国家科技重大专项(2008ZX1004-015)
- 作品数：5 被引量：32H指数：2
- 相关作者：陈泽良王玉飞黄留玉汪舟佳杜昕颖更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学西南大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 利用T载体克隆快速构建布鲁氏菌缺失突变株被引量：17
- 2010年
- 目的:建立一种基于T载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法,提高布鲁氏菌突变株构建的效率。方法:采用融合PCR的方法,将待缺失基因上下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合起来,构建突变盒,然后将突变盒直接与T载体连接,构建突变载体,将载体转入布鲁氏菌感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得布鲁氏菌的缺失突变株。结果:结合融合PCR和T载体快速克隆,能够在48h之内构建好突变载体,与传统的酶切连接相比,效率高、周期短。结论:基于T载体快速克隆是一种非常高效的构建突变株的方法,为布鲁氏菌突变株的构建提供了一种新方法。
- 白耀霞杨毅王玉飞王同坤于爽陈燕芬付思美黄留玉田晋红陈泽良
- 关键词：布鲁氏菌T载体
- 利用Vaxign软件预测幽门螺杆菌疫苗候选抗原
- 目的利用Vaxign软件预测和分析幽门螺杆菌潜在的疫苗候选抗原。方法以网站提供的基因组数据为基础,选择参考菌株为幽门螺杆菌26695和J99用Vaxign预测可能的疫苗候选抗原。然后对代表性的蛋白进行系统的生物信息学分析...
- 王艳春陶好霞刘纯杰
- 关键词：幽门螺杆菌疫苗候选抗原
- 文献传递
- omp25c基因对马耳他布鲁菌疫苗株M5的毒力及免疫保护性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:初步评价马耳他布鲁菌M5疫苗株omp25c基因对其毒力及免疫保护性的影响。方法:利用同源重组的方法,用卡那霉素抗性基因替换M5的omp25c(BMEI1829)基因,得到缺失突变株M5Δomp25c;分别用M5Δomp25c和M5免疫小鼠,在免疫后不同时间点处死小鼠,通过脾脏细菌计数分析缺失突变株在小鼠体内的毒力,通过检测IgG和IFN-γ的水平分析缺失突变株在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答能力,通过攻毒实验评价突变株的免疫保护效果。结果:与M5株相比,M5Δomp25c在小鼠脾脏内的存活时间较短,在第4周时未能检出;M5Δomp25c免疫小鼠诱导产生的IgG水平在第4周达到最高,第6周开始下降;M5Δomp25c免疫小鼠诱导分泌的IFN-γ水平在第4周达到最高为790pg/mL,第6周时浓度降至530pg/mL,整体趋势显著低于阳性对照组;接种了M5Δomp25c的小鼠用布鲁菌强毒株16M攻毒后,免疫保护效果也下降。结论:缺失omp25c的突变株毒力减弱,诱导的体液和细胞免疫水平及免疫保护效果下降,说明omp25c基因是马耳他布鲁菌M5疫苗株的毒力相关基因,对疫苗株M5的免疫应答和免疫保护效果有一定的影响。
- 曲勍王玉飞乔凤钟志军徐杰杜昕颖汪舟佳赵瑾黄留玉于雅琴陈泽良
- 关键词：毒力免疫保护性
- 羊布鲁氏菌的分泌蛋白质组分析被引量：12
- 2009年
- 分泌蛋白是指那些分泌到细胞外的蛋白质。布鲁氏菌的分泌蛋白可能介导了病原与宿主之间的相互作用,在布鲁氏菌的毒力方面发挥一定的作用,但是研究方法的局限性限制了分泌蛋白的研究。本文报道了利用蛋白质组的方法来寻找羊布鲁氏菌的分泌蛋白。首先用TCA-丙酮法提取布鲁氏菌培养上清中的分泌蛋白,双向电泳进行分离,然后用质谱来鉴定这些蛋白,最终鉴定到40种蛋白。通过生物信息学分析,发现这些蛋白主要是ABC转运系统的底物结合蛋白、外膜蛋白和热休克蛋白。这些蛋白的识别不仅有助于对布鲁氏菌致病机制的理解,而且也可为布鲁氏菌病的疫苗研制提供靶标蛋白。
- 王玉飞曲勍乔凤钟志军杜昕颖汪舟佳陈泽良黄留玉
- 关键词：布鲁氏菌分泌蛋白双向电泳质谱
- 布鲁氏菌B.ovis virB缺失株的构建及胞内环境适应性分析被引量：2
- 2012年
- 目的:利用基于T载体快速克隆构建布鲁氏菌突变株的方法,构建缺失VirB启动子区域的绵羊附睾布鲁氏菌株,为绵羊附睾种布鲁氏菌IV型分泌系统功能研究奠定基础。方法:运用同源重组的原理,用Kana抗性基因替换编码分泌系统VirB的启动子区域,从而获得virB的突变株。通过RT-PCR对突变株virB基因的转录进行了分析;分析突变株和野生株在体外模拟的胞内环境下的生存能力,观察virB对B.ovis胞内生存环境适应的影响。结果:成功构建了B.ovis的缺失virB启动子区的突变株,突变株中virB基因的表达抑制。与野生株相比,突变株对胞内环境的适应力发生了改变。结论:利用T载体克隆和抗性替换的方法成功构建了B.ovis的virB的突变株,为B.ovis的IV型分泌系统的功能研究奠定了基础。
- 高光俊柯跃华徐杰王丽萍张正芳李卓琳王璐璐郭英飞王玉飞徐兴然陈泽良
- 羊布鲁氏菌非编码小RNA分子BSR-2的预测与鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用RT-PCR和RACE等方法对生物信息学预测的羊布鲁氏菌非编码小RNA(smallnon-codingRNA,sRNA)BSR-2进行了实验鉴定,并通过分析BSR-2在胞内生存缺陷株中的转录情况以及预测BSR-2的靶标基因对BSR-2的功能进行初步探讨.RT-PCR结果表明,BSR-2在羊布鲁氏菌的总RNA中存在转录本,而且在不同的应激条件下转录水平不同.RACE结果表明,BSR-2长224nt,位于Ⅱ号染色体的BMEII0742和BMEII0743之间的基因间区.进一步的实验结果表明,BSR-2可能与布鲁氏菌的胞内生存能力相关.
- 王同坤王立贵陈泽良杜昕颖汪舟佳黄留玉刘波王玉飞
- 关键词：布鲁氏菌靶基因
