卫生部科学研究基金(Wkj2005-2-027)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：刘政朱晓娟冯振卿万佳艺孙慧更多>>
- 相关机构：南京医科大学第二附属医院南京医科大学江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝细胞癌人源抗c-Met抗体Fab的筛选及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的从大容量人源Fab抗体库中筛选全人源抗c-Met抗体，并对抗体与肝癌细胞的结合活性进行初步鉴定。方法利用Met-Fc融合蛋白对大容量人源Fab抗体库进行固相筛选，经过5轮固相筛选，随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法差减鉴定，阳性克隆进行可溶性表达；用c-Met表达阳性的人肝癌细胞株鉴定抗c-Met抗体Fab的结合活性。结果Western blot、免疫荧光结果显示，c-Met分子表达于SMMC721、BEL7402人肝癌细胞膜上；从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗c-Met抗体Fab（AM2-26），经免疫共沉淀、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析，结果显示AM2-26与人肝癌细胞表面c-Met分子有较好的结合活性。结论从人源Fab抗体库中筛选的AM2-26能够与肝癌细胞表面c-Met分子特异性结合，为研制用于肝癌生物治疗的靶向药物，提供了候选分子。
- 孙慧万佳艺朱晓娟焦永军朱进冯振卿刘政
- 关键词：肝细胞受体蛋白质酪氨酸激酶类
- 重组免疫毒素抗c-Met/PE38KDEL免疫毒素的构建、表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 目的:构建绿脓杆菌外毒素PE38KDEL融合全人源抗c-Met单链抗体原核表达载体,并对其产物进行变性、复性和纯化,检测其对肝癌细胞系的毒性作用。方法:以从人源天然Fab抗体库中筛选出的AM2-26克隆作为模板扩增出人源c-Met单链基因,采用基因工程原理,将扩增出的c-Met单链基因和PE38KDEL基因克隆入pBAD/GⅢA表达载体中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确;转化大肠杆菌Top10F′,左旋阿拉伯糖诱导表达,采用镍离子螯合层析法纯化变性的包涵体样品,并用连续梯度透析的方法对纯化后的包涵体进行复性;采用流式细胞术鉴定复性产物与靶细胞的结合活性,MTT法检测c-Met/PE38KDEL免疫毒素对肝癌细胞的体外杀伤活性。结果:成功构建了免疫毒素表达载体pBAD/GⅢA/c-Met/PE38KDEL;诱导产物主要以包涵体形式存在;复性后的免疫毒素c-Met/PE38KDEL具有与靶细胞特异性结合的活性并且对SMMC7721细胞系具有较明显的杀伤作用。结论:全人源抗c-Met单链抗体与PE38KDEL重组免疫毒素的成功表达纯化及对人肝癌细胞系的试验结果,为进一步肝癌的导向治疗提供依据。
- 朱晓娟冯振卿朱进张秀华缪林季国忠范志宁刘政
- 关键词：C-METPE38免疫毒素肝细胞癌
- 人源天然Fab噬菌体抗体库的构建及抗c-Met抗体的筛选、鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:构建大容量人源天然Fab噬菌体抗体库,筛选抗c-Met特异性抗体并进行初步鉴定。方法:采集20位健康成人的骨髓淋巴细胞,用PCR扩增人Fab片断抗体基因,插入载体pComb3XSS内,构建人源天然Fab抗体库。以固相化的抗原对抗体库进行6轮筛选后,随机挑选60个克隆用Phage ELISA、BstOⅠ酶切片断分析进行检测,阳性克隆作可溶性表达和鉴定。结果:构建的Fab噬菌体抗体库的库容为1.2×109,从中筛选到1株与c-Met特异性结合的人源抗体克隆,命名为AM2-26。DNA序列分析证明为人免疫球蛋白可变区基因,Western blot证实为人源抗c-Met Fab抗体片段,ELISA特异性鉴定阳性。结论:构建了大容量人源天然Fab抗体库,从中获得1株抗c-Met人源Fab抗体片段,有望为抗肿瘤药物的研制提供新的候选分子。
- 万佳艺孙慧焦永军朱晓娟朱进刘政冯振卿
- 关键词：C-MET噬菌体抗体库FAB片段
