国家自然科学基金(30973062)
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
- 相关作者：康权罗庆迭小红陈聪田雯更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨形成蛋白家族成员2、7对小鼠胚胎肝干细胞分化的体外研究被引量：6
- 2013年
- 目的探讨骨形成蛋白2、7(BMP2、BMP7)对小鼠胚胎肝干细胞(HP14.5)定向诱导分化为肝细胞样细胞的影响。方法将表达BMP2、BMP7、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒作为4个组分别感染HP14.5,诱导其分化,在病毒感染后的第1、4、7天通过检测荧光素酶报告基因读数,在第7天通过细胞免疫荧光染色,观察肝细胞标志物白蛋白(ALB)的表达情况;并在第4、7、10天通过PAS染色、尿素氮合成功能检测,观察诱导后HP14.5向肝细胞方向的分化成熟度。结果 BMP2组、HGF组荧光素酶读数较GFP对照组明显上升;免疫荧光染色显示,诱导7d后BMP2组、HGF组细胞质内表达肝细胞特有的ALB,而GFP对照组几乎无表达;糖原染色可见BMP2组、HGF组胞质存在紫红色颗粒,呈阳性反应;尿素合成功能检测显示BMP2组、HGF组培养液中尿素氮随时间而升高。BMP7组诱导后,细胞免疫荧光染色、荧光素酶活性、PAS染色和尿素合成检测均呈阴性或弱阳性反应。结论 BMP2具有一定的诱导HP14.5向成熟肝细胞分化的作用,并初步具备肝细胞的合成分泌功能,而BMP7对其无诱导作用。
- 陈聪康权罗庆迭小红田雯
- 关键词：骨形态发生蛋白质类重组腺病毒
- 利用均匀磁场提高聚乙烯亚胺-Fe3O4纳米颗粒复合物的磁转染效果
- 2018年
- 首次研究了不同均匀度磁场对磁转染效果的影响。测定了单边Halbach磁体和商品化96孔磁板的磁场均匀度。以化学共沉淀法制备聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)修饰的四氧化三铁(Fe_3O_4)纳米颗粒(PEI-Fe_3O_4),并用透射电子显微镜(TEM)、振动样品磁强计(VSM)、原子力显微镜、琼脂糖凝胶电泳等对其形貌、组成、DNA结合能力等进行表征。用倒置荧光显微镜、流式细胞术观察不同均匀度磁场下人肾上皮细胞(HEK293)对带有绿色荧光蛋白报告基因(GFP)的质粒pDNA(pAdTrackOK)的表达效果,并采用TEM观察PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒进入细胞的过程。结果显示,所选取的两种磁场均匀度相差约100倍。制备的PEI-Fe_3O_4纳米复合物具有超顺磁性,对质粒pDNA(pAdTrack-OK)有较好的复合能力,其最佳结合氮磷比为0.5;流式细胞术显示转染效率为PEI-Fe_3O_4-pDNA+均匀磁场组(77.75%±0.07%)>PEI-Fe_3O_4-pDNA+不均匀磁场组(30.65%±0.49%)>PEI-Fe_3O_4-pDNA不加磁场组(7.90%±0.56%)(p<0.05);PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒能有效被细胞吞噬,且对细胞形态的影响不大。结果表明,当磁场强度一定时,磁场均匀度越高,磁转染效率越高,单边Halbach磁体与磁转染结合可以作为一种提高转染效率的新手段,也可以进一步应用在基因治疗中。
- 谢丽娜罗聪吴嘉敏王昌绚邬均
- 关键词：均匀磁场不均匀磁场
- 两例儿童Dieulafoy病致失血性休克诊治分析被引量：1
- 2018年
- Dieulafoy病是胃肠道血管畸形的一种,血管进肌层缺少逐渐变细的过程,在黏膜下维持恒定的直径,故又称为胃恒径动脉综合征,80%发生于距胃贲门6 cm以内的小弯侧。Dieulafoy病是导致胃肠道出血的罕见致病因素,病死率高达80%,该病多见于成人,儿童罕见[1]。重庆医科大学附属儿童医院近期成功抢救2例儿童Dieulafoy病致失血性休克患儿。
- 史淑君肖程康权
- 关键词：DIEULAFOY病失血性休克胃肠道血管畸形诊治胃肠道出血致病因素
- 骨形态发生蛋白9、6双表达腺病毒载体的构建及其成骨诱导作用被引量：3
- 2013年
- 目的构建双表达骨形态发生蛋白(BMP)9、6重组腺病毒并探讨其对C3H10细胞成骨的影响。方法以单一表达的BMP9或BMP6 AdEasy质粒为模板,PCR自扩增BMP9和BMP6基因序列,先后将其插入穿梭质粒pASG2,获得双表达穿梭质粒pASG2-BMP9、6,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,酶切鉴定成功后,转染至HEK293细胞中包装和扩增得到高滴度双表达腺病毒AdBMP9、6,体外转染C3H10细胞,RT-PCR方法检测BMP9、BMP6 mRNA水平的表达,早期成骨指标碱性磷酸酶染色、晚期指标钙茜素红染色检测其成骨作用。结果成功构建双表达重组腺病毒AdBMP9、6,RT-PCR证实双表达腺病毒能成功转染C3H10细胞,并且转染的C3H10细胞早晚期成骨指标碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色活性较单一表达BMP9或BMP6的腺病毒组均增强。结论双表达重组腺病毒载体AdBMP9、6具有定向诱导C3H10细胞成骨分化的能力,且较单一表达BMP9或BMP6强。
- 迭小红罗庆陈聪罗光金康权
- 关键词：重组腺病毒成骨
- 可降解的非病毒基因载体的研究进展被引量：2
- 2018年
- 选择合适的基因载体是基因治疗成功与否的一个关键环节,合适的基因载体应该具备较高转染效率,较好的组织相容性以及生物安全性等特点。相较于传统的病毒基因载体,非病毒基因载体具有低免疫原性,易于制备以及载药量大等特点,是较为理想的基因载体。而寻求可降解的非病毒基因载体可使其更为安全深入的应用到体内以及临床,意义重大。本研究就对常见的几种可降解的基因载体的转染效果及相关改性做一综述,为研究可降解非病毒基因载体的新方法提供新思路。
- 谢丽娜罗聪王昌绚陈韬毕杨
- 关键词：基因传递可降解非病毒基因载体
- 后路全脊椎切除术治疗儿童脊柱后凸畸形(附10例报告)被引量：5
- 2013年
- 目的总结采用后路全脊椎切除术治疗儿童脊柱后凸畸形的临床经验、技术要点和疗效。方法回顾性分析2010年7月-2011年8月在重庆医科大学附属儿童医院骨科接受后路一期全椎体切除+重建治疗的10例脊柱后凸畸形患儿的病例资料,其中男3例,女7例,年龄6～15岁,平均11岁,术前脊柱后凸Cobb角76°～112°,平均97.8°。2例术前有神经系统症状,Frankel分级C级1例、D级1例。所有患儿均行后路一期全脊椎切除、经椎弓根固定、植骨融合术。结果所有患儿手术顺利,手术时间240～560min,平均373min;出血量550～2200ml,平均1115ml;术后后凸Cobb角10°～43°,平均29.3°,矫正率70.0%;患儿的躯干和双肩失平衡均得到显著改善,腰背部疼痛有明显缓解;术前有神经系统症状的2例患儿术后Frankel分级均恢复到E级。结论后路全脊椎切除+椎弓根钉-棒系统内固定术矫正儿童脊柱后凸畸形安全有效,并可达到稳定的短节段内固定及优良的融合效果。
- 曹光彪李明刘传康康权罗聪郑超杨琼
- 关键词：脊柱后凸儿童植骨融合
- 儿童离体或半离体肝切除自体肝移植术-不可切除性肝脏肿瘤的新治疗方式被引量：2
- 2017年
- 小儿肝脏肿瘤约占儿童肿瘤的0．5％～2．0％，占儿童实体肿瘤的1％～4％，其中75％为恶性，肝母细胞瘤（hepatoblastoma，HB）是儿童最常见的肝脏原发性恶性肿瘤，多发生于婴儿期，且早期诊治率低，发现时已因肿瘤巨大或部位特殊而失去常规手术切除的机会。
- 史淑君康权
- 关键词：肝脏肿瘤儿童肿瘤不可切除性肝移植术半离体原发性恶性肿瘤
- 超顺磁性异烟肼聚乙二醇-聚乳酸共聚物微球制备工艺及体外药物释放研究被引量：4
- 2010年
- 目的:制备超顺磁性异烟肼聚乙二醇-聚乳酸共聚物(Poly(ethylene glycol)-co-poly(d,l-lactide),PELA)微球(SPI-PELA-MS),优化其制备工艺,考察其在振荡磁场影响下的体外释放。方法:用化学共沉淀法合成超顺磁性Fe3O4纳米粒,用复乳溶剂蒸发法制备SPI-PELA-MS。考察均质机转速、内水相与油相体积比、PELA浓度等不同因素对微球的影响,通过正交实验优化制备工艺,并对其粒径分布、形态、和体外释放性质进行了研究。结果:SPI-PELA-MS最优工艺处方为:均质机转速13000r/min、内水相与油相比1∶20、内水相中药物水溶液体积与磁流体体积比1∶2、PELA浓度40mg/ml、超声功率600W、PVA浓度1.5%。在体外释放中,通过外加振荡磁场的影响,能显著提高SPI-PELA-MS中药物的释放。结论:采用复乳溶剂蒸发法可成功制备SPI-PELA-MS,体外释放表明药物具有缓释功能,振荡磁场可以增加体系中药物的释放。
- 周恒黄华罗聪康权
- 关键词：异烟肼
- 重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9对小鼠胚胎肝脏干细胞诱导分化的影响
- 2012年
- 目的探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9(Adv-BMP-9)诱导小鼠胚胎肝干细胞向成熟肝细胞定向分化的影响。方法将已构建的表达BMP-9、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒,分别感染小鼠胚胎肝干细胞,诱导其分化,然后采用半定量PCR、Real-time PCR、细胞免疫荧光、荧光素酶报告基因检测等方法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白18(CK18)等肝细胞标志物的表达。结果半定量及Real-time PCR检测,诱导7 d后的BMP-9组、HGF组AFP的mRNA表达△△Ct值分别为(0.027±0.003)、(0.023±0.002),较GFP对照组(0.103±0.018)显著下降,ALB的mRNA表达△△Ct值分别(0.041±0.005)、(0.031±0.001),较GFP对照组(0.013±0.002)明显升高,CK18的mRNA表达△△Ct值分别(0.094±0.003)、(0.083±0.007),较GFP对照组(0.040±0.008)明显升高(P<0.05);细胞免疫荧光染色,诱导7 d后的细胞胞浆内表达肝细胞特有的ALB、CK18等蛋白,而对照组几乎无表达;荧光素酶报告基因检测,诱导1、4、7 d的BMP-9组、HGF组的ALB表达荧光素酶A值分别[(5 509.35±213.08),(33 198.14±666.39),(50 815.03±1 730.75)]、[(5 539.25±132.62),(31 400.71±2 622.39),(49 088.28±1 868.03)],较GFP对照组(4 732.49±68.22),(9 407.71±487.84),(20 894.83±1 100.54)明显升高(P<0.05)。结论 BMP-9有诱导小鼠胚胎肝脏干细胞向成熟肝细胞样细胞分化的作用,并且BMP-9对小鼠胚胎肝干细胞的诱导分化作用甚至和传统的肝干细胞诱导分化因子HGF相当。
- 陈聪罗庆毕扬陈肯田雯迭小红曹光彪周建武康权
- 关键词：分化重组腺病毒
- 双表达骨形态发生蛋白9、7重组腺病毒载体的构建及其对间充质干细胞C3H10的成骨作用
- 2012年
- 目的构建双表达骨形态发生蛋白(BMP)9、7腺病毒重组体并进行初步成骨鉴定。方法自单一表达的BMP9或BMP7 AdEasy质粒上扩增BMP9和BMP7基因序列,先后定向亚克隆至同一穿梭质粒pASG2,获得双表达穿梭质pASG2-BMP9、7。酶切、PCR鉴定及测序正确后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组获得双表达BMP9、BMP7腺病毒质粒,转染至HEK293细胞中包装和扩增得到高滴度双表达BMP9、BMP7腺病毒,体外转染C3H10细胞,碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色检测其早晚期成骨作用。结果成功构建双表达BMP9、BMP7的腺病毒,RT-PCR证实双表达腺病毒在C3H10细胞中表达,其转染的C3H10细胞早期碱性磷酸酶染色及晚期钙茜素红染色活性较单一表达的BMP7或BMP9腺病毒组增强。结论成功构建双表达BMP9、BMP7的重组腺病毒载体,其重组体具有定向诱导C3H10细胞成骨分化的能力。
- 罗庆陈聪迭小红田雯康权
- 关键词：重组腺病毒成骨
