新疆维吾尔自治区高校科研计划(XJEDU2010S25)
- 作品数：1 被引量：7H指数：1
- 相关作者：马海梅祖力皮也·吐尔逊丁剑冰朱明马秀敏更多>>
- 相关机构：新疆医科大学第一附属医院新疆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高校科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细粒棘球绦虫重组BCG-EgG1Y162菌株的构建和表达被引量：7
- 2013年
- 目的构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。方法通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(E.coli)-分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV361重组,并转化E.coli后进行扩增。重组质粒pMV-EgG1Y162经PCR和双酶切鉴定后,进行测序。将鉴定正确的rpMV-EgG1Y162通过电穿孔技术转化至感受态BCG菌株中,构建rBCG-EgG1Y162。经PCR和双酶切鉴定正确后,扩增培养2周,并于45℃放置30 min,诱导目的蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达情况,并以兔抗原核表达重组蛋白EgG1Y162血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果重组质粒rpMV-EgG1Y162经PCR扩增和双酶切后,均获得约360 bp的EgG1Y162目的基因片段,与预期片段长度一致,测序结果表明插入序列正确。将其通过电穿孔转化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生长良好,经酶切和PCR鉴定正确。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的表达产物的相对分子质量(Mr)约为71 000。结论构建和表达了细粒棘球绦虫rBCG-EgG1Y162菌株。
- 祖力皮也·吐尔逊德力夏提·依米提曹春宝马海梅李玉娇周晓涛朱明马秀敏温浩丁剑冰
- 关键词：细粒棘球绦虫重组卡介苗
