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柔嫩艾美耳球虫入侵相关蛋白EtMA1和EtMA2的克隆及序列分析: 2013年; 为筛选柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)候选疫苗分子,注释并克隆E.tenella入侵相关蛋白EtMA1和EtMA2的编码基因,并对其序列结构进行分析。本研究利用生物信息学和比较基因组学技术注释获得EtMA1和EtMA2的编码基因序列,以E.tenella(广东株)裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR的方法扩增获得EtMA1和EtMA2的开放阅读框(ORF)序列。利用在线生物信息学软件分析EtMA1和EtMA2的序列结构及与顶复门其他虫属的进化关系。结果显示,EtMA1和EtMA2ORF全长分别为1 617和1 725bp,分别编码全长为539个氨基酸和575个氨基酸的多肽片段。二者与TgAMA1相似性分别为30%和26%。EtMA1和EtMA2同属于E.tenella顶膜抗原超家族蛋白,可能在虫体对宿主的入侵过程中起着关键作用,这也为防控鸡球虫病提供了新的候选疫苗分子。; 戚南山陈海宁吕敏娜吴彩艳廖申权李娟仝宗喜孙铭飞; 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因克隆

鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验被引量：8: 2013年; 为确定广东韶关地区两个养殖密度较大鸡场病死鸡的患病病原,根据临床症状、剖检病变疑似坏死性肠炎,每场各分离到1株细菌,通过对细菌分离株进行形态培养、生化鉴定、牛乳汹涌发酵试验、PCR种特异性和毒素型鉴定等试验,鉴定2个分离株均为A型产气荚膜梭菌。对分离株进行药敏试验,测定了临床上常用的抗菌药物添加剂对两株产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度(MIC),结果显示恩拉霉素和维吉尼亚霉素对两分离株具有良好的抑菌效果,黄霉素、吉他霉素、硫酸黏杆菌素对个别菌株具有抑菌作用,而那西肽则无明显抑菌作用。研究结果可为鸡坏死性肠炎的临床防控提供参考。; 陈海宁廖申权戚南山李娟吕敏娜孙铭飞吴彩艳; 关键词：产气荚膜梭菌最小抑菌浓度

Prime-boost免疫策略在抗顶复门原虫感染中的应用被引量：2: 2015年; 顶复门原虫对人类健康以及畜牧业生产危害严重,其入侵会激发机体的抵御机制,引起机体促炎反应,进而给机体造成伤害。使用基因工程疫苗可增强机体的体液免疫和细胞免疫,从而阻止虫体入侵。在抗寄生虫感染过程中,免疫策略的选择至关重要,初免-加强(Primeboost)免疫策略可以使疫苗刺激机体产生更强、更持久的体液和细胞免疫反应,其不仅在抗病毒、细菌感染过程中取得长足发展,也在抗寄生虫感染过程中得到广泛应用。; 陈海宁戚南山廖申权吴彩艳李娟吕敏娜仝宗喜孙铭飞; 关键词：PRIME-BOOST 寄生虫感染免疫反应

鸭疫里默菌分离鉴定及药敏试验被引量：1: 2014年; 从疑似鸭传染性浆膜炎的病例中分离获得2株鸭疫里默菌(RA),通过细菌形态观察、生化试验、PCR种特异性鉴定及动物回归试验,确定2个分离株均为RA1型,分别命名为ZQ和YJ株。利用试管2倍稀释法测定了阿莫西林及阿莫西林与舒巴坦复合剂对2株RA的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,对阿莫西林敏感的ZQ株MIC值为0.5μg/mL,而不同比例复合剂的MIC最低值为0.007 25μg/mL,降低了100多倍。对阿莫西林耐药的YJ株的MIC值为640μg/mL,复合剂的抑菌作用明显优于阿莫西林,MIC值降低了320倍,最低值为20μg/mL。舒巴坦可以使RA对阿莫西林恢复敏感性,其MIC值明显降低,显示联合用药具有明显的的优越性。; 吴彩艳邹秀娟戚南山廖申权李娟温列娜吕敏娜孙铭飞; 关键词：药敏试验最小抑菌浓度联合用药

柔嫩艾美耳球虫Sir2基因的注释、克隆与原核表达: 2013年; 沉默信息调节因子2(Sir2)在染色质沉默、基因调控、代谢调节和调节细胞寿命等一系列细胞生物活动过程中起重要作用,近年来被作为抗病原微生物药物靶标成为了研究的热点。本研究应用生物信息学和比较基因组学技术注释获得了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)Sir2的基因序列,以注释的基因序列设计引物,以E.tenella第2代裂殖子cDNA文库为模板,利用PCR扩增获得了EtSir2ORF基因序列;并构建pET43a-EtSir2重组表达载体,进行原核表达。结果显示,EtSir2ORF全长为909bp,编码一段全长为302个氨基酸的多肽片段,该融合蛋白分子质量约为99ku,与预期分子质量一致。; 鄢远会戚南山廖申权李娟吴彩艳吕敏娜孙铭飞杨亮宇; 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因克隆

3株鸡巨型艾美耳球虫抗原性分析: 2014年; 本研究对3株鸡巨型艾美耳球虫（Eimeria maxima）福建株、上海株和广东株进行免疫原性分析,其中广东株属于早熟株.将7日龄雏鸡分别免疫3株E.maxima孢子化卵囊,12 d后分别攻击相同剂量的同源及异源虫株孢子化卵囊,设不免疫攻虫对照组和不免疫不攻虫对照组,17d开始收集粪便直至无卵囊排出为止,每日计数卵囊,计算卵囊相对减少率.结果：雏鸡免疫后以同源虫株攻击,保护率均在98％以上,而雏鸡免疫后以异源虫株攻击,其交叉保护率在40.78％～72.37％之间.提示：E.maxima对同源虫株的保护率明显高于对异源虫株的保护率,说明各分离株间抗原性存在差异.; 吴彩艳孙铭飞戚南山廖申权李娟吕敏娜谢明权; 关键词：巨型艾美耳球虫免疫原性

柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶基因注释、克隆与原核表达被引量：1: 2013年; 二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是催化嘧啶从头合成途径中的关键酶,由于顶复门原虫等低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上的差异,可以作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点。本研究利用电子克隆策略,以疟原虫DHODH氨基酸基因序列为信息探针,搜索球虫基因库(www.sanger.ac.uk/projects/E-tenella/),拼接注释了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)DHODH的基因序列,以E.tenella广东株第2代裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得EtDHODH ORF基因序列。构建重组表达载体pColdⅠ-EtDHODH,进行原核表达。测序结果显示,EtDHODH的基因大小为1 254bp,SDS-PAGE鉴定结果表明,目的蛋白约45ku。本研究重组表达并纯化了EtDHODH基因,为建立以EtDHODH为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础。; 陈佳戚南山廖申权吴彩艳吕敏娜李娟吴玄光孙铭飞; 关键词：柔嫩艾美耳球虫电子克隆原核表达

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广东省农业攻关项目(2012A020100001)