中国博士后科学基金(20090450039)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：李宁李秋艳周光斌孟庆勇丁方荣更多>>
- 相关机构：中国农业大学四川农业大学吉林大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- ICR小鼠胚胎干细胞建系初步研究被引量：3
- 2012年
- 实验旨在探讨消化方式和胚胎发育阶段对ICR小鼠胚胎干细胞(ES细胞)建系效率的影响。ICR小鼠3.5 d囊胚在饲养层上贴壁后采用单一酶消化或机械化与酶消化法相结合分离隆起的细胞集落,进行传代培养;然后选择二者中较优消化方式对不同发育时期囊胚所形成的细胞集落进行处理。结果表明:采用机械化与胰酶消化相结合的方式,形成的类ES细胞超过7代的比率(85.0%)要显著高于单一的胰酶消化(15.0%)(P<0.05);当用二者相结合的方式对ICR小鼠3.5 d(早期囊胚)、4.0 d(扩张囊胚)和4.5 d(孵化囊胚)所形成的细胞集落进行消化传代培养,三者在贴壁率和形成原代细胞集落率上均无显著差别(P>0.05),但传代超过7代的效率上早期囊胚和扩张囊胚均高于孵化囊胚(P<0.05)。结果提示,采用机械化与酶消化法相结合更适合于3.5～4.0 d ICR小鼠囊胚的ES细胞建系。
- 周光斌孟庆勇丁方荣戴蕴平李秋艳李宁
- 关键词：胚胎干细胞细胞培养碱性磷酸酶ICR小鼠
- 猪孤雌胚胎干细胞建系的研究被引量：2
- 2012年
- 以猪孤雌激活囊胚为材料,囊胚透明带消化后采用全胚培养,培养液中添加不同培养成分或因子(如FGF2,LIF,2i等),以及选择不同的初始培养液体积来筛选猪胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)建系的优化培养体系。囊胚内细胞团形成的细胞集落采用胰酶消化传代。结果显示:透明带消化后,囊胚贴壁率显著升高(19.4%vs.8.8%)(P<0.05);初始培养液体积比平常培养液体积(0.30mL/孔,24孔培养板)减半条件下,能显著提高其贴壁率(91.7%vs 20.0%)(P<0.01),而且获得了可传至7代的类ES细胞系2株,碱性磷酸酶染色成阳性;当用2i因子(CHIR99021和PD03025901)去替代培养液中的FGF2,囊胚贴壁率(29.4%vs 53.3%)和原代集落形成率(20.0%vs 87.5%)反而显著下降(P<0.01)。这表明培养液添加了FGF2和LIF(不含2i因子),用24孔板培养,最初培养体积为0.15mL,透明带消化的培养体系比较适合猪孤雌激活胚的ES细胞建系。
- 周光斌孟庆勇王弘李秋艳赵志辉李宁
- 关键词：孤雌激活胚胎干细胞细胞培养碱性磷酸酶
