国家自然科学基金(30471600)
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 相关作者：潘秀珍唐家琪王长军岳建华李先富更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京师范大学南京军区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源抗Rh(D)单链抗体基因的克隆和表达被引量：3
- 2006年
- 目的:构建人源抗红细胞Rh(D)抗原单链噬菌体抗体库。方法:应用噬菌体展示技术,从分泌抗Rh(D)抗体的细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,多次PCR扩增和克隆抗体可变区基因(VH/VLcDNA),经重叠延伸拼接(SOE)用编码连接肽(Gly4Ser)3的互补序列组成scFv基因,经酶切克隆入载体pCANTAB5E,使之呈现于噬菌体表面。使用完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,ELISA对所获抗体进行初步鉴定。结果:构建的噬菌体抗体库库容为1.2×107,噬菌体DNA中全长scFv基因的插入率为0.80,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为3×108pfu/ml的初级噬菌体抗体库。以完整Rh+型红细胞进行四轮淘汰筛选,出现特异性富集。经DotELISA实验鉴定,得到1株与Rh+型红细胞特异结合的scFv噬菌体抗体。结论:运用噬菌体抗体库技术构建了人源抗红细胞Rh(D)抗原的噬菌体抗体库,为进一步对所获克隆株进行序列分析、可溶性抗体表达和纯化奠定了基础。
- 岳建华潘秀珍王长军李先富唐家琪
- 关键词：噬菌体展示技术
- 分泌血型特异性抗体人B淋巴细胞系的建立被引量：3
- 2008年
- 目的:建立Epstein-Barr病毒(EBV)转化的分泌血型特异性抗体的永生化B淋巴细胞系。方法:采用EBV转化外周血B淋巴细胞,加入环孢素抑制T淋巴细胞,建立B血型人B淋巴细胞系(B-LCL),红细胞凝集试验检测细胞培养上清与血型红细胞结合活性。结果:共采集B血型健康人全血15份,成功转化12份,转化率为80%;获得9株分泌抗A抗体的人B淋巴细胞系。结论:建立了分泌抗A抗体B淋巴细胞系,为进一步研制人源血型特异性单克隆抗体奠定基础。
- 潘秀珍岳建华李先富王长军唐家琪
- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒B淋巴细胞血型
- 核糖体展示小分子抗体的研究进展
- 2006年
- 岳建华潘秀珍王长军唐家琪
- 关键词：核糖体展示技术小分子抗体蛋白相互作用高亲和力特异结合
- O型悬浮红细胞ABO抗体效价研究被引量：3
- 2008年
- 目的:测定O型悬浮红细胞ABO抗体效价,探讨未交叉配合O型悬浮红细胞紧急输注的安全性和可行性。方法:采集100份O型全血,分离制备成悬浮红细胞和血浆制品,测定全血、悬浮红细胞储存第1、7、14 d时的IgM、IgG抗A、抗B抗体效价,并进行比较。结果:全血IgM抗体效价主要分布于4～128,IgG抗体效价主要分布于16～256;悬浮红细胞IgM抗体效价主要分布于4～32,IgG抗体效价主要分布于8～128,与全血相比均明显下降(P<0.01)。悬浮红细胞储存第1、7、14 d间抗体效价虽有所下降,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论:O型悬浮红细胞的ABO抗体效价较低,推断其未经交叉配合的紧急输注也是安全的。
- 朱培元栾建凤洪萍姚根宏潘秀珍
- 关键词：悬浮红细胞抗体效价
- EBV转化B型健康人B淋巴细胞构建噬菌体抗体库被引量：4
- 2006年
- 目的构建人源抗红细胞A抗原单链噬菌体抗体库。方法应用EB病毒转化方法和噬菌体抗体库技术,从EB病毒转化成功的B型个体淋巴细胞中提取总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,PCR分别扩增VH和Vκ基因,经重叠延伸拼接法(SOE)组成ScFv基因并将其克隆入pCANTAB5E,转化E.coliTG1,加入辅助噬菌体M13KO7援救,构建人源抗红细胞A抗原单链噬菌体抗体库,并测定文库的库容、滴度及ScFv基因的插入率。使用完整A型红细胞对该库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,细胞ELISA、红细胞血凝实验对所获抗体进行初步鉴定。结果所构建的噬菌体抗体库,其库容为1.2×106,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为0.90,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为2.52×1010PFU/mL的初级噬菌体抗体库。以完整A型红细胞进行四轮淘筛,出现特异性富集。经细胞ELISA、红细胞血凝实验鉴定,得到2株与A型红细胞特异结合的ScFv噬菌体抗体。结论EB病毒转化方法联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库切实可行,可进行亲和筛选以得到人源抗红细胞A抗原的基因工程抗体。
- 岳建华潘秀珍王长军李先富唐家琪
- 关键词：EB病毒转化SCFV噬菌体展示技术
