广东省医学科学技术研究基金(B2007158)
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
- 相关作者：桂耀庭蔡志明郭新秦洁唐爱发更多>>
- 相关机构：北京大学深圳医院汕头大学北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胚胎干细胞H1培养条件的优化被引量：1
- 2008年
- 目的:采用不同培养基和饲养层培养人胚胎干细胞H1,建立适合H1细胞增殖的最佳条件并分析其基本生物学特性。方法:鼠源性饲养层采用ICR品系小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),人源性饲养层采用人胚胎成纤维细胞系(HFF-1)。H1基本培养基配制分别采用传统DMEM/F12和改良培养基Knock-outTM DMEM。实验共分为MEF+DMEM/F12、MEF+K-DMEM、HFF+DMEM/F12、HFF+K-DMEM组。H1基本生物学特性检测采用免疫荧光、RT-PCR、碱性磷酸酶和核型分析。结果:MEF+DMEM/F12组中H1克隆形态规则,不发生分化,增殖速度快;而MEF+K-DMEM组细胞克隆传代后第4日发生分化;HFF+DMEM/F12组和HFF+K-DMEM组细胞传代后第3日就显示出分化趋势,克隆变扁。MEF+DMEM/F12组中H1细胞保持正常核型和基本生物学特性。结论:不同的人胚胎干细胞系最佳培养条件是不同的,建立的MEF+DMEM/F12组培养条件最适合H1细胞增殖。
- 郭新秦洁张键荣唐爱发余振东石敏桂耀庭蔡志明
- 关键词：人胚胎干细胞细胞培养
- 钙离子通道在精子运动中的作用及其临床意义被引量：11
- 2008年
- 作为一种细胞内重要的信使物质,钙离子在精子运动中发挥着重要作用。钙离子对精子运动的调控主要是通过精子质膜上相关的钙离子通道所介导,其中包括电压门控钙离子通道、环核苷酸门控通道、电压门控阳离子通道和瞬时感受器电位家族,这些通道的任何一个环节出现问题均可以导致精子活动力的下降。本文就近年来与精子运动相关的钙离子通道的研究进展进行了简要综述。
- 王勇桂耀庭
- 关键词：钙离子精子运动离子通道
- CatSper基因家族在人和小鼠组织中的表达特征被引量：3
- 2009年
- 目的研究CatSper基因家族在人和小鼠组织中的分布特点。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA与Affymetrix全基因组芯片探针进行杂交,筛选出差异表达基因CatSper基因家族。RT-PCR验证差异表达基因在不同发育阶段的小鼠睾丸组织的表达特征,及其在人和小鼠不同组织中的分布。结果基因芯片分析发现CatSper1、CatSper2和CatSper3在小鼠睾丸的表达呈阶段特异性。RT-PCR结果表明该基因家族在睾丸的表达丰度明显高于其它组织;CatSper1和CatSper4在人体睾丸组织中特异性表达。结论CatSper基因家族在人和小鼠中呈现睾丸特异性表达或高表达,可能在精子发生中发挥重要功能。
- 余州张晓燕刁美玲王勇唐爱发桂耀庭
- 关键词：基因芯片小鼠
- 小鼠胚胎干细胞来源的心肌细胞系的建立
- 2009年
- 目的建立模拟细胞微环境、促进细胞分化的三维培养体系,以体外诱导和培养小鼠胚胎干细胞（mES-D3）来源的心肌细胞。方法将mES细胞通过悬浮培养获得拟胚体（EBs）后转入Matrigel^TM Matrix3D培养体系中培养。用形态学观察计数收缩集落的数量和频率;用免疫组织化学和RT-PCR检测心肌细胞分化相关基因的表达。结果在MatrigelTM中培养5 d左右,可观察到自发节律收缩的EBs,频率约为40~50次/min;继续培养3 d左右,频率约为80-90次/min;到45 d左右大部分集落最终收缩。分化为心肌细胞所表达的特异性蛋白cTnT、Desmin和Actin表达呈阳性,并表达心肌特异性基因cTnT、NKX2E、GATA-4和MLC-2v。结论mES细胞来源的EBs在MatrigelTM培养体系中能够分化为心肌细胞,籍此我们建立了一株细胞系。
- 秦洁薛兆英郭新桂耀庭余振东蔡志明
- 人胚胎干细胞表达生殖细胞分化相关基因的研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨人胚胎干细胞(hES)系H1生殖细胞分化相关基因的表达。方法免疫荧光、碱性磷酸酶检测和核型分析等方法联合鉴定H1的基本生物学特性,RT-PCR方法检测未分化H1的生殖细胞分化相关基因的基本表达模式,分别以人正常睾丸组织和人胚胎成纤维细胞株HFF-1作为阳性和阴性对照组织。结果H1保持正常核型并维持未分化状态。未分化H1表达减数分裂前生殖细胞标志基因STELLAR、DAZL、FRAGILIS、PUM1、PUM2和GDF3;不表达原始生殖细胞(PGCs)标志基因BLIMP-1、减数分裂特异标志基因SCP1、减数分裂启动标志基因STRA8以及生殖细胞分化后期标志基因VASA。结论未分化H1细胞表达生殖细胞减数分裂前标志基因,但不表达分化后期基因,BLIMP-1可能成为区分未分化hES细胞与PGCs的特异性标志基因。
- 郭新秦洁唐爱发余振东桂耀庭蔡志明
- 关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞分化基因免疫荧光
- 不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞生殖细胞分化相关基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)分化形成拟胚体(embry-oid bodies,EBs)后生殖细胞分化相关基因表达的影响及机制。方法:mESCs分化形成EBs 3 d后接种于不同基质蛋白包被的培养皿中,包括人工基底膜(matrigel,M组)、纤维连接蛋白(fibronectin,F组)、层粘蛋白(laminin,L组)、胶原(collagen,C组)和非生物活性底物琼脂糖(agarose,A组),同时设不加任何基质蛋白的空白对照组(B组)。RT-PCR检测EBs在不同基质蛋白上d1～d4期间生殖细胞分化相关基因的表达,以及mESCs内源性基质蛋白FN(fibronectin)、LN(laminin)以及整合素受体β1基因的表达。结果:L组和F组EBs易贴壁分化,RT-PCR结果也证实原始生殖细胞(PGCs)分化基因Blimp-1、Stella、Mvh和减数分裂启动基因Stra8在L组和F组表达总体趋势为逐渐增强;M组和C组的表达趋势不明显;A组基因表达水平整体偏低;空白对照B组基因表达水平整体偏高但均呈下降趋势。L组和空白对照组细胞表达内源性基质蛋白FN、LN以及整合素受体β1。结论:层粘蛋白/β1信号途径可能对mESCs向PGCs分化具有指导作用,外源性层粘蛋白可能通过其受体β1亚单位传递诱导信号,调节mESCs来源的EBs向PGCs分化,FN可能通过其他整合素受体亚单位发挥作用。无任何外源性基质蛋白时,自身分泌的内源性基质蛋白也促进细胞分化。
- 郭新漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明
- 关键词：基质蛋白小鼠胚胎干细胞拟胚体原始生殖细胞
- 体外分化过程中小鼠拟胚体的细胞学特征及基因表达模式被引量：3
- 2008年
- 目的探讨小鼠胚胎干细胞来源的拟胚体(EBs)形成以及分化发育90d过程中的形态学特征及基因表达模式。方法将小鼠胚胎干细胞通过悬浮培养获得EBs,EBs在不添加其他诱导因子的体系中连续悬浮培养,采用形态学观察、免疫组织化学染色和RT-PCR检测EBs培养过程中的细胞发育分化特征和基因表达模式。结果将胚胎干细胞转移到去除白血病抑制因子(LIF)的悬浮培养液中培养24h左右即可形成EBs;培养3d左右,部分EBs出现简单胚体结构;在EBs分化7d左右,逐步向空腔化胚体发育;培养9d左右,EBs可发育为原始的囊性胚体结构;培养11d左右,EBs形成典型的、结构完整的三胚层结构。HE染色结果显示,发育早期的EBs包含大量尚未完全分化的ES细胞,随着培养时间的延长,EBs向空腔化、囊性胚体发育,逐渐形成类似于早期组织的形态。悬浮培养7周左右,EBs的发育分化基本停止。免疫组织化学染色结果表明,中胚层心肌细胞特异性标志蛋白cTnT,外胚层特异性标志蛋白Nestin在15d的EBs中表达呈阳性。RT-PCR检测也显示形成的EBs表达外胚层特征性基因Vimentin、Nestin,中胚层特征性基因Flk-1、Gata-1和内胚层特征性基因Transthyretin、-αfetoprotein。结论小鼠胚胎干细胞来源的EBs具有分化为3个胚层的能力,EBs形成的三维结构能够有效的启动细胞的分化;EBs来源的三胚层细胞的发育分化时序和特征,将为鉴定胚胎干细胞来源的分化细胞提供重要参照。
- 秦洁郭新张键荣桂耀庭蔡志明
- 关键词：胚胎干细胞拟胚体分化小鼠
