3个时相组，每个时相组8只，分别提取伤段脊髓的线粒体，测定线粒体呼吸功能【呼吸Ⅲ态（R3）、呼吸Ⅳ态（R4）、呼吸控制率（RCR）及磷氧比（P／O）值】、三磷酸腺苷酶（ATPase）活性（Na＋、K＋-ATP酶和Ca2＋、Mg2＋-ATP酶活性）及GSH的变化。结果SCI组在伤后6、12、24h伤段脊髓线粒体的R3、RCR及P／O均显著低于对照组，R4显著高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。SCI组Na＋、K＋-ATP酶和Ca2＋、Mg2＋ATP酶较对照组明显降低，伤后6h急剧下降，12h后稍有代偿性升高，24h后又下降，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。GSH水平SCI组与对照组相比明显降低，以伤后12h最为明显，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论脊髓损伤后伤段脊髓线粒体的呼吸功能、ATPase酶活性及GSH水平明显下降，说明脊髓损伤后线粒体能量代谢功能和自由基清除能力均受到明显损害。
- 张宁程刚凡进殷国勇方加虎李青青周炜刘永明蔡卫华
- 关键词：脊髓损伤线粒体谷胱甘肽三磷酸腺苷
- 依达拉奉通过c—jun氨基端激酶通路和线粒体信号途径对H2O2诱导神经元凋亡的保护作用被引量：2
- 2012年
- 目的观察依达拉奉通过c-jun氨基端激酶（JNK）通路和线粒体信号途径对神经元凋亡的保护作用。方法采用新生1dSD乳大鼠体外培养的大脑皮层神经元被随机分为空白对照组、氧化应激组（加入终质量浓度为500tzmol／LH2O3在37℃条件下进行）和依达拉奉组（提前30min加入终质量浓度为300μmol／L的依达拉奉后加入终质量浓度为500tunol／LH2O2，在37℃条件下进行）。免疫荧光显微镜观察神经元形态、Westernblot法检测JNK、P—JNK相关蛋白表达、检测细胞色素c（Cyt—C）和线粒体形态的变化。结果依达拉奉组中0．5h和2．0h两个样本的P-JNK／JNK比值分别为0．057和0．172，相对于氧化应激组明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。在Cyt—C的检测中，依达拉奉组中0．5h和2．0h两个样本的cyt—C分布较同时间点的氧化应激组集中，且电镜中也可见依达拉奉组（0．5h．2．0h）中线粒体损伤比同时间点的氧化应激组轻。结论H2O2诱导的氧化应激反应可能通过JNK通路和线粒体信号途径诱发神经元细胞的凋亡，在凋亡早期使用依达拉奉可能通过JNK通路和线粒体信号途径抑制神经元凋亡。
- 程刚张宁蔡卫华凡进殷国勇方家虎李青青周炜
- 关键词：神经元脱噬作用依达拉奉
- 内源性甲状旁腺激素对体外诱导培养破骨细胞的影响
- 2014年
- 目的:研究内源性甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)对于体外诱导培养破骨细胞的影响。方法 :取8周龄PTH+/+和PTH-/-小鼠各16只,分离培养小鼠股骨全骨髓细胞,在含有10 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的培养皿中培养24 h,收集未贴壁细胞,即得破骨细胞前体,利用M-CSF和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)刺激形成破骨细胞。根据加入不同RANKL浓度分为低浓度(50 ng/ml)和高浓度(100 ng/ml)组。于诱导第6天、第9天进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察破骨细胞形态并计数40或100倍视野内TRAP阳性细胞数量。结果:M-CSF和RANKL能够在体外诱导小鼠全骨髓细胞形成TRAP阳性的破骨细胞。诱导第9天进行TRAP染色,同一个视野中形成的TRAP阳性破骨细胞数量较诱导第6天减少,但是破骨细胞体积和细胞核数量增多。相同浓度RANKL刺激下,PTH+/+与PTH-/-组破骨细胞数量未见明显统计学差异。不同浓度RANKL刺激下,高浓度组破骨细胞数量明显多于低浓度组细胞数量。结论:内源性PTH对于体外M-CSF和RANKL诱导骨髓培养的破骨细胞数量没有影响,与低浓度组相比,高浓度RANKL能够进一步促进破骨细胞数量增加。
- 孙鹏唐鹏宇凡进张建伟张宁
- 关键词：甲状旁腺激素破骨细胞M-CSFRANKL
- 依达拉奉对过氧化氢刺激神经细胞的保护作用及机制研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨依达拉奉对神经元的保护作用及其保护机制。方法提取胎龄16～18d的孕大鼠皮层组织，消化、离心后培养，鉴定神经元细胞纯度90％以上。实验共分为3组：空白对照组、过氧化氢（H，O：）处理组（300ixmoL／L刺激0．5、2、6及12h），依达拉奉预处理组（刺激前预防性应用500Ixrno]／L保护30min，分组同H：O：处理组）。电镜观察线粒体形态的变化，流式细胞仪检测凋亡细胞的比率，免疫印迹及免疫沉淀检测凋亡关键蛋白的活性及蛋白间的关系。结果相比依达拉奉预处理组，H：O：处理组相同时间点的线粒体明显呈水泡样肿胀变及空泡样变。H：O：处理组刺激后0．5、2、6及12h细胞凋亡比率分别为14．40％±1．23％、45．50％±2．81％、56．40％±3．53％、62．50％±4．23％；与空白对照组比较神经元凋亡明显增加（F=274．8，P〈0．叭）。依达拉奉预处理组相应时间点的细胞凋亡比率分别为0．90％±0．07％、1．10％±0．08％、3．50％±1．90％、12．60％±1．10％；与H：O：处理组比较明显降低（F=362．7，P〈0．01）。刺激0．5h后，磷酸化c．Jun氨基端激酶（p-JNK）、细胞质中细胞色素c、线粒体膜上B细胞白血病一淋巴瘤一2相关x蛋白（BAX）表达水平开始明显升高，直至12h时达到顶峰；与此同时，细胞质中B细胞白血病一淋巴瘤一2关联死亡蛋白（BAD）、磷酸化BAD、BAX和14．3．3水平表现为持续性降低，而这些改变在依达拉奉预处理组均被抑制。结论作为一种自由基清除剂，依达拉奉可能通过抑制JNK的活性、抑制BAD与14—3—3分离及抑制BAX选择性地由细胞质向线粒体移位来保护神经细胞。
- 龙浩张宁凡进李青青李益明唐健程刚殷国勇蔡卫华
- 关键词：肿瘤蛋白质类自由基清除剂线粒体
- 依达拉奉通过抑制内质网应激途径对谷氨酸刺激神经元损伤的保护作用被引量：2
- 2013年
- 目的研究依达拉奉通过抑制内质网应激(ERS)途径对氧化应激损伤神经元的保护作用。方法神经元原代培养鉴定后分为谷氨酸刺激组(A组)、依达拉奉预处理组(B组)和空白对照组(C组)。流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光观察半胱天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)表达的变化,Western blot检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和Caspase-12的蛋白表达。结果与C组相比,A组细胞凋亡率、PERK及Caspase-12的表达均明显增加(P<0.05);而B组能显著抑制A组各观察指标的增加过程(P<0.05)。结论依达拉奉可能通过抑制ERS途径降低神经元的凋亡,从而对神经元起保护作用。
- 龙浩凡进陈琦唐健蔡卫华张宁
- 关键词：依达拉奉内质网应激
