国家自然科学基金(41074131)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- hper1基因3′端UTR区双荧光素酶报告系统构建
- 2013年
- 目的:构建hper1基因3′端UTR区双荧光素酶报告系统pmiR-RB-REPORTTM-hper1-3′UTR(PMIR-3′UTR),检测其表达,为研究hper1基因的表达调控及microRNA调控靶基因的结合位点提供基础平台。方法:用PCR扩增的方法提取hper1基因3′UTR序列,并连接至pmiR-RB-REPORTTM(PMIR)双荧光素酶报告载体的多克隆位点,测序验证插入序列并转染入A549细胞检测其荧光素酶活性。结果:测序结果表明PMIR-3′UTR的插入序列正确,在转染入A549细胞后其荧光素酶能正常表达。结论:PMIR-3′UTR双荧光素酶报告系统构建成功。
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- SERPINA3K原核表达系统的构建及其表达被引量：1
- 2013年
- 目的:通过构建丝氨酸蛋白酶抑制因子SERPINA3K的原核表达载体,并将其转化到Rosetta-gami2感受态细胞中,表达重组SERPINA3K,从而为对其功能的深入研究奠定了基础。方法:以小鼠MS-1细胞cDNA为模板通过PCR的方法扩增Serpina3k基因的表达全片段,再将其插入到原核表达载体pET-41a中,酶切并测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami2感受态细胞,表达产物用Western blot鉴定。结果:原核表达载体pET-41a-Serpina3k成功构建,可在大肠杆菌Rosetta-gami2中高效表达,得到重组蛋白SERPINA3K,经Western blot鉴定正确。结论:成功构建SERPINA3K原核表达载体且获得表达,为研究SERPINA3K生物学活性及产品开发提供了实验基础。
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- 关键词：原核表达系统
