国家重点基础研究发展计划(G2000057002)
- 作品数：20 被引量：74H指数：5
- 相关作者：程和平沈建新林仲翔韩太真张志谦更多>>
- 相关机构：北京大学西安交通大学汕头大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胚肺成纤维细胞WI-38中AngⅡ信号转导途径的研究被引量：2
- 2003年
- 本文采用免疫荧光染色、凝胶阻滞电泳(EMSA)和Western blot等方法,观察AngⅡ刺激人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38细胞前后,细胞中信号转导子和转录激活子STAT3、STAT1的活化状态,进而了解AngⅡ的信号转导通路。结果显示AngⅡ通过其AT1受体诱导WI-38细胞中STAT3、STAT1的磷酸化,形成以磷酸化的STAT3同源二聚体SIF-A为主的复合物,并转位入核与DNA结合,参与调控基因的表达;AngⅡ的作用存在量效及时效效应,10-3mmol/L的AngⅡ刺激60min能最强诱导WI-38细胞STAT3、STAT1的活化。因此JAK/STAT途径参与介导了 An-gⅡ在WI-38中的信号转导。
- 王小丹陈香美冯哲傅博周峰洪权樊代明
- 关键词：ANGII信号转导途径血管紧张素II
- α-catenin/GST融合蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：2
- 2001年
- 目的 制备α catenin多克隆抗体 ,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法 PCR扩增编码人α cateninC 端 45 5个氨基酸的DNA片段 ,DNA重组入原核表达质粒pGEX 4T 3,转化大肠杆菌JM10 9菌株 ,异丙基 β D硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST α catenin融合蛋白。GST Sepharose亲和层析纯化可溶性融合蛋白 ,免疫新西兰白兔 ,制备抗血清。通过ELISA、免疫荧光细胞化学和SP免疫组织化学法鉴定血清特异性和效价。 结果 成功地构建了pGEX 4T 3 α Cat表达载体 ,转化JM10 9后可高效表达融合蛋白GST α catenin(α Cat)。免疫兔产生的α Cat多抗可特异检测人体组织和细胞中α Cat表达及定位情况。 结论 α catenin抗体效价高 ,特异性强 ,适合免疫组织化学。
- 马忠良王冰晶林仲翔林本耀张志谦
- 关键词：Α-CATENIN融合蛋白多克隆抗体GST
- 基质金属蛋白酶-2C端片段PEX的原核表达及其对血管发生的抑制作用被引量：12
- 2002年
- 为了克隆表达鸡的基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )的C端片段PEX ,并探讨其对血管发生的抑制作用 ,利用RT PCR从鸡胚成纤维细胞克隆MMP 2C端片段PEX ,构建原核表达载体pCal n PEX ;转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLys,异丙基β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生PEX融合蛋白 ,包涵体蛋白用盐酸胍法变性、复性 ;生长曲线观察PEX融合蛋白对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响 ;鸡胚绒毛尿囊膜血管发生实验研究其对血管发生的抑制作用 .结果表明融合蛋白CBP/PEX具有抑制人脐静脉血管内皮细胞的生长和鸡胚绒毛尿囊膜血管发生的作用 .提示PEX是有待进一步开发的潜在抑制血管发生的药物 .
- 李金萍张光谋柯杨林本耀赵威胡颖宁涛林仲翔张志谦
- 关键词：MMP-2血管发生基质金属蛋白酶-2原核表达
- Thapsigargin对心肌细胞钙释放和肌浆网钙容量的时间效应被引量：4
- 2004年
- [目的]肌浆网钙泵抑制剂thapsigargin(TG)常被用于耗减肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)的钙容量。本课题旨在探讨TG(100 nmol·L-1)对源自SR的胞内钙释放和SR钙容量耗减的时间效应以及SR内钙对SR钙释放的调节机理。[方法]局部场刺激作用于成年大鼠心肌细胞,使其产生动作电位,进而诱发胞内钙瞬变(action-potential-induced Ca2+ transients,ACT)。由ACT可估测胞内钙释放。SR钙容量可由咖啡因(20 mmol·L-1)诱发的钙瞬变(caffeine-induced Ca2+ transients,CCT)估测。实验结果用激光共聚焦显微镜系统记录。[结果]TG对ACT峰值(可衡量钙瞬变的大小)的时间效应如下:0 min,5.55±0.28(单位为标准钙荧光强度即F/F0,F0为静息钙荧光强度);10 min,4.89±0.36;17 min,2.58±0.38;25 min,2.11±0.19;35 min,2.22±0.17;50min,2.27±0.27。TG对CCT峰值的时间效应如下:0 min,6.73±0.17;10 min,6.60±0.59;17 min,6.24±0.44;25 min,3.99±0.28;35 min,2.24±0.37;50 min,1.14±0.01。以CCT为自变量,ACT为因变量的曲线呈“J”形。[结论]TG对心肌胞内钙释放和SR钙容量呈非线性的时间依赖效应。SR内钙部分耗减即可明显减少钙释放,说明SR内钙对胞内钙释放具有重要的调节作用。
- 沈建新王世强程和平韩太真
- 关键词：THAPSIGARGIN细胞肌浆网钙离子
- 心肌细胞钙火花被引量：4
- 2005年
- 心肌细胞钙火花是肌浆网上一个或几个成簇状分布的RyR所产生的局部钙释放,可通过单个L 型钙通道开放所触发或自发发放。钙火花呈随机发放,出现在Z线附近,其动力学特征受多种因素的调节。此外,T 型钙电流、Na+ /Ca2+交换、ICa(TTX)和IP3 等也是钙火花触发的来源。
- 张广钦程和平
- 关键词：钙火花心肌细胞
- L型Ca^(2+)通道自发激活对静息心肌细胞钙火花的影响被引量：2
- 2003年
- 钙火花是心肌细胞肌浆网Ca^(2+)释放的基本单位。为了研究L型Ca^(2+)通道自发开放对心肌细胞钙火花的影响,实验使用激光共聚焦扫描显微镜和Ca^(2+)荧光探针Fluo-4,在大鼠心肌细胞上观察局部钙火花的发放。结果表明,0.2mmol/L CdCl2通过阻断L型Ca^(2+)通道,使自发性钙火花的发放频率从给药前的4.20下降到给药后的2.04个/(100μm·S),但不影响火花的时空特性。对Cd^(2+)敏感的钙火花进行分析,推测在静息膜电位下(-80mV),L型Ca^(2+)通道的开放概率约为10^(-5)。因此,在静息心肌细胞中,L型Ca^(2+)通道低频随机开放对自发性钙火花的产生及细胞钙稳态调节有重要影响。
- 张广钦付昱阳冬梅郝雪梅白淑华汤依群E.G.Lakatta程和平
- 关键词：心肌细胞钙火花钙释放激光共聚焦扫描显微镜
- 细胞复制衰老过程中STAT3的变化及血管紧张素Ⅱ对STAT3活性的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 研究细胞复制衰老过程中 JAK/STAT信号转导系统中 STAT3的变化及血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对STAT3活性的调节作用。方法 选用人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38细胞株,通过β-半乳精苷酶(β-gal)染色并测定其活性来鉴定衰老细胞;采用凝胶阻滞电泳(EMSA)和Western印迹观察细胞复制衰老过程中STAT3的变化及Ang Ⅱ对STAT3活性的影响。结果 细胞复制衰老过程中STAT3蛋白合成增多,磷酸化的STAT3转位入核减少,近而与DNA结合活性下降;Ang Ⅱ通过其AT_1受体诱导年轻和衰老细胞STAT3的活化,年轻和衰老细胞STAT3蛋白含量无明显变化,p-STAT3均有增加,但年轻细胞 p-STAT3增加速率高于衰老细胞,衰老细胞对 Ang Ⅱ的反应性弱于年轻细胞。结论细胞复制衰老过程中STAT3活性降低,阻滞部位可能发生在核转位;Ang Ⅱ能够诱导年轻和衰老 WI-38细胞STAT3的活化,但衰老细胞对Ang Ⅱ诱导STAT3活化明显障碍。
- 王小丹陈香美周峰傅博洪权冯哲王建中樊代明
- 关键词：STAT3衰老
- 心肌细胞兴奋-收缩偶联的微观机制被引量：5
- 2004年
- 心肌细胞的兴奋 收缩偶联 (ECC)本质上是胞膜上的电压门控L 型钙通道 (LCCs)和胞内ryanodine受体 (RyRs)之间通过钙诱导钙释放 (CICR)机制进行沟通进而引发肌细胞收缩的过程。最近的研究进一步揭示了微观水平上LCCs和RyRs之间的信息联系。在钙偶联位点 (couplons)上 ,LCCs因膜去极化而随机开放 ,在局部产生高强度的钙脉冲 (即钙小星 ,Ca2 + sparklet) ,作用于邻近肌质网终末池上的RyRs。钙偶联位点通过由钙小星随机激活的RyRs(即钙释放通道 )以钙火花 (Ca2 +spark)的形式释放钙。这些钙在全细胞水平上总和即形成钙瞬变 (Ca2 + transient)。因此 ,钙小星触发钙火花就构成了ECC中的基本事件。本文重点阐述LCCs和RyRs分子间的信号转导机制 ,也即从微观水平上探讨CICR及ECC的形成机制。
- 沈建新韩太真程和平
- 关键词：钙火花心肌细胞
- v-fos转化效应因子是CD2胞内区新的结合蛋白
- 2006年
- 在以前的研究中,本实验室采用酵母双杂交技术,从人KT3T淋巴细胞cDNA文库中筛选到一个与CD2胞内区结合的新的蛋白分子,称为v-fos转化效因子(v-fostransformationeffector,Fte-1).本研究进一步分析鉴定了Fte-1与CD2相互作用的分子机制和Fte-1的生物学功能.应用研究生物大分子相互作用的生物传感器分析了CD2胞内区与Fte-1结合特性和亲和力,表明二者确为特异性结合,其解离常数KD值为10?7mol/L;分子缺失突变和体外磷酸化实验结果表明,Fte-1可被蛋白激酶C(PKC)磷酸化,其磷酸化位点为Ser238;基因表达研究显示,在JurkatT淋巴细胞白血病细胞中Fte-1呈簇集性分布;CD2单克隆抗体T11刺激JurkatT淋巴细胞后,Fte-1这种簇集性分布特征消失,而趋向细胞膜,并与CD2共定位于细胞膜区域;Fte-1的PKC磷酸化位点Ser238突变为Gly238后,其与CD2分子的共定位能力丧失,表明Fte-1的Ser238的PKC磷酸化对Fte-1和CD2在T淋巴细胞内的结合起关键作用;使用Fte-1干扰RNA技术抑制Fte-1在JurkatT淋巴细胞中的表达,可抑制佛波酯(PMA)和离子霉素(ionomycin)引起的JurkatT淋巴细胞激活后凋亡,提示Fte-1参与了CD2对T淋巴细胞凋亡的调节.上述结果进一步确证Fte-1是CD2胞内区的特异结合蛋白,并可能参与了CD2介导的细胞凋亡信号传递.
- 李明张伟伦刘士廉刘彦信郑德先
- 关键词：CD2结合蛋白蛋白激酶C磷酸化
- 自发永生性转化人胚肺上皮细胞系HLEC的建立及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的 对源自人胚肺组织原代培养、形态似上皮类型的细胞系———人肺上皮细胞(HLEC)的生物学特 性进行鉴定,为相关研究和应用提供模型和依据。 方法 分别采用相差显微镜下观察、细胞计数、β 半乳糖苷酶 染色、免疫荧光细胞化学。人Alu序列PCR扩增、染色体计数、软琼脂集落形成实验和裸鼠致瘤实验对HLEC的形 态学特征、生长特性、衰老状态、上皮细胞标志物、来源、细胞遗传学特点和恶性转化等生物学特性进行研究鉴定。 结果 HLEC角蛋白和上皮型细胞间黏附分子钙黏着素E cadherin免疫荧光染色阳性,染色体众数在41～44,人 Alu序列PCR扩增结果阳性,β 半乳糖苷酶阳性细胞的比例未见随细胞代数的增加而升高,软琼脂和裸鼠体内均不 生长,微丝及黏着斑结构正常。 结论 HLEC细胞具有永生化细胞特征、属相对正常人肺上皮亚二倍体细胞,可 用于肺癌癌变机理研究和癌细胞的相对正常对照。
- 张志谦胡颖王冰晶赵威林仲翔
- 关键词：人肺上皮细胞角蛋白
