国家自然科学基金(30960427)
- 作品数：13 被引量：44H指数：5
- 相关作者：刘剑仑杨华伟韦薇韩璐璐蒋奕更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院广西医科大学明尼苏达大学更多>>
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- 高与低表达RSK4基因人乳腺癌细胞株的筛选及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨核糖体S6激酶4(RSK4)抑癌基因在人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中的表达,并筛选出高和低表达RSK4基因的乳腺癌细胞。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法从mRNA和蛋白水平检测RSK4在MDA-MB-231、T47D、Bcap-37和MCF-7 4种乳腺癌细胞株中的表达。结果:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、T47D、Bcap37和MCF-7中均有RSK4基因表达,其中,MCF-7细胞RSK4表达水平最高,为表达量最低的MDA-MB-231细胞的2.9倍,MCF-7细胞RSK4蛋白表达水平也最高,与其他3种细胞株相比,差异有统计学意义,P<0.001。RT-PCR法和蛋白质印迹法检测结果一致,具有高度相关性,r=0.766,P<0.001。结论:人乳腺癌细胞株MCF-7为高表达RSK4基因的细胞,MDA-MB-231细胞为低表达RSK4基因的细胞,两者均可作为人乳腺癌细胞中研究RSK4基因的实验材料。
- 张晓丽刘剑仑杨华伟韦薇蒋奕
- 关键词：乳腺肿瘤基因表达
- 核糖体S6蛋白激酶4对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学特性的影响
- 2013年
- 目的 观察核糖体S6蛋白激酶4基因（RSK4）过表达对MDA-MB-231细胞的生物学特性的影响.方法 将细胞分为空白组、实验组和阴性对照组,采用病毒转染法,利用细胞集落实验、细胞计数试剂盒（CCK-8）法、细胞划痕实验、Transwell小室实验和细胞黏附实验探讨RSK4对MDA-MB-231细胞生物学特性的影响.结果 7d后3组细胞集落形成率分别为（21.280±0.114）％、（9.150±0.120）％、（19.080±0.108）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.CCK-8实验显示,实验组24、48、72和96h的吸光度（A值）分别为0.1790±0.0044、0.2090±0.0218、0.2230±0.0117、0.2680±0.0274.细胞划痕实验显示：实验组0、12、24、48 h细胞迁移距离分别是0、（0.9200±0.0735）、（1.4600±0.0510）、（2.0000±0.0316） mm.Transwell小室显示,实验组48 h细胞迁移实验中滤过膜细胞数为（273.000±2.2930）个；细胞侵袭实验中滤过膜细胞数为（89.000±1.208）个,以上均显示：实验组比空白对照组和阴性对照组降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.而细胞黏附实验结果显示：实验组3h和6h的细胞黏附百分率分别为（0.0700±0.0037）％、（0.1920±0.0133）％,比空白对照组和阴性对照组升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 RSK4过表达可抑制MDA-MB-231细胞的生物学特性.
- 李德全韩璐璐刘剑仑韦薇
- 关键词：乳腺癌生物学特性
- 核糖体S6蛋白激酶4在乳腺癌中的异常表达及临床意义被引量：8
- 2011年
- 目的研究核糖体s6蛋白激酶4（RSK-4）在乳腺癌中的表达及意义，探讨RSK-4在乳腺癌发生发展中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组织化学染色法，检测RSK-4mRNA和蛋白在56例乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织和20例乳腺良性病变组织中的表达。结果RSK-4mRNA在乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织中的阳性表达率分别为48．2％、76．8％和75．0％，RSK-4mRNA在乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织（P〈0．05）。RSK-4mRNA在乳腺癌组织中的表达与肿瘤大小和临床分期有关，肿瘤越大、临床分期越晚，RSK-4mRNA的表达率越低（P〈0．05）。RSK-4蛋白在乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织中的阳性表达率分别为39．3％、71．4％和75．0％，RSK-4蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁正常乳腺组织和乳腺良性病变组织（P〈0．05）。RSK-4蛋白在乳腺癌组织中的表达与肿瘤大小、临床分期以及有无淋巴结转移有关，肿瘤越大、临床分期越晚以及伴淋巴结转移者RSK-4蛋白的表达率低（P〈0．05）。56例乳腺癌组织中，RSK-4mRNA和蛋白的表达一致率为73．2％，二者的表达显著相关（χ^2=10．254，P〈0．05）。结论RSK-4可能足乳腺癌的抑癌基因，其表达降低或缺失可能引起乳腺癌的发生和发展。
- 刘剑仑杨华伟陈祖舜蒋奕
- 关键词：乳腺肿瘤逆转录聚合酶链反应免疫组织化学
- RNA干扰RSK4基因表达对裸鼠移植瘤生长与转移影响观察被引量：5
- 2013年
- 目的:应用慢病毒干扰载体(RSK4-RNAi-LV)干扰RSK4基因在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达,研究RSK4基因被干扰后对裸鼠移植瘤生长及转移的影响。方法:将转染了siRNA(RSK4-RNAi-LV)的MCF-7细胞组(实验组)、转染了siRNA(NC-GFP-LV)的MCF-7细胞组(阴性对照组)和未转染的MCF-7细胞组(空白对照组)分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立裸鼠移植瘤模型,观察每组裸鼠移植瘤生长情况;应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测3组移植瘤组织中RSK4mRNA及其蛋白的表达;HE染色观察3组裸鼠内脏转移情况。结果:实验组的移植瘤平均体积为(2 264.08±367.47)mm3,明显大于阴性对照组(843.67±318.13)mm3及空白对照组的(720.45±241.35)mm3差异有统计学意义,F=112.425,P=0.02;实验组瘤体平均体质量为(1.44±0.25)g,明显重于阴性对照组(0.73±0.20)g及空白对照组的(0.70±0.21)g,差异有统计学意义,F=89.54,P=0.01。实验组裸鼠移植瘤肺转移6只,空白对照及阴性对照组各1只。实验组肿瘤组织RSK4mRNA的相对表达量为0.140±0.843,明显低于阴性对照组的1.000±0.000(P=0.008)和空白对照组的0.878±0.689(P=0.005)。实验组、阴性对照组和空白对照组RSK4蛋白的表达量分别为0.138±0.023、0.532±0.032和0.465±0.057,3组间差异有统计学意义,F=73.1,P=0.003;实验组RSK4蛋白表达量明显低于阴性对照组(P=0.006)和空白对照组(P=0.012)。结论:慢病毒干扰MCF-7细胞中RSK4基因表达能促进MCF-7细胞裸鼠移植瘤的生长及转移。
- 朱佳刘剑仑韦薇韩璐璐
- 关键词：RNA干扰MCF-7细胞株移植瘤
- RSK4与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin在乳腺癌裸鼠移植瘤中的相关性研究被引量：4
- 2018年
- 目的分析乳腺癌裸鼠移植瘤中核糖体S6蛋白激酶4(ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin表达的相关性,进一步探讨RSK4在乳腺癌发展中的作用机制。方法将转染si RNA(RSK4-RNAiLV)的MCF-7细胞(实验组)、转染si RNA(NC-GFP-LV)的MCF-7细胞(阴性对照组)和未转染的MCF-7细胞(空白对照组)分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,剥离裸鼠移植瘤;采用免疫组织化学法检测移植瘤标本中增殖因子RSK4、Ki-67、cyclin D1及侵袭因子CXCR4、E-cadherin蛋白的表达。结果实验组RSK4、E-cadherin蛋白的表达水平分别为(3.2±0.5)%、(28.2±0.7)%,明显低于空白对照组的(36.7±3.4)%、(51.7±4.2)%和阴性对照组的(61.1±5.1)%、(49.2±3.8)%,差异有统计学意义(F=56.79,61.89,P<0.05)。实验组Ki-67、cyclin D1、CXCR4蛋白的表达水平分别为(67.8±5.8)%、(61.7±4.6)%、(56.3±3.9)%,明显高于空白对照组的(34.5±1.4)%、(29.7±2.5)%、(30.7±3.1)%和阴性对照组的(29.8±1.9)%、(35.7±4.6)%、(28.5±3.7)%,差异有统计学意义(F=45.24,52.16,61.24,P<0.05)。相关性分析显示,RSK4与Ki-67、cyclin D1、CXCR4表达呈负相关(r=-0.857,-0.826,-0.867,P<0.001),与E-cadherin表达呈正相关(r=0.879,P<0.001)。结论RSK4可能通过调节CXCR4、Ki-67、Cyclin D1和E-cadherin肿瘤相关因子的表达,在乳腺癌在乳腺癌生长及转移过程中发挥作用。
- 王峰峰朱佳杨华伟韦薇蒋奕姬逸男刘剑仑
- 关键词：KI-67CYCLINCXCR4E-CADHERINMCF-7细胞株
- RSK4过表达真核表达载体对人乳腺癌移植瘤体内侵袭和转移的影响被引量：5
- 2012年
- 目的构建稳定过表达RSK4基因的MD-MB-231乳腺癌细胞株，观察过表达RSK4基因对乳腺癌体内成瘤的影响。方法将pcDNA3．1／Neo和pcDNA3．1／Neo—RSK4分别转染进人乳腺癌细胞MD—MB-231，筛选出稳定的细胞株，命名为空载体组（MN10，MN11）和转染组（MR11，MR12）并种植至免疫缺陷小鼠（SCID）皮下组织，建立SCID人乳腺癌MD—MB^31细胞移植瘤模型，种植后6—10周观察移植瘤的生长、侵袭转移的情况。结果筛选出稳定表达的乳腺癌细胞株MR11和MR12和空白对照组MN10和MN11；构建SCID的人乳腺癌移植瘤模型，解剖鼠发现：注射MN10和MN11对照组细胞后6周，SCID鼠均有转移瘤生成10／10，而注射MR11和MR12细胞组后在第6周和7周分别有6／10和7／10鼠成瘤，注射MR11或MR12细胞的鼠在所形成的肿瘤大小和重量上明显小于MNIO和MN11对照组；注射10周后，RSK4高表达的MR11和MR12组有4只小鼠发生内脏转移瘤，而对照组有8只小鼠出现内脏转移瘤，HE染色发现发生在肺的转移灶MN10和MN11组明显多于MR11和MR12组。结论成功构建SCID人乳腺癌MD-MB-231细胞转移瘤模型，较真实模拟人乳腺癌生长过程，证实过表达RSK4基因在体内可抑制乳腺癌生长。
- 杨华伟刘剑仑廖德仲孙源陈祖舜张晓丽
- 关键词：蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶基因表达调控肿瘤转移
- p90核糖体S6蛋白激酶家族与恶性肿瘤被引量：1
- 2013年
- p90核糖体S6蛋白激酶(ribosomal S6 kinase,RSK)为Ras信号转导通路下游途径的重要调控因子,对Ras通路起调控作用。近年发现RSK家族与恶性肿瘤发生、发展密切相关。本文就RSK家族与恶性肿瘤的关系作简要综述。
- 杨华伟刘剑仑
- 关键词：恶性肿瘤
- RSK4对乳腺癌细胞增殖侵袭黏附相关基因表达水平的影响被引量：1
- 2013年
- [目的]探讨核糖体S6蛋白激酶4(ribosomal protein S6 kinase 4 gene,RSK4)基因对乳腺癌细胞Ki-67、cyclin D1、CXCR4、HIF-1α、E-cadherin基因转录影响。[方法]分别构建RSK4干扰载体、过表达载体转染至乳腺癌MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞中,RT-PCR比较实验组和对照组Ki-67、cyclin D1、CXCR4、HIF-1α及E-cadherin mRNA表达水平。[结果]干扰组CXCR4、HIF-1α、cyclin D1及Ki-67mRNA的转录水平分别为2.238±0.0711、1.672±0.0833、1.540±0.0115、1.390±0.0902,与空白对照组、阴性对照组相比均升高,但E-cadherin mRNA的转录水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达组Ki-67、cy-clinD1、CXCR4和HIF-1α转录水平分别是0.603±0.0066、0.460±0.0155、0.424±0.0198、0.205±0.0082,与空白对照组、阴性对照组相比均降低,而E-cadherin mRNA转录水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]RSK4基因表达影响乳腺癌细胞增殖黏附相关基因Ki-67、cyclinD1、CXCR4、HIF-1α和E-cadherin mRNA转录水平。
- 李德全韩璐璐刘剑仑
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤转移细胞黏附
- 调控细胞周期的乳腺癌抑癌基因的研究进展被引量：5
- 2011年
- 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发生、发展是一系列因素共同作用的结果,而抑癌基因在其发生与演进过程中起着重要作用,其中很重要的一部分与调控细胞周期密切相关。本文基于此对几个重要的的乳腺癌抑癌基因作一综述,介绍了它们在细胞周期中的调控机制,对乳腺癌的发生及治疗的影响以及最新的研究进展。
- 韩璐璐刘剑仑
- 关键词：乳腺肿瘤抑癌基因细胞周期
- 慢病毒载体介导shRNA干扰对乳腺癌MCF-7细胞RSK4基因表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的观察慢病毒干扰载体(RSK4-RNAi-LV)转染对低侵袭、低转移潜能的乳腺癌MCF-7细胞中核糖体S6蛋白激酶4(ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4)基因表达的影响。方法设计合成特异性的RSK4 shRNA干扰体RSK4-RNAi-LV,稳定转染至乳腺癌MCF-7细胞中,应用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测RSK4 mRNA及其蛋白的表达情况。结果稳定转染慢病毒干扰载体至乳腺癌细胞后,72h开始检测到GFP荧光表达,90h后GFP荧光表达明显增强,RSK4 mRNA及其蛋白的表达均被明显抑制,抑制率分别为98.2%和80.1%。结论稳定转染RSK4-RNAi-LV可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞中RSK4 mRNA及其蛋白的表达。
- 韩璐璐刘剑仑韦薇
- 关键词：乳腺肿瘤SHRNA干扰慢病毒载体
