国家自然科学基金(30471607)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 相关作者：邓宁向军俭王宏唐勇杨红宇更多>>
- 相关机构：暨南大学解放军第458医院暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组人源性抗HBsAg Fab抗体的肽质量图谱分析
- 2005年
- 重组人源性抗HBsAg Fab抗体具有较好的特异性和抗原结合活性,为了更好的阐明毕赤 酵母表达的重组人源性抗HBsAg Fab抗体的性质,用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)对重组Fab抗体的分子质量和肽质量图谱进行了分析。结果显示,毕赤酵母表达的重组 人源性抗HBsAg Fab抗体的分子质量为50678．49Da,与根据其一级结构计算的理论分子质量相 比多2763．84 Da,显示酵母表达的重组Fab抗体为糖蛋白。用胰蛋白酶酶解重组Fab抗体后进行 MALDI-TOF-MS分析显示,大部分的酶解肽段均能检测出来。结果表明毕赤酵母表达的重组Fab 抗体与预期的结构一致。
- 邓宁向军俭唐勇王宏
- 关键词：分子质量质谱
- 抗重组人bFGF单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达被引量：4
- 2007年
- 目的:从分泌抗重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株B2F3中克隆抗体可变区(V)基因,构建bFGF单链抗体(scFv),并进行可溶性表达。方法:从分泌bFGF mAb杂交瘤细胞株B2F3提取总RNA,用RT-PCR方法扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链的可变区基因(VL);再通过重叠延伸拼接(SOE)PCR方法,在VH和VL基因之间引入linker(Gly4Ser)3,构建bFGFscFv。将测序正确的scFv基因克隆到表达载体pCANTAB5E中,选择非抑制型菌株E.coli HB2151进行可溶性表达;经SDS-PAGE检测抗体表达水平,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序分析结果显示,VH基因序列全长375碱基对,编码125个氨基酸,VL基因序列全长399碱基对,编码133个氨基酸,二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有4个框架区(FR)、3个抗原互补决定区(CDR)及抗体特征性的2个半胱氨酸残基;构建的scFv全长789碱基对,编码263个氨基酸,连接结构为VH-linker-VL。SDS-PAGE分析表明scFv基因在大肠杆菌为可溶性表达,表达产物主要位于周质腔中,表达产物的Mr为27000,与理论预期值相符;间接ELISA检测结果显示原核表达的scFv具有与bFGF特异性结合的活性。结论:成功地克隆bFGF mAb可变区基因,并构建表达bFGF scFv,为下一步研究bFGF抗体人源化改造奠定实验基础。
- 王宏陈丹邓宁向军俭靳英杰黄红亮唐勇杨红宇
- 关键词：BFGF单克隆抗体可变区基因单链抗体
- 人工合成VEGF表位模拟7肽的生物学功能研究被引量：1
- 2005年
- 目的: 检测人工合成血管内皮细胞生长因子(VEGF)表位模拟 7肽特异抑制VEGF促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的活性。方法: 通过噬菌体展示技术, 筛选获得了表达模拟肽的阳性噬菌体克隆, 经测序得到VEGF表位模拟肽序列: GWYYDAX。人工合成该短肽, 用体外细胞培养的方法检测其对HUVEC的生长抑制作用。结果: 表位模拟肽GWYYDAX可剂量依赖性抑制VEGF促进HUVEC生长的活性。结论: VEGF表位模拟肽可能模拟了VEGF的部分结构, 竞争结合HUVEC细胞VEGF受体 (KDR), 阻断了VEGF VEGFR的信号传递而抑制细胞生长, 具有潜在的应用前景。
- 向军俭钟振东邓宁岑健宏杨红宇
- 关键词：噬菌体展示技术血管内皮细胞生长因子表位模拟肽
- 重组人源抗HBsAg Fab的糖基化分析被引量：3
- 2005年
- 目的:分析重组人源抗HBsAgFab的糖基化。方法:应用PAS糖染色法和经酶切糖苷酶H去糖基后,用MALDI-TOF-MS质谱仪对重组人源抗HBsAgFab的糖基化进行分析。结果:PAS染色法的结果显示,毕赤酵母(Pichiapastoris)表达的重组人源抗HBsAgFab呈淡红色。用质谱仪测定P.pastoris表达的经内切糖苷酶H去糖基后的重组人源抗HBsAgFab的相对分子质量(Mr),从50678.49降低到49245,相差1433.49(约相当于少了8个甘露糖基)。结论:P.pastoris表达的重组人源抗HBsAgFab,为一种具有生物活性的低糖基化的蛋白,为深入研究其性质及功能奠定了基础。
- 邓宁向军俭唐勇王宏粟宽源
- 关键词：HBSAGFAB糖基化毕赤酵母
- 人源性抗HBsAg单链Fab基因在酵母中的表达被引量：1
- 2005年
- 邓宁向军俭粟宽源
- 关键词：抗HBSAG单链酵母表达载体人源性抗体噬菌体抗体重叠PCR
- 人噬菌体抗体库的构建及人源性bFGF抗体的筛选被引量：4
- 2006年
- 目的选用含高效价碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体的自身免疫病患者外周血淋巴细胞为材料,构建人噬菌体抗体库,并从中筛选抗bFGF抗体克隆。方法收集自身免疫病患者外周血,提取淋巴细胞总RNA后逆转录得到cDNA第一链,经PCR扩增重链Fd段和轻链基因,分别构建到噬菌粒载体pComb3中,将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌XL1Blue,以辅助噬菌体VCSM13超感染,构建人噬菌体抗体库。经过3轮固相筛选,获得能结合bFGF的抗体克隆,并用ELISA进行进一步鉴定及筛选,获得具有高亲和力的抗bFGF噬菌体抗体克隆。结果构建的人源噬菌体抗体库库容为2.5×107,经3轮筛选获得具有bFGF特异性的Fab噬菌体抗体克隆。结论构建了人噬菌体Fab抗体库,并能够从中筛选出与bFGF特异结合的抗体克隆,为bFGF抗体药物研究奠定基础。
- 向军俭汤伟佳王宏邓宁杨红宇
- 关键词：噬菌体展示抗体库
- 自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的检测被引量：5
- 2005年
- 目的:探索自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的存在状况。方法:通过对封闭条件、酶标板类型及抗原用量等条件进行优化,建立了检测自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF抗体的ELISA检测方法。采用建立的最佳检测条件对395例自身免疫性疾病患者的血清进行了bFGF自身抗体IgG和IgM的检测。结果:在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、慢性肾炎、皮肌炎(DM)、不明原因发热(FOU)和特发性血小板减少紫癜(IPT)等患者血清中检测到了高滴度的抗bFGF的IgG、IgM自身抗体,各组的平均值和阳性率均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:在自身免疫性疾病患者体内广泛存在着bFGF的自身抗体,对bFGF自身抗体的调查研究将为自身免疫性疾病的机制的探讨奠定基础。
- 向军俭漆秋兰邓宁王彤歌王宏唐勇江振友
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子自身抗体ELISA自身免疫性疾病
- bFGF人源性抗体Fab段基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的用自身免疫病患者外周血淋巴细胞获得的bFGF人源性抗体Fab基因,构建编码人源性bFGF抗体Fab表达载体在大肠杆菌中表达,检测其结合抗原的活性。方法从筛选获得的噬菌体抗体质粒pComb3-Fab中,PCR再扩增出Fd段和κ链基因,克隆到pMD18-T载体中并测序,在NCBI/GenBank的Ig BLAST数据库进行BLAST序列分析。鉴定Fd段和κ链基因后,插入到表达载体pComb3H,切除geneⅢ,构建bFGF抗体Fab可溶性表达载体,并在XL1-Blue菌中表达。用SDS-PAGE、Western blot和ELISA方法鉴定表达产物。结果IgBLAST数据库进行BLAST序列分析结果显示,Fd-6、Fd-25、Fd-26的FWR区与数据库中人源抗体序列FWR区的同源性为95%、97.4%、94.3%,3个CDR区均为特异性序列,证实为人源性抗体Fd段和κ链基因。SDS-PAGE和Western blot检测到目标蛋白带。ELISA结果显示,表达产物Fab具有与重组人bFGF特异性结合活性,与Human TNF-α、Human IL-2均无交叉反应。结论插入到表达载体pComb3H的来源于人源性噬菌体抗体库的Fab基因证明为人源性抗体基因,该基因可在XL1-Blue菌株中可溶性表达,且具有特异结合抗原的活性。
- 邓宁关文达王宏黄建华唐勇杨红宇向军俭
- 关键词：BFGFFAB原核表达
