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国际科技合作与交流专项项目(2010DFA32100)

作品数:1 被引量:0H指数:0
相关作者:杨金华周双宬许斌赵艳丰瞿涤更多>>
相关机构:复旦大学上海医学院南京医科大学第二附属医院更多>>
发文基金:国际科技合作与交流专项项目南京医科大学科技发展基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇蛋白
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇乙型
  • 1篇联蛋白
  • 1篇膜联蛋白
  • 1篇抗体
  • 1篇抗体制备
  • 1篇克隆
  • 1篇克隆表达
  • 1篇肝炎
  • 1篇肝炎病毒
  • 1篇病毒

机构

  • 1篇南京医科大学...
  • 1篇复旦大学上海...

作者

  • 1篇闫梁
  • 1篇贲海静
  • 1篇瞿涤
  • 1篇赵艳丰
  • 1篇许斌
  • 1篇周双宬
  • 1篇杨金华

传媒

  • 1篇中华生物医学...

年份

  • 1篇2012
1 条 记 录,以下是 1-1
排序方式:
鸭膜联蛋白2cDNA的克隆表达及抗体制备
2012年
目的克隆樱桃谷鸭膜联蛋白2(AnnexinA2)并制备抗体,用于鸭AnnexinA2蛋白的表达分析。方法采用RT-PCR方法从鸭肝脏组织中克隆鸭AnnexinA2eDNA序列,将该cDNA序列亚克隆到原核表达载体pET-28a(+),构建重组原核表达载体pET-28a(+).AnnexinA2。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导AnnexinA2重组质粒原核表达,应用镍柱纯化AnnexinA2融合蛋白。腹腔注射AnnexinA2融合蛋白免疫小鼠,采用免疫印迹鉴定小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体并检测鸭原代肝细胞在培养12、24、72h以及120hAnnexinA2蛋白表达情况。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+).AnnexinA2,经NcoI和XhoI双酶切,琼脂糖凝胶电泳显示5369bp和1020bp条带,重组质粒测序结果显示重组序列正确。IPTG诱导重组质粒表达产生相对分子质量为36000的可溶性融合蛋白。AnnexinA2融合蛋白免疫小鼠,获得的抗血清1:2000稀释经免疫印迹仍能检测到靶蛋白,获得的小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体可应用于鸭原代肝细胞表达检测,AnnexinA2蛋白在鸭原代肝细胞培养12、24、72h以及120h均有表达。结论制备了小鼠抗鸭AnnexinA2多克隆抗体,可为探讨AnnexinA2影响鸭乙型肝炎病毒感染分子机制提供实验依据。
赵艳丰闫梁许斌贲海静杨金华周双宬瞿涤
关键词:多克隆抗体肝炎病毒乙型
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